海南廣藿香青枯病原菌分布的調查與分析*

楊春雨 ，張 爭 ，魏建和 ，，馮錦東 ，甘炳春 ，楊新全

（1.中國醫學科學院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護與開發重點實驗室，海南 萬寧 571533；2.中國醫學科學院藥用植物研究所，北京 100094）

廣藿香是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分，以葉、梗入藥，味辛，性微溫，歸脾、胃、肺經，功能芳香化濕、和胃止吐、祛暑解表，主治濕阻中焦之脘腹痞悶、食欲不振、嘔吐、泄瀉，外感暑濕之寒熱頭痛，濕溫初起的發熱身困、胸悶、惡心，鼻淵，手足癬[1]。廣藿香是海南重點開發的南藥品種，經多年努力，其種植已具有相當規模，也形成了完整的產業鏈。但廣藿香會發生一種青枯病，造成大量死株，嚴重影響單產，從而威脅到廣藿香產業的生存與發展。筆者從地域到植株方面對廣藿香青枯病病原菌的分布進行了調查統計和分析，現報道如下。

1 設備與材料

etrex GARMIN GPS手持機（北京合眾思壯公司）；D-1型自動蒸汽滅菌鍋（北京發恩科貿有限公司）；RXM智能型人工氣候箱（寧波市科技園區新江南儀器有限公司）；SW-CJ-1D型凈化工作臺（蘇州凈化設備有限公司）。廣藿香（海南省萬寧市廣藿香種植區）。

2 方法與結果

2.1 廣藿香青枯病的癥狀、病原菌及病株分級標準

癥狀及病原菌：開始發病時，部分葉片萎垂，逐漸發展到整株調萎，最后死株。病原菌為青枯假單胞桿菌[Pseudomonas solanacearum（Smith）Smith.]，生物變種為3個。該病原菌落為非正圓形，稍突起，有光澤，帶黏性，乳白色，中央桃紅，具流動性。菌體為桿狀，兩端鈍圓，多數單個，也有成雙排列；細菌有運動性，菌體大小為 0.4～0.6×0.9～1.4 μm，鞭毛極生，1～3根；主要寄主范圍為廣藿香、番茄、茄子、辣椒、馬鈴薯、煙草、花生、芝麻和絲瓜。菌體適合培養條件為溫度32℃、相對濕度80%～85%，培養基為TZC葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基、金氏B培養基[2]等。

病株分級標準：病害葉片少于10%為1級，病害葉片11%～20%為2級，病害葉片21% ～50%為3級，病害葉片51% ～80%為4級，病害葉片大于81%（至死亡）為5級。

2.2 病原菌分布區域與發病率調查

廣藿香苗木種植株距為40 cm，調整每步約為40 cm，用步數丈量田間畦長，計算每畦株數，記為調查總株數；再點發病株的數量，記為發病株數。發病率（%）=（發病株數/調查總株數）×100。

2008年4月14日至15日，筆者對海南萬寧地區廣藿香種植區進行了全面調查，發現每個種植點都有廣藿香青枯病發生。同時，隨機調查了大茂鎮乳園村、禮紀鎮清溪村、長豐鎮下李村和福田溝土村、南橋鎮龍貢灣村等4個鄉鎮9個種植點，共隨機調查了廣藿香10 759株，其中正常植株有8 964株，發病植株有1 795株，平均發病率為16.68%。結果見表1。可見，在萬寧市每個種植區都有廣藿香青枯病發生，分布沒有地域選擇性。

表1 海南萬寧地區廣藿香青枯病發病率調查結果表

2.3 病原菌在植株上的分布調查

主干：采樣植株分為正常株和病株，取根基部1～2 cm，主干中部1～2 cm和主干頂部1～2 cm，以75%酒精浸泡1 min消毒，用滅菌刀將樣本從中間破開，在樣本切面上扎幾次，然后用刀在KBA（TZC）平板培養基上點刺接種。在32℃和85%相對濕度條件下培養24～48 h，觀察培養結果。若刺點無色，則說明沒有廣藿香青枯病病原菌；若出現桃紅色斑點，再經過鑒定為廣藿香青枯病原菌則確定為帶菌點。在廣藿香種植區進行隨機采樣，共采集1 832株，其中正常株763株，帶病株1 069株（病株分級為1～2級），調查結果見表 2。可見，表 2 中，若把 C，D，E 歸為甲組，F，G，H 歸為乙組，則C對F，D對G，E對H在數值上都是反向對應項。反向對應項的百分率在各自組（甲組、乙組）中應該表現為，若一個相對較高，另一個則應相對較低，反之亦然。但統計結果并非完全如此，說明所統計的數據是沒有規律的。因此，廣藿香青枯病病原菌在正常植株主干及1～2級病株主干上的分布均是隨機的。

表2 海南萬寧地區廣藿香青枯病病原菌在主干上的分布調查結果[株（%）]

莖、葉：采樣植株分為正常株和病株，隨機采取帶葉片的節點1～2 cm，連同該莖上的葉柄和葉片。消毒方法同主干采樣。用0.55×20型號的滅菌注射針頭，分別在莖、葉柄和葉片（葉脈）上多扎幾次，然后于KBA（TZC）平板培養基上點刺接種。培養和檢測方法同主干采樣。在廣藿香種植區進行隨機采樣，共采集1 988個莖、葉樣本，其中正常植株莖、葉樣本788個，帶病植株莖、葉樣本1 200個（病株分級為1～2級）。統計結果見表3。可見，在表3中，都是b項的百分率最高；而且用表2分析方法進行分析，結果也是無規律的。說明表3中的統計數據是無規律的。因此，廣藿香青枯病病原菌在正常植株、1～2級病株的莖及其葉上的分布均是隨機的。

表3 海寧萬寧地區廣藿香青枯病病原菌在莖、葉上的分布調查結果[株（%）]

3 討論

在針刺和刀刺采菌過程中，由于菌體小，刺采面積不完全，刺到菌的幾率沒有達到100%，故實驗誤差可能存在。但由于取樣數量大，結果基本上能反映廣藿香青枯病病原菌分布的真實情況。調查結果顯示，在海南省萬寧市廣藿香青枯病的平均發病率為16.68%；病原菌的分布沒有地域選擇性；在正常和大體正常（1～2級病株）廣藿香植株的分布是隨機的，沒有器官選擇性。筆者認為，既然廣藿香青枯病原菌植株分布是隨機的，用本方法在植株上檢測不到病原菌，但并不等于它們不存在，那么不能得出正常植株帶菌率的統計結果。本次調查結果表明，海南廣藿香青枯菌與廣藿香青枯病之間的關系比較復雜，帶菌植株不一定發病。對于1～2級廣藿香青枯病植株，若能及時治療，則可恢復正常，因此將1～2級病株歸入“大體正常植株”，與正常植株一起作調查統計。

[1]中醫藥管理局《中華本草》編委.中華本草（第7冊）[M].上海：上海科學技術出版社，1999：130-134.

[2]文衍堂，鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學報，1984（2）：113-120.