連翹-阿莫西林的急性亞急性毒性試驗

邊 棟,崔 陽,崔 琳,李明雁,李艷華

(東北農業大學動物醫學學院,黑龍江哈爾濱150030)

細菌耐藥性一直是全球關注的問題,由于阿莫西林的廣泛應用及不合理使用,導致臨床常見的病原菌產生嚴重的耐藥性,給動物的健康帶來極大的威脅。為此,國外研究人員已經開始研究耐藥性抑制劑,如利血平、氰氯苯腙等,雖然對耐藥性均有一定的抑制作用,但它們本身的毒性也較大。因此,研究低毒、有效的耐藥性抑制劑具有廣泛的應用價值和良好的前景,在國際上越來越受到重視。中藥是我國特有的天然資源,在治療感染、逆轉腫瘤細胞耐藥性等方面顯示了獨特的作用,這提示我們可以在中藥[1]中尋找既有對耐藥菌株有效又無毒副作用或毒副作用較低的藥物。連翹屬金絲桃屬藤黃科多年生草本植物,全草可入藥。連翹具有清熱解毒、收斂止血、利濕之功效。

基于尚未見到連翹-阿莫西林復方藥物安全性評價的報道,故按照農業部新獸藥一般毒性試驗技術要求[2]進行了其急性毒性試驗和亞急性毒性試驗研究,為開發新藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 清潔級昆明系小鼠80只,體重20±2 g,雌雄各半,購自中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所。

1.2 試驗藥物 阿莫西林原粉購自武漢凱通精細化工有限責任公司,連翹原粉購自四川省什邡市宏升植物原料有限公司。

1.3 化學試劑 用于測定 GPT、GOT、AKP、肌酐和尿素氮的試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 試驗儀器 BT224S型電子天平,WD-9403C型紫外分光光度計,DH6000A型恒溫箱。

1.5 試驗方法

1.5.1 急性毒性試驗預試驗 每次分別取兩只小鼠,根據上下法[2],首次給予2 000 mg/kg藥物,如果全死則降低劑量,如果全活則增加劑量,觀察出現的癥狀并記錄死亡數,找出引起0%及100%死亡率的劑量。因給予4 000 mg/kg濃度藥物時,死亡率仍為0%,只能測得最大耐受量。

1.5.2 亞急性毒性試驗 將小鼠80只隨機分為4組(高劑量組、中劑量組、低劑量組及對照組)[3],每組20只,雌雄各半,前3組分別給予濃度為40 g/kg、13.33 g/kg和4 g/kg的藥物,對照組不加藥物。各組均自由采食。分別在給藥第7天和第14天時,對各組小鼠進行器官系數[4]、器官含水量、血常規檢驗、肝功與腎功能檢查。

2 試驗結果與分析

2.1 性毒性試驗結果 小鼠未出現因藥物作用而導致的死亡。測得最大耐受量為40 g/kg。

2.2 亞急性試驗結果

2.2.1 連翹-阿莫西林復方藥物對體重的影響 試驗中各組小鼠給藥后的表現與急性試驗基本一致,給藥期間小鼠未出現因藥物作用而導致的死亡情況。各組小鼠均有不同幅度的體重增加,各劑量組和對照組小鼠體重進行統計學分析(t檢驗),結果表明給藥后3個劑量組的小鼠體重變化幅度與對照組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.2.2 小鼠的器官系數與器官含水量 給藥后第7天和第14天,各劑量組小鼠的各器官系數差異均不顯著(P＞0.05);給藥第7天,各劑量組小鼠器官的含水量差異均不顯著(P＞0.05);給藥第14天,中劑量組的心臟含水量差異顯著,其余均不顯著。

2.2.3 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生理指標的影響 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生理指標的影響結果見表1。通過對試驗數據進行統計學分析(t檢驗)表明,3個劑量組小鼠的血紅蛋白(Hb)、紅細胞數(RBC)、中性粒細胞百分比(wlcr)、淋巴細胞百分比(w-scr)與對照組間差異均不顯著(P＞0.05)。

2.2.4 連翹-阿莫西林復方制劑對小鼠血液生化指標的影響 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生化指標的影響結果見表2。對試驗數據進行統計表明:第14天,高劑量組谷草轉氨酶(GOT)差異顯著(P＜0.05),其他生化指標未見各劑量組與對照組之間差異有統計學意義(P＞0.05)。

2.2.5 小鼠的病理組織學變化 分別在第7天和第14天對各組小鼠進行病理組織學檢查,病理切片結果顯示,病理組織變化和數據反應的基本吻合,有少數切片出現淤血現象,無明顯的病理變化。

表1 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生理指標的影響

表1 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生理指標的影響

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表2 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生化指標的影響

3 討論

從連翹-阿莫西林急性毒性試驗結果可知,小鼠沒有因藥物致死現象,未測出半數致死量(LD50),測定最大耐受量,故短期給藥安全性很高。

從亞急性毒性試驗結果可知,各劑量組體重均增加,但劑量組的體重變化幅度與對照組相比較差異不顯著,表明藥物對小鼠的食欲及健康狀況的影響并不顯著。與對照組比較,血紅蛋白、紅細胞數、白細胞數、中性粒細胞百分數和淋巴細胞百分數同對照組的上述指標比較差異均不顯著,因血液成分的檢測是檢驗藥物毒性的一個重要指標,故判斷藥物的毒性比較低。血液生化指標中,除了第14天的谷草轉氨酶測定項的高劑量組出現了差異顯著(P＜0.05)外,其他各劑量組的血液生化指標均無明顯差異,因轉氨酶是反映肝臟功能的重要指標,且只有肝臟受到嚴重傷害時谷草轉氨酶才會出現偏高,這表明高劑量長期給藥對肝臟的毒性較大,低、中劑量組比較安全。劑量組與對照組的器官系數分析差異不顯著,對各劑量組小鼠的臟器,如心、肝、脾、肺、腎、腦的組織切片進行觀察,切片顯示與上表數據反映相吻合,出現的部分臟器的淤血現象是由于采集時所致,進一步證實了該藥物的安全性很高。綜上所述,連翹-阿莫西林復方藥物的毒性很低,臨床用藥安全性很高。

[1]江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1997.

[2]中華人民共和國農業部.新獸藥一般毒性試驗技術要求[S].1991.

[3]李江珍.降脂膠囊急性毒性及致突變性研究[J].湖北中醫雜志,2000,22(6):48.

[4]GB151931.食品安全性毒理學評價程序和方法[S].2003.