祛痘合劑質量標準的初步研究

周曉霞

杭州市紅十字會醫院制劑室 杭州 310003

祛痘合劑為我院臨床常用制劑,具有清熱利濕解毒等功效,治療濕熱內壅及腸胃濕熱型痤瘡療效顯著。筆者對其制劑的質量控制標準進行了研究,現報道如下。

1 儀器與試藥

S22PC型可見分光光度計(上海棱光技術有限公司),BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司),80-2離心沉淀器(上海手術器械廠)。蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100080-20030)。乙醇、亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉等均為分析純。祛痘合劑(由我院制劑室提供,批號:061031、070306、070402)。

2 方法與結果

2.1 處 方 黃芩、龍膽草、梔子、柴胡、地黃、車前子、澤瀉、當歸、黃連、枇杷葉、大黃(制)、生石膏等。

2.2 制備工藝 取生石膏先煎 2次,時間分別為 1小時和 0.5小時,過濾,得濾液備用。取柴胡和當歸提取芳香水 200ml,藥渣與余藥合并煎煮 2次,時間分別為 1小時和 0.5小時,合并煎濾液,靜置過夜,上清液濃縮至比重不小于 1.01(20℃),用 85℃藥液溶解尼泊金乙酯,放冷,加入芳香水,加入石膏濾液,調整至全量 1000ml,靜置過夜,過濾,經半成品檢驗合格后,灌裝,105℃熱壓滅菌 1小時即得。

2.3 質量標準

2.3.1 性 狀 本品為棕色液體,久置有少許沉淀,味苦。

2.3.2 鑒 別 取本品 10ml,加硅藻土 2g,拌勻,水浴蒸干,殘渣加甲醇 10ml超聲提取 10min,濾過,濾液作為供試品液。另取黃芩苷,加甲醇制成 1mg/ml的溶液作為對照品。同法制作缺黃芩的陰性對照液。參照薄層色譜試驗[1],吸取上述三種溶液各2μl,分別點于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外燈 365nm下檢視,供試品色譜中,應與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,而陰性對照液則無,見圖 1。

圖1 祛豆合劑薄層鑒別

2.4 總黃酮含量測定

2.4.1 對照品溶液制備 精密稱取 105℃干燥恒重的蘆丁對照品 13.0mg,加 50%乙醇置 25ml量瓶定容,得濃度為 0.26mg/ml的對照品溶液備用。

2.4.2 供試品溶液制備 精密吸取 1.0ml樣品溶液于 10ml容量瓶中,用 95%乙醇稀釋到刻度,渦旋混勻,轉移至離心管中 4000r/min離心 5min,精吸上清液 1ml于 25ml容量瓶中,加 50%乙醇至刻度,作為供試品溶液,備用。

2.4.3 標準曲線制作 精密吸取對照品溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分別置于 25ml容量瓶中,加 50%乙醇至 6min,各加入 1.0ml的 5%NaNO2,搖勻,放置 6min,加入 1.0ml10%Al(NO3),搖勻,放置 6min后加 10%NaOH10.0ml,加 50%乙醇稀釋至 25ml,混勻,靜置 15min,于 510nm處比色測定,以相應試劑為空白[2]。以濃度對吸光度繪制工作曲線,得回歸方程 C=3.0469A-0.008(r=0.9997),結果表明,在 0.13～1.30mg/ml范圍內吸光度與濃度呈良好的線性關系。

2.4.4 精密度試驗 精密吸取標準品溶液 1ml,按“2.4.3”操作,重復 5次測定,RSD=0.18%,表示本法有較好的精密度。

2.4.5 重復性試驗 依照供試品溶液處理方法對同一批樣品 (批號:061031)按“2.4.3”操作,重復測定 5次,結果表明,RSD=2.52%,重復性良好。

2.4.6 穩定性試驗 取上述供試品溶液,按“2.4.3”項下法每隔 5min測定吸光度,結果表明吸光度在顯色完全后 60min內穩定,RSD=2.66%。

2.4.7 回收率實驗 精密吸取已知含量(批號:061031)供試品溶液 1.0ml5份,分別精密加入對照品溶液適量,按“2.4.3”項操作,測定吸光度并計算,結果見表 1。

表1 回收試驗結果

2.4.8 祛痘合劑總黃酮含量測定 精密吸取供試品溶液 1.0ml,按“2.4.3”項操作,于 510nm處測定吸光度,由回歸方程計算總黃酮含量。測定結果見表2。

2.5 與質量有關的項目測定 相對密度、pH值等按中國藥典 2005版附錄 VIIA、VIID[1]檢測,結果見表 2。

表2 祛痘合劑總黃酮含量測定結果(n=5)

3 討 論

本實驗制劑為中藥復方制劑,且主要通過水煎提取制備而成,成分復雜,故對供試品溶液需進行前處理。經實驗發現,當采用 95%乙醇沉淀離心時,雜質干擾較小,所得樣品總黃酮含量回收率較高,重現性好,方法簡便,可作為該制劑定量測定用。初步制訂該制劑總黃酮含量≥3mg/ml。由于祛痘合劑藥味較多,成分復雜,本文僅對其質量標準進行了初步研究,至于其他成分的質控研究正在進行中。

本文僅對祛痘合劑中君藥黃芩進行了定性鑒別,實驗發現用甲苯 -乙酸乙酯 -甲醇 -甲酸展開劑時,干擾嚴重;而采用醋酸為展開劑,分離效果佳,斑點圓整,無拖尾現象,可作為制劑黃芩藥材定性鑒別用。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學工業出版社,2005.附錄 18、28.

[2] 馬鶯,王靜,牛天嬌,等.功能性食品活性成分測定[M].北京:化學工業出版社,2005.253.