發酵沼液對黃瓜灰霉病抑制機理研究

王芳，何永棟，何小莉

（1．寧夏農林科學院植物保護研究所，寧夏銀川，750002；2.紅寺堡開發區農牧局農技中心；3.寧夏石嘴山市草原工作站）

發酵沼液是由人、畜糞便及農作物秸稈等各種有機物經厭氧發酵后的殘留物，是一種優質的有機物，它不僅含有極其豐富的植物所需的多種營養元素和大量的微生物代謝產物，而且含有抑菌和提高植物抗逆性的激素、抗生素等有益物質，可用于防治植物病蟲害和提高植物抗逆性[1]，其作為一種廢渣廢水再利用、易獲取的有機農藥在防病抗蟲方面有絕對的研究開發和推廣使用價值[2]。本試驗通過室內毒力測定，研究了發酵沼液對致病菌孢子萌發、菌絲生長的影響，及田間防治試驗等系統抑制機理，明確發酵沼液對灰霉病菌的抑菌機理和防治效果，以期變廢為寶，為發酵沼液在作物病蟲害防治開發利用提供可靠的理論依據。

1 材料與方法

1.1 病原菌制備

黃瓜灰霉病菌（Botrytis cinereaPers.），從田間采集病樣，采用真菌分離法[3]，分離純化獲得菌種，保存在4℃恒溫培養箱中備用。

1.2 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌的室內毒力測定

采用含毒介質法測定[4]。在無菌條件下，將發酵沼液或50%腐霉利WP按一定比例加入培養皿（直徑＝90 mm）后，迅速倒入經滅菌后冷卻至45℃左右的PDA培養基，混勻，制成含藥平板待用，以空白PDA培養基平板和加50%腐霉利WP的為對照，每處理重復3次。待平板凝固后接入生長一致的菌餅（直徑＝6.0 mm），置于25℃恒溫培養箱中培養，每隔24 h，用十字交叉法測1次菌落直徑，直至對照長滿培養皿。用下列公式計算抑菌率：

菌落直徑（mm）＝測量菌落平均值－6.0；抑菌率（%）＝（對照菌落直徑－處理菌落直徑）/處理菌落直徑×100%。

1.3 對孢子形成的影響

將上述培養72 h的各處理和對照菌落上的孢子洗下，用血球計數板直接計孢子數，每處理重復計數3次。用下列公式計算形成孢子的數量及對孢子形成的抑制率[3]：

孢子數＝孢子平均數×4 000 000；孢子形成抑制率 （%）＝（對照孢子數－處理孢子數）/對照孢子數×100%。

1.4 對孢子萌發的影響

采用載玻片萌發法[5]測定發酵沼液對黃瓜灰霉病菌分生孢子萌發的抑制作用，在適宜的溫度（20℃）下保濕（濕度95%）培養，觀察孢子萌發情況，以滅菌水作對照，重復3次。分別于第2，4，6，8，10 h在顯微鏡下檢查孢子萌發情況，當對照孢子萌發率達60%以上時，每處理觀察100個孢子，以可見芽管為萌發標準，統計各處理萌發率。

表1 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌的室內毒力測定結果

孢子萌發率 （%）＝萌發孢子數/檢查孢子總數×100%；孢子萌發抑制率（%）＝（對照孢子萌發率－處理孢子萌發率）/對照孢子萌發率×100%。

1.5 對分生孢子及菌絲的影響

將抑菌試驗培養的各處理和對照菌落，在恒溫（25℃）下培養72 h后，用挑針挑取病原菌菌落邊緣的菌絲體和正常菌絲體制成玻片標本，在顯微數碼攝像系統下觀察不同濃度的發酵沼液對黃瓜灰霉病菌分生孢子及菌絲形態的影響[6]。

2 結果與分析

2.1 發酵沼液對黃瓜灰霉病室內毒力測定結果

室內毒力測定結果表明（表1），發酵沼液對黃瓜灰霉病菌有顯著的抑制作用，尤其是原液，在施藥后72 h時抑菌率達86.94%，隨施藥時間的延長，抑制作用不斷增強。稀釋1倍的沼液隨施藥時間的延長其抑菌作用亦在增加，72 h時抑菌率為84.82%。稀釋2倍、4倍、8倍的沼液在施藥后48 h表現出最強抑制作用，72 h時抑制作用下降。稀釋16倍的沼液在72 h時表現出最強抑制作用，抑菌率為61.48%。發酵沼液原液、稀釋1倍、2倍在施藥后48 h內對病原菌的抑制作用與對照藥劑50%腐霉利可濕性粉劑相當。從表1可以看出，隨著發酵沼液稀釋倍數的增加，其對黃瓜灰霉病菌的抑制作用在降低。

2.2 對孢子形成的影響

發酵沼液對黃瓜灰霉病菌孢子的形成具有明顯的抑制作用（圖1、圖3），其對灰霉病菌孢子形成的抑制率隨稀釋倍數的增加而降低。發酵沼液稀釋到16倍時，處理組產生的孢子數為對照（280 000）的78.57%，原液處理過的灰霉菌產生的孢子數僅為對照的10.71%，抑制率高達89.29%，表現出極強的抑制作用。

2.3 對孢子萌發的影響

載玻片萌發法測定結果表明（圖2、圖4），發酵沼液原液對黃瓜灰霉病菌孢子萌發抑制作用最強，抑制率達78.57%，隨發酵沼液稀釋倍數的增加，其對孢子萌發的抑制作用降低，發酵沼液稀釋到16倍時對灰霉菌的抑制率僅為7.74%。

2.4 對分生孢子及菌絲的影響

通過顯微可視攝像系統觀察發現（圖5、圖6），經發酵沼液處理的黃瓜灰霉病菌菌絲與對照存在差異。處理組菌絲發生斷裂、扭曲、分枝增多，而對照菌絲生長正常，未見斷裂、扭曲現象。處理組產生的分生孢子數量明顯少于對照。

圖1 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌孢子形成的影響

圖2 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌孢子萌發的影響

圖3 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌孢子形成的抑制作用

圖5 未經發酵沼液處理的灰霉菌孢子

圖6 經過發酵沼液處理的灰霉菌孢子

表2 發酵沼液對黃瓜灰霉病田間藥效試驗

2.5 對黃瓜灰霉病的田間防治效果

通過田間試驗（表2）可以看出，發酵沼液在大田中對黃瓜灰霉病防治效果較差。發酵沼液選用的稀釋1倍、2倍、4倍在第1次施藥后4 d對灰霉病的防效分別為47.23%，38.25%，35.17%，在第2次施藥后4 d防效分別為25.07%，19.08%，11.44%，防治效果均下降，且試驗區藥前平均病情指數為1.29，第1次藥后4 d時病情指數上升到1.57，第2次藥后4 d病情指數上升到2.95。說明發酵沼液只減緩了灰霉病的發病進程，并未起到控制作用。對照藥劑50%腐霉利可濕性粉劑對黃瓜灰霉病有一定的控制作用，在第2次藥后4 d防效達69.92%。經顯著性分析，各個處理在0.05和0.01水平上均差異顯著。

圖4 發酵沼液對黃瓜灰霉病菌孢子萌發的抑制作用

3 小結與討論

試驗結果顯示，發酵沼液在室內對黃瓜灰霉病菌有很好的抑制作用，且對灰霉病菌孢子形成及萌發有較強的抑制作用，鏡檢觀察到發酵沼液造成灰霉病菌菌絲發生斷裂、扭曲、分枝增多，產生的分生孢子數量明顯少于對照。結合藥前、藥后的病情指數分析得出，發酵沼液在田間對黃瓜灰霉病只減緩了其發病進程，并未起到控制作用。

在室內毒力測定中觀察到，發酵沼液由于成分復雜，污染較嚴重，在藥后72 h已無法繼續調查，這或許也是發酵沼液在室內對黃瓜灰霉病菌的抑制作用較好的原因。

發酵沼液是一種復雜的有機、無機營養和微生物及其代謝產物的混合群體，因此，其對植物病害的抑制作用可能是多效疊加和選擇性的結果，而無法明確具體抑菌因子。

[1]董曉濤，楊志，周淑鳳.沼液對黃瓜白粉病的防治效果研究[J].遼寧農業職業技術學院學報，2006，8（3）：25-26.

[2]吳尚作.沼液增產技術的研究推廣[J].中國沼氣，1997，15（1）：35-37.

[3]方中達.植病研究方法[M].北京：中國農業出版社，1998.

[4]黃彰欣.植物化學保護實驗指導[M].北京：中國農業出版社，1990.

[5]慕立義.植物化學保護研究方法[M].北京：中國農業出版社，1991.

[6]張新虎，何靜，沈慧敏.蒼耳提取物對番茄灰霉病菌的抑制作用及抑制機理初探[J].草業學報，2008，17（3）：99-104.