北沙參乙醇提取物對四氯化碳誘導急性肝損傷的保護作用

金香男，鄭明昱*（.龍井中醫醫院內科病房，吉林龍井33400；.延邊大學醫學部中醫學院，吉林延吉33000）

北沙參乙醇提取物對四氯化碳誘導急性肝損傷的保護作用

金香男1，鄭明昱2*
（1.龍井中醫醫院內科病房，吉林龍井133400；2.延邊大學醫學部中醫學院，吉林延吉133000）

目的觀察北沙參乙醇提取物（EEAR）對CCl4誘導大鼠急性肝損傷的影響。方法將SD大鼠分為5組：正常對照組，模型對照組，陽性對照組及藥物大、小劑量組。分別用生理鹽水、EEAR和Silibinin灌胃7 d，最后1 d腹腔注射CCl4，檢測血清中ALT、AST、ALP；HE染色觀察病變程度；黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別檢測肝勻漿SOD、CAT和MDA。結果與對照組比較，CCl4組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著增加（P＜0.05），HE染色肝組織變性壞死累及全小葉。與CCl4組比較，EEAR+CCl4組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著下降（P＜0.05）；HE染色病變程度較輕；胞漿中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低（P＜0.05）。結論EEAR對CCl4所致的大鼠急性肝損傷具有一定的保護作用。

北沙參；大鼠；四氯化碳；肝損傷

北沙參（Radix Glehnic）味甘微苦，性微寒，歸肺胃經，能清肺熱、補肺陰。臨床用于陰虛肺熱燥咳痰黏，熱病傷津的治療。現代研究認為，沙參有祛痰、強心、抗真菌作用，而在免疫藥理方面國內外研究較少［1-2］。故本實驗通過觀察EEAR作用于CCl4肝損傷的急性動物模型，探討EEAR對CCl4急性肝損傷的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑儀器SD大鼠，四氯化碳，乙醚、HE染液，SOD、CAT、MDA測定試劑盒，考馬斯亮臟蛋白測定試劑盒，多聚甲醛，酶聯免疫檢測儀，Microfuge 22R臺式冷凍離心機，自動生化分析儀。

1.2 北沙參乙醇提取物的制備取干燥的北沙參500 g加3 000 mL 70%乙醇，用萃取機萃取3 h，將取得的萃取液用濾紙過濾，然后使用回轉真空濃縮機，上清液在45℃減壓濃縮，經冷凍干燥得粉末。

1.3 動物分組及給藥SD大鼠50只，清潔級，雄性，體質量（200±30）g，隨機分成5組，每組10只。對照組、CCl4組、150mg／kg EEAR+CCl4組、300mg／kg EEAR+CCl4組和50 mg／kg Silibinin+CCl4組。灌胃7 d，1次／d，0.5 mL／次，最后1 d，對照組腹腔注射生理鹽水，其余各組腹腔注射CCl41 mL／kg［3］。16 h后乙醚麻醉打開胸腔取血，取肝臟。

1.4 血清ALT、AST、ALP測定大鼠打開胸腔后，從左心室直接抽5mL，37℃溫浴10min，3 000 r／min離心10min，取上血清1 000μL，參照試劑盒的說明書測定ALT、AST、ALP。

1.5 肝勻漿SOD、CAT與MDA檢測4℃生理鹽水沖洗肝表面，稱取0.5 g肝組織，加入9mL生理鹽水，煎碎，研磨，制備5%的肝勻漿，2 000 r／min離心10 min，取上清1mL，4℃10 000 r／min離心15min，上清為胞漿待測。沉淀加入1 mL生理鹽水，利用細胞超聲破碎儀，制備成10%的線粒體勻漿待測。按SOD、MDA試劑盒操作說明，檢測胞漿和線粒體中的SOD、CAT活性和MDA含量。

1.6 肝組織病理學觀察肝組織學觀察在同一部位切取1塊肝組織，以10%甲醛固定后制備石蠟切片，HE染色，在光鏡下觀察肝組織變化。

1.7 統計學處理數據用均數±標準差（ˉx±s）表示，SPSS 11.0軟件進行完全隨機方差分析（Oneway ANOVA），組間比較采用LSD法。

2 結果

2.1 北沙參對血清中ALT、AST、ALP活性的影響見表1。

2.2 北沙參對肝勻漿SOD、CAT與MDA含量的影響見表2。

表1 北沙參對CCl4所致肝損傷小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影響±s，n＝10）

表1 北沙參對CCl4所致肝損傷小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影響±s，n＝10）

注：與模型組比較，＃P＜0.05。

組別ALT／（U／L）AST／（U／L）ALP／（U／L）正常組41.7±3.6 66.50±5.3 96.50±5.3模型組156.4±10.2 210.40±13.7 301.60±14.6 EEAR 300／（mg·kg）130.1±7.3 150.40±11.6 220.30±12.5＃EEAR 300／（mg·kg）86.4±8.9 110.38±7.4＃160.42±13.3＃Silibinin 50／（mg·kg）71.6±6.4 91.90±7.2＃130.30±14.3＃

表2 北沙參對CCl4誘導大鼠肝組織中SOD、CAT及MDA含量的影響±s，n＝10）

表2 北沙參對CCl4誘導大鼠肝組織中SOD、CAT及MDA含量的影響±s，n＝10）

注：與模型組比較，＃P＜0.05。

組別SOD／（U／mL）CA／（U／mL）MDA／（mmol／mL）正常組101 2.3±15.3 92.30±18.3 7.5±1.1模型組69.8±10.7 62.56±11.3 11.7±1.6 EEAR 300／（mg·kg）88.4±12.8 68.50±12.6 9.3±1.2 EEAR 300／（mg·kg）96.8±14.4＃80.80±14.3＃8.3±1.4＃Silibinin 50／（mg·kg）106.2±13.6＃85.00±14.5＃8.0±1.4＃

結果與CCl4組比較，EEAR+CC4組胞漿中SOD、CAT的活性顯著增加（P＜0.05），MDA的含量顯著降低（P＜0.05），線粒體中的CCl4活性增加，MDA含量降低無顯著差異；EEAR+CCl4組胞漿和線粒體中SOD、CAT活性均顯著增加（P＜0.05），MDA含量降低無顯著差異。

2.3 北沙參對肝組織變性壞死的影響光鏡下可見正常對照組肝小葉結構正常，肝索結構清晰可辨，未見肝細胞變性、壞死等病理變化。模型對照組改變明顯，肝小葉失去正常結構，肝細胞不同程度的壞死伴炎細胞浸潤（中性粒細胞為主），嗜酸性增強，部分可見濁腫，體積增大，呈現氣球樣病變。陽性對照組、大劑量給藥組與模型對照組比較上述改變有一定減輕。大劑量給藥組炎性肝細胞明顯減少，肝細胞脂肪變性明顯好轉，正常肝細胞數目增多。小劑量給藥組效果較差。

3 討論

CCl4在肝微粒體細胞色素P-450酶激活下產生活性自由基CCl3－，可進一步與氧反應，形成具有更強反應活性的CCl3O－，這些自由基與肝細胞內大分子發生共價結合，也可攻擊肝細胞包膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化，損傷肝細胞膜的結構和功能，使膜通透性升高，導致細胞腫脹壞死，肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復雜過程。CCl4長期作用后可導致膠原纖維沉積，可能是CCl4誘發肝纖維的機制之一。CCl4注射后可以發生部分肝被膜的破壞，被膜下組織出血，并可導致血纖維蛋白析出、以嗜酸性白細胞為主的炎性細潤，還可以導致肝細胞發生空泡變性，并發生肝細胞壞死。本研究HE染色病理切片證實了北沙參乙醇提取物較CCl4組顯著改善肝小葉變性、壞死的范圍和程度。SOD和CAT是機體內清除自由基的特異酶類，其活性的降低表明機體內自由基產生的增加，其中CAT起著重要的作用。它們在體內具有清除有害過氧化物，減輕和阻斷脂質過氧化鏈鎖反應等作用。當自由基增加到一定程度時，清除自由基的特異酶類如SOD、CAT等的活性就降低，機體清除自由基的能力下降，造成自由基在體內堆積，脂質過氧化產物如MDA等增加，最終導致機體的脂質過氧化而致損傷。因此，北沙參乙醇提取物的保肝效應可能與提前預防給藥增加了肝臟抗氧化的儲備有關。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：化學工業出版社，2005：66.

［2］原忠，簟眾，朱靜娟，等.HPLC測定北沙參中腺苷的含量［J］.中國中藥雜志，2005，30（17）：1391-1392.

［3］Ha KT，Yoon SJ，Choi DY.Protective effect of LyciuMchinense fruit on carbon tetrachloride－induced hepatotoxicity［J］.Journal of Ethnopharmacology，2005，96：529-535.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0828－02

2010－10－11）

金香男，女，大學本科。研究方向：肝病研究。

*通信作者：鄭明昱，碩士，講師。Tel：0433-2436025。