超聲波萃取液相色譜儀測定果單皮中的合成色素胭脂紅

郭俊俊

0 引言

人工合成色素作為食品添加劑的一類，主要來源于煤化工及其附屬產品，其相對于天然色素具有資源豐富，價格低廉，著色穩定的優勢，在食品工業中被廣泛應用，但其一般具有毒性，甚至可能致癌。為此，國家出臺了相關法規和標準來規范合成色素等食品添加劑的使用。胭脂紅作為合成色素的一種被許多生產果單皮的食品企業使用，國標GB/T 5009.35-2003《食品中合成著色劑的測定》規定了其檢測方法，但因其在樣品前處理的描述上籠統，故針對性、操作性不強。本文就果單皮樣品的前處理，提出了用超聲波萃取，高速離心機分離來代替聚酰胺分吸脫附的提取方法，該方法的相關指標可以滿足《食品中合成著色劑的測定》中對檢測技術指標的要求。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters1525高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Waters2487紫外檢測器；T25B組織勻漿機（德國Ika公司）；MSIMinishaker旋渦混合器；KQ-500E型超聲波儀（昆山市超聲波儀器有限公司）；TGL16M型臺式高速冷凍離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）；BS224S型電子天平（塞多利斯科學儀器有限公司）。

胭脂紅標樣（國家標準物質中心）；甲醇、乙酸銨為色譜純；氨水為分析純度；水為高純水。

1.2 實驗步驟

（1）把樣品用組織勻漿機搗碎混勻，稱取10.000g置于50mL具塞試管中，加入50mL水，置于旋渦混合器上5min混勻。

（2）將裝有樣品的試管置于KQ-500E型超聲波儀內超聲萃取25min。

（3）待樣品超聲萃取完成后將裝有樣品的試管置于TGL16M型臺式高速冷凍離心機上，以10000轉/min的速度，常溫離心分離20min。

（4）取出試管，用取樣器吸取上清液，過0.45μm膜，準備進液相色譜儀進行檢測。

（5）用標準儲備液體，加水稀釋20倍，經0.45μm膜過濾，配制成50.0μg/mL的標準使用液。

1.3 Waters1525高效液相色譜儀的實驗條件

柱：Waters-C1810μm不銹鋼柱4.6mm×250mm。流動相：甲醇：乙酸銨（pH=4，0.02mol/L）。梯度洗脫：甲醇：20%～35%，3%/min；35%～98%，9%/min；98%繼續 6min。柱溫：35℃。流速：1mL/min。紫外檢測器：254nm波長。

2 結果與討論

2.1 樣品的前處理

國標《食品中合成著色劑的測定》中規定的前處理方法是，樣品粉碎，用水溶取樣品中的色素，溶取液在酸性條件下，用聚酰胺吸附，用布式漏斗過濾，再用乙醇-氨水混合液洗脫。在實際操作中，由于果單皮經組織勻漿機處理后的水溶液近似膠體溶液，很容易和聚酰胺吸附相互作用而致使聚酰胺的有效吸附性降低，并且經布式漏斗過濾難度很大，即使勉強過濾，在用乙醇-氨水混合液洗脫時，由于乙醇對聚酰胺有一定的溶解性，也會導致過濾時空隙性差，加大過濾難度，并且對色素的提取效率影響很大。改用本方法后，避免了聚酰胺吸附、脫附，乙醇-氨水混合液洗脫，布式漏斗過濾等操作性不強的步驟，通過高速冷凍離心來使溶取液中的大分子物質離心沉淀，從而使溶取液達到進液相色譜儀的條件。實驗證明，該方法在樣品的前處理上簡便、快速、有效。

2.2 檢測數據和結果分析

2.2.1 檢測數據（見表1）

表1 檢測數據表

由數據分析：4個平行樣結果的相對標準偏差為RSD=0.08%，并且在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值小于算術平均值的10%，該方法符合相關標準要求。2.2.2 方法的回收率和精密度（見表2）

表2 方法的回收率和精密度表

由數據分析：該方法的加標回收率在91±0.4%-108±0.8%之間，相對標準偏差 RSD（%，n=4）=0.08%，符合相關標準要求。

2.3 結論

該方法相對《食品中合成著色劑的測定》中規定的前處理方法簡便、快速、有效。方法的各項技術指標滿足標準要求，精密度為：RSD（%，n=4）=0.08；方法回收率為 91±0.4%-108±0.8%。

[1]GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測定[S].

[2]GB/T 22400-2008原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法[S].