Ezrin蛋白在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

河南省焦作市人民醫(yī)院病理科 (焦作 454000)陸曉彭 春

惡性腫瘤轉移是腫瘤患者死亡的主要原因之一,其間涉及多種機制,研究表明某些蛋白質在腫瘤的轉移過程中起著重要的作用,其中 Ezrin是近年來發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉移有密切關系的蛋白之一。非小細胞肺癌是常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率有逐年上升的趨勢。我們應用免疫組化方法檢測非小細胞肺癌手術標本的石蠟包埋組織中 Ezrin蛋白的表達情況,旨在進一步探討 Ezrin蛋白與非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展的關系。

材料與方法

1 標本來源 本研究所用資料均系焦作市人民醫(yī)院 2000～2007年間手術切除或纖支鏡活檢標本的原發(fā)性非小細胞肺癌標本,共計 45例。其中男 30例,女 15例。年齡 34～ 78歲,平均 56.6歲。所有病例均按世界衛(wèi)生組織 1981年肺癌分型標準分類,鱗癌 22例,腺癌 10例,鱗腺癌 7例,大細胞癌 6例。 按 1997年國際肺癌分期標準,Ⅰ期肺癌 16例,Ⅱ期肺癌 10例,Ⅲ期肺癌 10例,Ⅳ期肺癌 9例。高分化癌 16例,中分化癌 17例,低分化癌 12例。淋巴結 28例,無淋巴結轉移17例。

2 免疫組織化學法 將 10%福爾馬林固定、石蠟包埋的癌組織制成 4～ 5 μ m切片,常規(guī)脫蠟,浸入 0.01mol/L、pH為 6.0的枸櫞酸鹽緩沖液內,微波爐抗原修復 10min,溫度為 92～ 98℃。用 SP法進行免疫組織化學染色。Ezrin及 SP試劑盒系北京中山生物試劑公司提供的 Zymed公司產(chǎn)品。 Ezrin以腫瘤細胞漿出現(xiàn)典型棕黃色顆粒為陽性,陽性細胞數(shù)目在 10%～25%為(+),25%～ 50%為(?),超過 50%為(?)。每次實驗均設陽性和陰性對照。用已知乳腺癌陽性切片作陽性對照,陰性對照用 PBS代替一抗。

3 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計分析采用 SPSS12.0軟件進行i2檢驗,以 P＜0.05為有顯著性差異,P＜0.01為有極顯著性差異。

結 果

表1 肺癌組織類型與 Ezrin蛋白表達的關系

表2 Ezrin蛋白陽性表達與肺癌臨床病理相關性

1 Ezrin蛋白在正常肺組織及非小細胞肺癌組織中的表達結果 見表 1。Ezrin蛋白在非小細胞肺癌總的陽性率為 66.67%(30/45),Ezrin蛋白在正常肺組織陽性表達率為 100%(20/20),兩組有顯著性差異(P＜0.05)。Ezrin蛋白在非小細胞肺癌主要表達于胞漿,在正常肺組織主要表達于胞膜。

2 Ezrin蛋白陽性表達與肺癌臨床病理相關性

見表 2。 Ezrin蛋白陽性表達與肺癌組織學類型、腫瘤細胞分化程度及腫瘤分期無關(P＞0.05),而與肺癌有無淋巴結轉移有關。在有淋巴結轉移組,Ezrin蛋白陽性表達高于無淋巴結轉移組。

討 論

20世紀 80年代初,Bretscher等[1]首次發(fā)現(xiàn)了Ezrin蛋白。 Ezrin是一個分子量為 82 kD的磷酸化蛋白質,由 585個氨基酸組成,編碼基因為 villin2,定位于染色體 6q25.2～ q26。 Ezrin是 ERM蛋白家族(Ezrin,Radixin和 Moesin)中細胞內骨架蛋白,調節(jié)細胞活動如生存、黏附、遷移、侵襲,這些活動在腫瘤發(fā)展和進程中都具有非常重要的作用[2～4]。

本組結果顯示,Ezrin蛋白陽性表達在肺癌細胞表達下調,其陽性率與肺癌組織學類型、腫瘤細胞分化程度及腫瘤分期無關,而與肺癌有無淋巴結轉移有關。在有淋巴結轉移組,Ezrin蛋白陽性表達高于無淋巴結轉移組。以往研究表明:Ezrin蛋白可以通過與 CD43、ICAM-1、ICAM-2、磷脂酰絲氨酸 4和 5-二磷酸鹽結合等方式,增加腫瘤細胞的遷移和轉移能力[5]。此外,Ezrin在腫瘤細胞中的過度表達可以破壞正常細胞內信號傳遞網(wǎng)絡的平衡,其中主要涉及的為細胞信號轉導相關分子(Rho)及受體酪氨酸蛋白激酶等信號傳導途徑[6]。 Hiscox等[7]用免疫共沉淀發(fā)現(xiàn),Ezrin和 E-cadherin是結合在一起的;Pujuguent等[8]則發(fā)現(xiàn)Ezrin可通過 Rho蛋白調節(jié) E-cadherin在胞膜上的表達,這些研究表明 Ezrin可直接或間接和 E-cadherin發(fā)生作用,改變腫瘤細胞極性及細胞運動、調節(jié)腫瘤細胞間的黏附,參與腫瘤細胞內信號轉導而發(fā)揮作用,并且發(fā)現(xiàn) EzrinThr567磷酸化對其影響惡性腫瘤浸潤轉移非常重要。

此外,在本研究中也發(fā)現(xiàn):Ezrin蛋白陽性表達在肺癌腫瘤細胞定位也存在著不同,其在非小細胞肺癌主要表達于胞漿,在正常肺組織主要表達于胞膜。在結腸癌的研究中也發(fā)現(xiàn)了 Ezrin蛋白定位的改變,在正常結腸黏膜組織中蛋白主要定位于細胞膜上,而在腫瘤組織中主要定位于細胞漿[9]。Ezrin亞細胞定位改變的機制目前尚不完全清楚,可能與其磷酸化有關,其亞細胞定位的改變對于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移均具有重要作用。

因此,Ezrin作為一種膜-細胞骨架連接蛋白,不僅可影響細胞形態(tài)和運動,而且與多條信號傳導途徑有關,在多種腫瘤中 Ezrin過度表達和表達異位可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移,但是 Ezrin蛋白在腫瘤發(fā)展及轉移中的具體作用機制目前尚未完全明確。有關其表達調節(jié)的研究也不多,相信隨著今后有關研究的深入,可為進一步闡明其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉移中的作用。

綜上所述:Ezrin蛋白在非小細胞肺癌表達下降且表達部位發(fā)生移位,可能與非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展及遠處轉移有關。

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