p15和nm23基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達*

王崇丹 扈清云 姜云生 興桂華 王曉帆

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病有逐漸增加趨勢，但其發(fā)病機制尚不明確。目前認為腫瘤的發(fā)生可能是染色體的特定區(qū)域缺失、癌基因的激活和抑癌基因的失活，以及細胞增殖與凋亡的平衡失調(diào)所致。p15基因是已被公認的腫瘤抑制基因[1]，nm23基因是近年來發(fā)現(xiàn)的重要轉移抑制基因[2]，有關兩者與子宮內(nèi)膜癌關系的研究較少。本研究旨在探討p15基因和nm23基因在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相互關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集齊齊哈爾醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院病理科2005年10月—2008年10月存檔石蠟包埋子宮內(nèi)膜癌組織標本60例 。患者年齡38～72歲，平均（52.03±5.41）歲。子宮內(nèi)膜癌采用1988年FIGO分期標準：I期40例，II期10例，III期7例，IV期3例；腫瘤浸潤肌層深度<1/2者35例，≥1/2者25例；有淋巴結轉移7例，無淋巴結轉移53例；組織學分級高分化36例，中分化18例，低分化6例；組織類型腺癌53例，腺鱗癌5例，透明細胞癌1例，漿液性乳頭狀腺癌1例。另選正常增生期子宮內(nèi)膜組織標本10例作為對照組，患者年齡40～52歲，平均（49.70±3.02）歲。2組年齡差別無統(tǒng)計學意義（t=1．326，P＝0．189）。

1.2 染色方法 主要試劑有p15鼠抗人單克隆抗體、nm23兔抗人多克隆抗體和即用型免疫組織化學超敏SP試劑盒（廣譜），均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。所有標本均經(jīng)10%福爾馬林溶液固定、石蠟包埋。使用HE染色初步觀察正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌組織的病變特點，確定組織類型和病理分級，篩選入組。SP免疫組織化學染色按照試劑盒說明書操作，用已知陽性切片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照，均用微波抗原修復。

1.3 結果判定 以細胞膜、細胞漿或細胞核出現(xiàn)清晰的黃色或棕褐色顆粒判定為陽性。每例先在100倍鏡下選取陽性細胞多且分布均勻的區(qū)域，然后隨機計數(shù)10個不重復、不重疊的400倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞中的陽性細胞數(shù)，取平均值作為結果。根據(jù)陽性細胞所占百分比進行評分，0分為陽性細胞<5%;1分為陽性細胞5%～50%;2分為陽性細胞>50%，將≥1分判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件，組間比較應用t或χ2檢驗，影響因素分析用Logistic回歸分析，相關性分析用Spearman秩相關檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 p15 表達情況p15表達定位于細胞核和細胞漿，細胞核著色深，見圖1。p15在正常子宮內(nèi)膜組織中均陽性表達，1分2例、2分8例；在子宮內(nèi)膜癌組織中40例（66.7%）陽性表達，1分為18例，2分22例，2組比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.618，P<0.01）。不同組織學分級子宮內(nèi)膜癌組織中p15的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余分組間p15的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。組織學分級是p15表達的影響因素，見表2。

2.2 nm23表達情況nm23表達主要彌漫性分布在細胞漿內(nèi)，見圖2。nm23在正常子宮內(nèi)膜組織中有7例（70%）陽性表達，1分和2分分別為3例和4例，在子宮內(nèi)膜癌組織中36例（60．0%）陽性表達，1分和2分分別為29例和7例，2組比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=4.246，P=0.120）。不同臨床分期及有無淋巴結轉移子宮內(nèi)膜癌組織中nm23的陽性表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其余分組間nm23的陽性表達率差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。Logistic回歸分析未見影響nm23表達的因素入選，見表3。

表1 p15和nm23表達與臨床病理學參數(shù)的關系 例（%）

表2 p15表達影響因素Logistic回歸分析結果

表3 nm23表達影響因素logistic回歸分析結果

2.3 p15與nm23表達的相關性p15和nm23在子宮內(nèi)膜癌中的表達呈正相關（rs＝0．754，P＜0．01），見表4。

表4 p15與nm23在子宮內(nèi)膜癌中表達的相關性

3 討論

p15是迄今發(fā)現(xiàn)的最直接抑制細胞周期的多腫瘤抑癌基因之一，其通過作用于細胞周期蛋白依賴激酶（CDK）與細胞周期蛋白D（cyclinD）復合物，特異性抑制CDK4、CDK6激酶活性，阻止Rb蛋白磷酸化，限制細胞從G1期進入S期，從而抑制細胞增殖[3]。本研究結果顯示p15在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率高于在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達率，而且內(nèi)膜癌分化程度越低，p15陽性表達率越低，提示低組織學分級是p15表達的影響因素,與夏瑾瑜等[4]研究結果相似，與張麗志等[3]研究結果不一致，考慮可能與判定方法不同有關，推斷p15低表達可能不僅參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，而且可能導致細胞無限制由G1期進入S期，并可以在細胞未成熟時即開始分裂，惡性度增高，并使惡性細胞不斷增殖，最終導致細胞永生化。因此，p15的表達在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展進程中發(fā)揮著重要作用。

nm23基因為一重要的轉移抑制基因，位于人17號染色體的著絲點附近，其蛋白產(chǎn)物為二磷酸核苷激酶(NDPK)，此酶通過調(diào)節(jié)G蛋白介導的細胞信號傳遞反應，影響微絲、微管細胞骨架蛋白的生物活性，改變細胞的黏著力和遷移力，抑制腫瘤轉移[2]。nm23等位基因的突變、缺失、低表達與多種惡性腫瘤發(fā)生轉移的潛能密切相關[5]。本研究中nm23的陽性表達率隨內(nèi)膜癌臨床分期增高及淋巴結轉移而降低，提示nm23低表達可能會促進子宮內(nèi)膜癌的進程。但臨床分期較高的患者可能就是淋巴結轉移的患者，兩者之間可能有相互影響，故多因素分析結果顯示未見影響nm23的表達因素入選，提示腫瘤的發(fā)展可能還有本研究未列入的其他影響因素作用的結果。另外，本研究Ⅲ～Ⅳ期患者、淋巴結轉移患者、低分化患者和其他組織類型患者蠟塊較少，也可能影響研究結論，有待增加樣本量以進一步研究。

本研究還表明p15與nm23在子宮內(nèi)膜癌中的表達呈正相關，推測可能是由于子宮內(nèi)膜癌細胞中p15表達缺失使其抑制細胞增殖的作用減弱，導致細胞增殖異常活躍，分化程度減低，繼而nm23表達亦減低，導致腫瘤轉移抑制功能缺失，從而加速了腫瘤轉移。p15和nm23在子宮內(nèi)膜癌中的協(xié)同作用有待雙染等方法進一步證實。

[1]劉冬滿，張志勇，鄭寰宇，等.老年原發(fā)性卵巢癌p16和p15蛋白的表達及其臨床意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008，28(12):2347-2348.

[2]王從玉，鄧躍華，劉弋，等.nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大腸癌中的表達及意義[J].中國腫瘤臨床，2008，35(19):1117-1120.

[3]張麗志，崔滿華，白鳳玲.p16和p15基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達[J].吉林大學學報(醫(yī)學版)，2005，31（1）：118-120.

[4]夏瑾瑜，戴淑真，羅兵.原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌組織p15基因及其蛋白的表達[J].齊魯醫(yī)學雜志,2002,17(4):283-285.

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