VEGF和CD147在宮頸癌組織中的表達及意義

邸麗雙 王德華

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，尤其晚期及復發宮頸癌對患者危害更大。腫瘤的侵襲轉移是一個多因素、多步驟的復雜過程，涉及腫瘤細胞與宿主之間復雜的相互作用，多個基因及其產物參與了這一過程的調控。CD147分子是一種表達于多種組織的單次跨膜糖蛋白，其在肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中表達增高，在腫瘤浸潤、轉移中起重要作用。血管內皮生長因子（VEGF）可直接參與誘導血管生成，在腫瘤生長中發揮重要作用。本研究探討CD147和VEGF蛋白在宮頸癌發生發展中的作用，為宮頸癌的發病機制及預后判斷提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集天津醫科大學總醫院2006年10月—2008年10月門診活檢或住院手術病理標本100例，其中宮頸癌組織59例、宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）組織21例、正常宮頸組織20例。宮頸癌按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期18例，Ⅲ期13例，Ⅳ期2例。宮頸癌患者手術31例：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期5例（新輔助化療）；手術病理發現淋巴結轉移者10例，未發現淋巴結轉移者21例。所有切片經病理專家復核。宮頸癌組、CIN組、正常宮頸組平均年齡分別為（47.06±11.49）歲、（44.37±11.76）歲及（49.15±6.17）歲，差異無統計學意義（F=2.563，P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑和方法 兔抗人CD147多克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體，稀釋濃度勻為1∶50，即用型免疫組化試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組化SP法，DAB顯色，具體操作按說明書進行。用PBS代替一抗作為陰性對照，采用生物公司提供的陽性切片為陽性對照。

1.2.2 結果判斷VEGF和CD147分別以胞漿和胞膜中出現棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞。按半定量積分法判斷兩者表達情況，根據染色強度及陽性細胞所占比例分別記為0～3分。染色強度:未著色或與背景一致淺棕色為0分，淺著色為1分，中度著色為2分，深著色為3分。陽性細胞百分率:高倍鏡（×400）下隨機抽取10個視野，每個視野計數100個細胞，計算其平均陽性百分率。根據平均陽性細胞百分率分為：陽性細胞數＜5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，≥50%為3分。兩項指標相加，0分為陰性（－），1～2分為弱陽性（＋），3～4分為陽性（＋＋），5～6分為強陽性（＋＋＋）。

1.3 統計學分析 采用SPSS 13.0軟件包對數據進行統計學處理，多組有序分類變量采用Kruskal-Wallis檢驗，各組之間兩兩比較采用Mann-Whitney檢驗；按不同臨床病理指標進行分組，各組間率的比較采用χ2檢驗及精確概率法檢驗。CD147和VEGF相關性分析采用Spearman等級相關。采用雙側檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 CD147和VEGF在不同病變宮頸組織中的表達 宮頸癌組中CD147表達（91.53%）高于正常宮頸組（35.00%）及CIN組（76．19%），差異有統計學意義 （P<0．05）。宮頸癌 組 織 中VEGF的表 達（76.27%） 高于正常宮頸組（10.0%）、CIN組（57．14%），差異有統計學意義（P<0．05），而在CIN組與宮頸癌組之間差異無統計學意義（P＞0．05），見表1。

表1 CD147及VEGF在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達 （例）

2.2 不同臨床病理情況宮頸癌患者組織中CD147和VEGF的表達情況 伴有淋巴結轉移的宮頸癌組織中CD147、VEGF陽性表達較無淋巴結轉移者升高（P<0.05）。不同年齡、大體類型、組織類型、分化程度的患者CD147和VEGF的表達差別均無統計學意義（均P>0.05），見表2。

表2 不同臨床病理情況宮頸癌患者CD147和VEGF的表達情況 （例）

2.3 宮頸癌組織中CD147和VEGF兩者表達相關性CD147與VEGF呈正相關（rs=0.268，P<0.05），見表3。

表3 CD147與VEGF在宮頸癌中表達的關系 （例）

3 討論

CD147分子屬于免疫球蛋白超家族,在多種腫瘤細胞中表達升高，并刺激腫瘤細胞和間質細胞分泌基質金屬蛋白酶（MMP），促進腫瘤的侵襲和轉移[1]。Belton等[2]發現Basigin-2可作為可溶性CD147的受體起作用，激活ERK1/2信號途徑導致MMP-1、MMP-2等表達。本研究結果顯示，CD147的陽性表達率隨宮頸病變加重呈逐漸升高趨勢。且伴有淋巴結轉移的宮頸癌組織中CD147的表達明顯高于無轉移者，提示在宮頸癌的演變過程中，CD147可能通過刺激腫瘤細胞和基質細胞分泌、活化MMPs，導致細胞間質和基底膜成分降解，促進宮頸癌的發生、發展及轉移。

VEGF是一類特異性作用于內皮細胞的生長因子，可促進血管腔化及新生血管形成，并參與維持淋巴管內皮細胞的存活，與腫瘤細胞淋巴結轉移有關[3]。本研究結果表明，VEGF在正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中的陽性表達率逐漸升高，且在有淋巴結轉移的宮頸癌組織中VEGF的表達明顯升高，這與Hammes等[4]研究結果基本一致，說明VEGF的表達升高可能與宮頸癌的發生浸潤有關，在宮頸癌中血管形成可能是一個早發事件。

本研究表明CD147和VEGF在宮頸癌中的表達呈正相關，但兩者之間的作用機制尚不完全明確。王冬等[5]發現VEGF和MMP-9的表達與宮頸癌密切相關。CD147的高表達可促進MMP-9 mRNA的表達，進而使刺激產生的MMPs降解周圍細胞外基質，有利于VEGF發揮作用促進新生血管的形成。Tang等[6]認為CD147促進VEGF的表達可能是通過PI3K-Akt信號途徑完成，說明CD147可間接或直接地促進VEGF表達進而促進血管內皮增生，為腫瘤的生長及轉移所需營養奠定了基礎。

[1]Biswas C,Zhang Y,DeCastro R,et al.The human tumor cell-derived collagenase stimulatory factor(renamed EMMPRIN)is a member of the immunoglobulin superfamily[J].Cancer Res,1995,55(2):434－439.

[2]Belton Jr,Chen L,Mesquita FS,et al.Basigin-2 is a cell surface receptor for soluble basigin ligand[J].J Biol Chem,2008,283(26):17805－17814.

[3]Saharinen P,Tammela T,Karkkainen MJ,et al.Lymphatic vasculature:development,molecular regulation and role in tumor metastasis and inflammation[J].Trends Immunol,2004,25(7):387－395.

[4]Hammes LS,Tekmal RR,Naud P,et al.Up-regulation of VEGF,cfms and COX-2 expression correlates with severity of cervical cancer precursor(CIN)lesions and invasive disease[J].Gynecol Oncol,2008,110(3):445－451.

[5]王冬，王占東，任寶紅.VEGF、MMP-9和CIV在宮頸癌中的表達及與轉移性潛能的相關性研究[J].天津醫藥，2003，31（7）：417－419.

[6]Tang Y,Nakada MT,Rafferty P,et al.Regulation of vascular endothelial growth factor expression by EMMPRIN via the PI3K-Akt signaling pathway[J].Mol Cancer Res,2006,4(6):371－377.