胚胎發育對囊胚形成的影響*

魯振宇 張云山 糜若然

常規體外受精（IVF）或卵胞漿內單精子注射（ICSI）發育形成的胚胎一般在體外培養2～3 d，于4～8個細胞期移植回子宮腔。然而，將胚胎培養至囊胚期移植更符合生理需要，是提高種植率、減少移植胚胎數目、避免多胎妊娠及減胎危險的有力措施。胚胎的發育潛能直接影響著囊胚的形成以及形成囊胚的質量。本研究主要應用第3天胚胎移植后無凍存價值的廢棄胚胎進行體外培養，分析不同細胞數量和質量的胚胎對囊胚形成的影響，并且評價廢棄胚胎的囊胚形成對妊娠結局是否有一定的預測意義，為臨床實現囊胚期移植提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2006年12月—2009年5月在天津市中心婦產科醫院生殖醫學中心接受IVF-胚胎移植（ET）或ICSI-ET的196例不孕癥患者移植后剩余無凍存價值的406個廢棄胚胎，在患者簽署知情同意書后用于本研究。主要試劑：G1.3、囊胚培養液（CCM）、礦物油、HSA（Vitrolife公司）。

1.2 方法 胚胎培養至第3天，將移植后無凍存價值的廢棄的胚胎轉移到囊胚培養液CCM中序貫培養至第5～7天，觀察是否有囊胚形成，并對形成的囊胚按照Gardner[1]分級方法進行分級。移植后28 d B超檢查發現妊娠囊視為臨床妊娠。分析比較第3天胚胎細胞數與囊胚形成之間的關系；第3天不同質量胚胎的囊胚形成率、優質囊胚形成率有無差異；有囊胚形成的患者與無囊胚形成的患者妊娠率之間有無差異。

1.3 統計學處理 采用SPSS 12.0統計軟件進行統計分析。計數資料用例（%）表示，行χ2檢驗，相關分析采用Pearson相關分析法，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 囊胚形成情況 196例共406個廢棄胚胎中有64例共102個（25.12%）囊胚形成，其中優質囊胚28個，全部由Ⅱ+級以上胚胎形成。其中，細胞數＜4個的胚胎66個形成6個（9.09%）囊胚，細胞數4～5個的胚胎200個形成50個（25.00%）囊胚，細胞數6～11個的胚胎140個形成46個（32.86%）囊胚，第3天胚胎細胞數與囊胚形成率呈顯著正相關關系（r=0.99，P ＜ 0.01），Ⅰ～Ⅱ+級胚胎與Ⅲ～Ⅳ級胚胎囊胚形成率、優質囊胚形成率比較差別有統計學意義（P＜0.01），見表1。

表1 第3天不同質量的胚胎對囊胚及優質囊胚形成的影響 例（%）

2.2 囊胚形成情況對妊娠情況的預測 64例有囊胚形成的患者有32例（50.00%）獲臨床妊娠，132例無囊胚形成的患者有38例（28.79%）獲得臨床妊娠，差異有統計學意義（χ2=10.43，P ＜ 0.05）。

3 討論

將胚胎序貫培養到囊胚階段進一步提高了對胚胎發育潛能的篩選。囊胚階段移植，子宮內膜與胚胎發育同步，有助于妊娠率的提高[2]。并且可使移植的胚胎數目減少，從而降低了多胎妊娠發生的可能。本研究應用廢棄的胚胎進行囊胚培養，培養方法簡單、可靠。

胚胎的質量和囊胚的形成密切相關。Hardy等[3-4]研究表明，隨著胚胎碎片的增多，囊胚形成率降低，囊胚的細胞數目尤其是滋養外胚層數目減少。當碎片>25%時，很少有胚胎能發育到囊胚階段[3]。碎片<10%時不會影響囊胚的形成，但是碎片>15%,囊胚的形成率顯著下降。碎片會影響細胞之間的連接，干擾細胞的融合、囊腔和囊胚的形成[4]；碎片釋放的有毒物質會損傷其鄰近的細胞，使其凋亡；碎片還會減少胞質的體積，耗竭胚胎發育所需要的細胞器[5]，造成卵裂球和（或）胞漿的損失。Neuber等[6]研究表明，第3天卵裂球數目≥7個的優質胚胎更容易發育成優質囊胚。囊胚形成率與卵裂速度成正比，卵裂速度較快的胚胎更容易形成優質囊胚[7]。本研究表明，第3天胚胎的細胞數與囊胚形成率呈正相關，第3天質量好、碎片少的胚胎更容易形成囊胚和優質囊胚，第3天胚胎的形態可作為囊胚培養的指標。雖然剩余質量差的胚胎仍有機會發育成具有正常染色體的囊胚，但是其非整倍體概率大大增加，且種植率和妊娠率較低，經患者簽署知情同意書后選擇丟棄或用于科學研究是正確可行的，特別是對來源非常有限的胚胎干細胞研究具有重要意義。

本研究發現，有囊胚形成的患者臨床妊娠率高于無囊胚形成患者，說明剩余胚胎的囊胚形成情況可以間接預測妊娠與否。大量的研究也表明，剩余胚胎形成囊胚對于妊娠的預測有積極的作用[8-9]。

人胚胎4~8個細胞期剛剛開始出現基因表達，8個細胞期以前的胚胎存在發育阻滯的現象，多數發育潛能差、染色體異常的胚胎不能發育到囊胚階段。因此，囊胚期胚胎具有更好的發育潛能。胚胎培養延長到囊胚期，使胚胎發育和子宮內膜的生理階段同步化，宮頸黏液減少，利于移植操作，同時子宮壁收縮減弱，種植率提高。囊胚移植后著床率明顯提高，減少了胚胎的移植數目，甚至可實行單胚胎移植，從而降低多胎妊娠的風險，提高了IVF的治療效果。

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