黃芪總黃酮對佐劑性關節炎模型大鼠IL-4、IFN-γm RNA表達影響的研究*

陜西中醫學院(咸陽 712046)楊曉航 史傳道 葉崢嶸 賈文鵬

類風濕性關節炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種以關節滑膜炎為特征的自身免疫性疾病,目前認為輔助性 T細胞(Th)亞群 Th1與 Th2及其分泌的細胞因子平衡紊亂和失調是 RA發病的重要因素[1]。黃芪總黃酮(Flavonoids of ast ragalus,TFA)是中藥黃芪莖葉中提取的有效成分中含量較高的一類單體組分。本次研究是在前期 TFA對 Th1與 Th2相關細胞因子白介素 4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)血清含量影響的研究基礎上[2],進一步開展的 TFA對模型大鼠外周血單個核細胞(PBMC)分泌的 IL-4、IFN-γ轉錄水平影響的研究。

材料與方法

1 實驗動物及分組 Waster大鼠 30只,雄性,10～12周齡,體重約 150～180g,購自第四軍醫大學實驗動物中心。將 30只大鼠隨機分為正常組、模型組、實驗組(治療組),每組 10只。

2 主要儀器與試劑 PCR擴增儀(美國 ABI公司 2720型擴增儀),凝膠圖像分析系統(美國 Bio-Rad公司);Trizol(Invitrogen公司),逆轉錄酶 M-MLV試劑盒 (美國 GIBCO),Taq DNA聚合酶、d NTP(Promega公司),RPMI1640(Hy Clone產品 ),淋巴細胞分離液(d=1.083,中國醫學科學院生物醫學工程研究所生產),引物由上海生工生物公司合成。TFA由成都科倫藥物研究所提供,完全弗氏佐劑(FCA,購自美國 GIBCO),DNA Marker為 DL2000(寶生物公司 )。

3 動物模型制備及處理 適應性喂養 3 d后,在乙醚輕度麻醉下,用微量注射器于右后足跖皮內注射環磷酰胺(FCA)0.1 ml,約 14 d左右可誘發成功佐劑性關節炎模型[3]。模型組:上法造模成功后,第 15 d生理鹽水灌胃 3 m1/次,1次 /d,連續 14 d;治療組:上法造模成功后,TFA 250mg/kg體重灌胃,3 m1/次,1次/d,連續 14 d;正常組:適應性喂養結束后,用生理鹽水灌胃 3m1/次 ,1次 /d,連續 28 d。

4 外周血 PBMC分離方法 在超凈臺中,按無菌操作分離 PBMC細胞。步驟如下:①取 1 ml肝素……