麝香保心丸中3種有效成分的體外溶出度測定

何紅偉， 沈 鳴， 韓麗妹， 王建新

(復旦大學藥學院藥劑學教研室，上海201203)

麝香保心丸為《中國藥典》2005年版一部收載的品種，由麝香、人參提取物、冰片、肉桂等七味中藥組成，具有芳香溫通、益氣強心的功效，是臨床常用的治療心血管疾病的中成藥，多用于心肌缺血引起的心絞痛、胸悶及心肌梗死等癥。麝香保心丸目前的質(zhì)量控制方法主要包括薄層色譜鑒別和個別有效成分的含量測定。但作為常用的急救類中成藥，有效成分的溶出快慢是其能否迅速發(fā)揮藥效的關(guān)鍵。本文分別選擇了人參皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1，C54H92O23)、肉桂酸(Cinnamic acid，C9H8O2)和冰片(Borneol，C10H18O)這3種有效成分作為指標，進行了溶出度的研究。它們分別是人參提取物、肉桂與蘇合香以及冰片的主要有效成分。由于這3種成分的溶解性等理化性質(zhì)不同，具有較好的代表性，其溶出性能基本上能反映出麝香保心丸中各種化學成分的溶出情況。

1 材料和儀器

1.1 試劑與藥品 麝香保心丸(上海和黃藥業(yè)有限公司，批號:081106、090610、090706);人參皂苷Rb1、肉桂酸、冰片、水楊酸甲酯對照品(含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，人參皂苷Rb1批號:110704-200318;肉桂酸批號:110786-200503;冰片批號:110743-200504;水楊酸甲酯批號:110707-200710);甲醇、乙腈(色譜純，Tedia公司);高純氮(純度:99.999%，上海氯閔氣體有限公司);其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 Agilent 1200 HPLC系統(tǒng)(含四元泵，在線脫氣機，自動進樣器和紫外檢測器，美國Agilent公司);7890F氣相色譜儀(氫火焰離子檢測器，上海天美科學儀器有限公司);水純化系統(tǒng)(Simplicity，Millipore公司);ZRS-8型智能溶出儀(天津大學無線電廠);XW-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學儀器廠);TGL-16G臺式離心機(上海安亭科學儀器廠);BS224S型電子天平(d=0.0001 g)(Sartorius)。

2 方法

2.1 指標成分的含量測定方法

2.1.1 色譜條件 分別采用高效液相色譜法測定人參皂苷Rb1和肉桂酸，采用氣相色譜法測定冰片。參考有關(guān)文獻［1，2］，確定 3種成分的測定條件分別為:

人參皂苷 Rb1:色譜柱:Venusil XBP-C18柱(5 μm，4.6 mm ×150 mm)，保護柱:Security guard C18(5 μm，4.0 mm ×2.0 mm);流動相:乙腈-水 =29 ∶71;流速:1 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長:203 nm;進樣量:10 μL。

肉桂酸:色譜柱:Venusil XBP-C18柱(5 μm，4.6 mm × 150 mm)，保護柱:Security guard C18(5 μm，4.0 mm×2.0 mm);流動相:甲醇-1%醋酸溶液 =45∶55;流速:1 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長:273 nm;進樣量:10 μL。

冰片:色譜柱:TM-1701(30 m ×0.53 mm ×1.0 μm);氮氣流量:2.96 mL/min;氫氣流量:5.76 mL/min;空氣流量:150 mL/min;進樣口:240℃;檢測器:250℃;升溫程序:100℃保持3 min，以每分鐘5℃的速度升溫至130℃，保持2 min;進樣量:1 μL。

2.1.2 方法學考察

2.1.2.1 檢測限與定量限 以信噪比S/N為3和10，分別計算方法的檢測限與定量限。

2.1.2.2 標準曲線繪制 人參皂苷Rb1:精密移取含人參皂苷 Rb122.7 μg/mL 的對照品溶液 0.5、1、2.5、5 mL于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻后進樣測定。以人參皂苷Rb1的峰面積A對濃度C進行線性回歸，即得標準曲線方程。

肉桂酸:精密移取含肉桂酸10 μg/mL的對照品溶液 0.01、0.02、0.05、0.2、0.4 mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，混勻后進樣測定。以肉桂酸的峰面積A對濃度C進行線性回歸，即得標準曲線方程。

冰片:精密移取含冰片2.05 mg/mL的對照品溶液 0.1、0.2、0.5、1、2.5 mL 于 5 mL 量瓶中，各加入含水楊酸甲酯2.508 mg/mL的內(nèi)標溶液0.1 mL，加乙酸乙酯至刻度，混勻后進樣測定。以冰片與內(nèi)標水楊酸甲酯的峰面積之比Ai/As對冰片濃度C進行線性回歸，即得標準曲線方程。

2.1.2.3 日內(nèi)精密度和日間精密度 分別于1日內(nèi)不同時間及3日內(nèi)取高中低三個濃度的對照品溶液重復進樣，計算樣品溶液濃度及相對標準偏差RSD，即得日內(nèi)精密度及日間精密度。

2.1.2.4 回收率 采用加樣回收法測定各成分的回收率。在已知含量的樣品中定量加入對照品，在相應的色譜條件下測定含量，計算各指標成分的回收率。

2.1.2.5 重復性 取溶出樣品溶液，按2.1.3項下方法平行處理6份，進樣測定，計算相對標準偏差RSD。

2.1.2.6 穩(wěn)定性 取2.1.3項下待測樣品溶液于室溫下放置不同時間后進行測定，計算其中各指標成分的濃度并計算相對標準偏差RSD。

2.1.3 溶出樣品預處理及測定 人參皂苷Rb1:取

2.2項下的續(xù)濾液2 mL，加入適量 0.1 mol/L的NaOH溶液，調(diào)節(jié)其pH至6.8以增加指標成分的穩(wěn)定性。然后加入2 mL乙醚渦旋2 min，離心(6000 r/min)5 min，棄去乙醚液，取下層水溶液，按 2.1.1項色譜條件進樣測定。

肉桂酸:取2.2項下的續(xù)濾液按2.1.1項色譜條件直接進樣測定。

冰片［3-4］:取 2.2 項下的續(xù)濾液 0.7 mL，加入0.3 mL含水楊酸甲酯0.05 mg/mL的乙酸乙酯溶液，渦旋混勻，離心(8000 r/min)5 min，取上清液，按2.1.1色譜條件進行GC測定。

2.2 3種有效成分的體外溶出度測定

按《中國藥典》2005年版附錄XC溶出度測定法第三法小杯法，溶出條件為:以100 mL人工胃液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃。于設(shè)定時間分別取樣5 mL，用0.45 μm微孔濾膜過濾，并補以同體積等溫溶出介質(zhì)。續(xù)濾液分別按照2.1.3項下操作進行預處理后進樣測定，以每批樣品中實際含量［1，5-6］為100%，計算3種有效成分在不同時間的溶出百分率。

3 結(jié)果

3.1 指標成分的含量測定方法評價結(jié)果

3.1.1 檢測限與定量限 在上述條件下，人參皂苷Rb1，肉桂酸，冰片三種指標成分的檢測限(S/N=3)和定量限(S/N=10)依次分別為 0.21、0.70 μg/mL;2.0、6.7 ng/mL 和 0.015、0.051 mg/mL。

3.1.2 標準曲線 所得各指標成分含量測定的標準曲線見表1，可看到各指標在相應的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，滿足測定要求。

表1 3種指標成分的含量測定標準曲線(n=3)

3.1.3 精密度 精密度試驗中，人參皂苷Rb1高中低濃度的日內(nèi)精密度RSD分別為0.31%、2.90%、5.53%(n=5)，日間精密度 RSD分別為0.61%、2.59%、5.96%(n=9);肉桂酸高中低濃度的日內(nèi)精密度 RSD 分別為 0.24%、1.02%、4.38%(n=5)，日間精密度 RSD 分別為0.87%、2.93%、7.50%(n=9);冰片高中低濃度的日內(nèi)精密度RSD分別為2.41%、3.54%、2.95%(n=5)，日間精密度 RSD 分別為 3.79%、4.82%、3.23%(n=9)。結(jié)果表明精密度滿足測定要求。

3.1.4 回收率 回收率試驗中，人參皂苷Rb1高中低濃度的加樣回收率分別為(97.28±2.59)%、(100.43 ±3.20)%、(102.06 ±1.67)%(n=3);肉桂酸高中低濃度的加樣回收率分別為(100.72±1.10)%、(102.64 ±4.33)%、(104.07 ±1.76)%(n=3);冰片高中低濃度的加樣回收率分別為(109.25 ±7.07)%、(93.96 ± 6.67)%、(102.54 ±4.93)%(n=3)。結(jié)果表明回收率滿足測定要求。3.1.5 重復性 重復性試驗中，6份人參皂苷Rb1、肉桂酸和冰片的溶出樣品經(jīng)處理后分別連續(xù)進樣，所測峰面積的RSD分別為1.73%、1.31%、3.98%，結(jié)果表明測定方法的重現(xiàn)性良好。

3.1.6 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性試驗中，人參皂苷Rb1、肉桂酸和冰片的溶出樣品經(jīng)處理后放置0、2、4、6、8、12 h后所測峰面積的RSD分別為3.38%、3.53%、4.77%，結(jié)果表明在12 h內(nèi)供試品基本穩(wěn)定。

3.2 3種有效成分的體外溶出度測定結(jié)果

按上述測定方法，以人參皂苷Rb1、肉桂酸和冰片為指標成分，對3批市售麝香保心丸進行體外溶出度測定，結(jié)果見表2～4。

表2 3批麝香保心丸中人參皂苷Rb1的體外累積溶出百分率測定結(jié)果(n=6)

表3 3批麝香保心丸中肉桂酸的體外累積溶出百分率測定結(jié)果(n=6)

表4 批麝香保心丸中冰片的體外累積溶出百分率測定結(jié)果(n=6)

將該3種有效成分的累積溶出百分率繪制成溶出度曲線圖，見圖1。

圖1 麝香保心丸中3種有效成分的累積溶出度曲線

對表2～表4中的數(shù)據(jù)按Weibull分布模型進行處理，得到麝香保心丸中3種有效成分的溶出度參數(shù)，結(jié)果見表5。

表5 3種有效成分的溶出度參數(shù)

4 討論

由于制劑中麝香酮與脂蟾毒配基含量較少，溶出樣品溶液中其濃度均低于定量限，因此本試驗中不將其作為指標成分，而選用人參皂苷Rb1、肉桂酸以及冰片分別作為水中易溶、微溶以及難溶性指標成分來考察制劑的溶出度，具有一定代表性，能相對全面地反映該復方中藥中各成分的溶出情況。

麝香保心丸是臨床上常用的急救中成藥，要求在胃中能夠迅速崩解溶散，因此，本文選擇人工胃液作為溶出介質(zhì)。由各有效成分的溶出曲線圖可以看到，人參皂苷Rb1、肉桂酸以及冰片的溶出均較快，該結(jié)果說明麝香保心丸經(jīng)口服給藥后，在胃內(nèi)即迅速發(fā)生崩解，各成分可快速溶出。既表明了麝香保心丸用于快速起效的生物藥劑學基礎(chǔ)，也表明了選用人工胃液作為溶出介質(zhì)的合理性。

文獻［7］報道，人參皂苷 Rb1在 pH1.2的鹽酸溶液即人工胃液中可發(fā)生水解。我們進行了穩(wěn)定性試驗，發(fā)現(xiàn)將人參提取物置于37℃人工胃液中，人參皂苷Rb1的含量在45 min內(nèi)基本穩(wěn)定，這可能與人參提取物中其他組分對其產(chǎn)生的保護作用有關(guān)。因此，本文中，人參皂苷Rb1的溶出取樣點僅取到45 min，此時其溶出已基本完全。進一步延長取樣時間，會由于人參皂苷Rb1在其酸內(nèi)的不穩(wěn)定性而導致含量下降，影響溶出度測定結(jié)果的準確性。在冰片的溶出度測定中，由于冰片具有較強的揮發(fā)性，在試驗中我們采用自制泡沫板扣于溶出蓋的縫隙以減少其揮發(fā)，但仍不能完全密閉，在反復的取樣過程中會導致冰片的部分揮發(fā)，從而導致其累積溶出百分率相對較低。

［1］陽長明.中藥復方緩釋長效制劑設(shè)計原理的探討［D］.成都:四川大學博士學位論文，2001.

［2］徐國兵.GC法同時測定復方麝香注射液中薄荷腦、龍腦、百秋李醇和麝香酮的含量［J］.中成藥，2008，30(6):855-858.

［3］宋洪濤，郭 濤，李 麗，等.麝香保心丸中冰片的體外溶出度研究［J］.解放軍藥學學報，1994，15(2):17-21.

［4］郭 濤，宋洪濤，趙明宏，等.麝香保心分散片的制備及其冰片和人參總皂苷的體外溶出度研究［J］.中國藥學雜志，2002，37(11):836-841.

［5］秦冬彥.麝香保心丸的質(zhì)量控制方法及包合物中肉桂油、冰片含量測定和穩(wěn)定性的研究［D］.上海:第二軍醫(yī)大學碩士學位論文，2000.

［6］宋洪濤，郭 濤，李 麗，等.氣相色譜法測定麝香保心丸中冰片的含量［J］.中國藥師，1999，2(6):317-319.

［7］Odani T，Tanizawa H，Takino Y.Studies 0n the absorption，distribution，excretion and metabolism of ginseng saponins.Ⅳ.decomposition of ginsenoside-Rg1and Rb1in the digestive tract of rats［J］.Chem Pharm Bull，1983，31(10):3691.