HPLC法測定鹽酸左旋多巴甲酯的含量研究

潘俏鳳

（廣州醫學院第三附屬醫院，廣東廣州 510150）

鹽酸左旋多巴甲酯是左旋多巴衍生化的產物，為抗震顫麻痹類神經性藥物左旋多巴的前體藥物，具有易溶于水、易進入血-腦屏障，易制成各種口服劑型和注射劑，吸收快，生物利用度高等優點[1]，但有關鹽酸左旋多巴甲酯含量的測定方法目前報道少見，本文采用高效液相色譜法對鹽酸左旋多巴甲酯進行了含量測定的研究，建立含量測定方法，旨在為鹽酸左旋多巴甲酯的質量控制提供理論依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，配有Agilent Eelipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱、emstation 化學工作站（Agilent）；FA 1004型電子天平（上海精科天平儀器廠）；KS-6000超聲波清洗機（寧波科聲儀器廠）；ZK-82A型真空干燥箱（上海市實驗儀器總廠）；TDL-40B臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）。

1.2 試藥

鹽酸左旋多巴甲酯標準品（批號：20091145，中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014、2009015、2009016，自制）；甲醇（色譜醇），三氟乙酸（分析純），磷酸（分析純），鹽酸（分析純），無水乙醇（分析醇）。實驗用水為雙重蒸餾水。所有試劑均經0.45 μm的微孔濾膜過濾并超聲脫氣。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

準確稱取干燥至恒重鹽酸左旋多巴甲酯對照品25 mg，以流動相作溶劑，配成濃度為0.25 mg/ml的對照品溶液，放入冰箱貯存，備用。

2.2 供試品溶液的制備

取鹽酸左旋多巴甲酯供試品25 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件與系統適用性試驗

采用 Agilent Eelipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調節pH=3.5）=20∶80；流速：1.0 ml/min；檢測波長：280 nm；柱溫：20℃；進樣量：20 μl。取上述制備的對照品溶液、供試品溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，鹽酸左旋多巴甲酯保留時間約為 4.5 min，理論板數大于3000，在此色譜條件下，鹽酸左旋多巴甲酯色譜峰達到基線分離。結果見圖1。

2.4 線性關系的考察

精密取標準溶液 1、2、4、6、8 ml分別置 10 ml量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成不同濃度的溶液，分別吸取上述溶液各20 μl，分別進樣測定，以峰面積為縱坐標（Y），質量濃度（μg/ml）為橫坐標（X）進行線性回歸，得線性方程：Y=12072X-83.53（r=0.9999），鹽酸左旋多巴甲酯進樣量在25.65～256.50 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

按“2.1”項下方法配制對照品溶液，重復進樣5次，結果鹽酸左旋多巴甲酯峰面積的RSD=0.99%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

圖1 HPLC色譜圖（A.對照品；B.供試品）Fig.1 HPLC chromatography(A.Reference substance;B.Sample)

精密吸取標準品溶液適量，在室溫下放置，于0、2、4、6、8、12、24 h 分別進樣，并測定峰面積。 結果 RSD=0.69%（n=5），表明樣品溶液在24 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014）適量，按“2.2”項下方法配制樣品溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，計算鹽酸左旋多巴甲酯含量。結果RSD=0.872%，表明本法重現性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，每份約10 mg，分別加入鹽酸左旋多巴甲酯對照品適量，按“2.2”項下方法制備溶液，按上述色譜條件測定，平均回收率為99.02%，RSD=1.34%（n=6）。表明本法回收率較好，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.9 樣品含量測定

取不同批號的鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014、2009015、2009016），各 3 份，按“2.2”項下方法制備樣品溶液，按上述設定的色譜條件測定樣品中鹽酸左旋多巴甲酯的含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

左旋多巴是人體內合成去甲腎上腺素及多巴胺等的前體物，能透過血-腦屏障進入腦內，經多巴脫羧酶轉化成多巴胺，增加大腦紋狀體中多巴胺含量，從而成為目前最有效的帕金森病（PD）的治療藥物[2]，但左旋多巴在體內難以進入人體的血-腦屏障，因此對其進行結構修飾，對其進行衍生化成鹽酸左旋多巴甲酯[3]。

目前，有關藥物分析的方法較多，但由于HPLC和其他分離分析方法相比，具有柱效高、靈敏度高、分離速度快、適用范圍廣、重現性好、操作方便等優點，很快在藥物分析中被廣泛的應用，成為藥物質量控制的重要手段[4-9]。實踐表明，HPLC是一種非常有效和普遍適用的藥物成分分析方法。本文在實驗過程中較詳細地考查了色譜分離檢測參數，包括流動相的組成比例、檢測波長、柱溫和流速等對鹽酸左旋多巴甲酯分離測定的影響。鹽酸左旋多巴甲酯紫外檢測在280 nm處有最大吸收且吸收值較穩定，不受鹽酸濃度的影響，故本研究以280 nm波長用于其含量的分析。在流動相的選擇中，筆者對流動相中甲醇與緩沖溶液的比例及緩沖溶液的pH值進行了優化，兩者均對保留時間有較大影響，pH值對峰形也有較大影響，在pH值為3.5時得到最佳的峰形。通過本實驗，筆者得出了鹽酸左旋多巴甲酯的最佳色譜分離條件，并對樣品分析的回收率和精密度進行了測定，建立了鹽酸左旋多巴甲酯含量測定的HPLC測定方法，該法操作重復性良好，準確度較高，因此，該法能用于鹽酸左旋多巴甲酯的質量控制。

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