高效液相色譜法測定感冒安片中蒙花苷的含量

楊 敏，廖志鐘

(廣東羅浮山國藥股份有限公司，廣東惠州 516133)

感冒安片為廣東羅浮山國藥股份有限公司生產的品種，該品處方中由野菊花、倒扣草、水楊梅、地膽草、佛手、千里光、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、咖啡因等組成，具有解熱鎮痛之功效，用于感冒引起的頭痛發熱，鼻塞，咳嗽，咽喉痛。方中野菊花具有疏風清熱，消腫解毒，治風熱感冒頭痛的作用，為主要藥物，經研究，可采用高效液相色譜法測定野菊花中的蒙花苷成分，方法操作簡單、專屬性強，線性關系良好，可作為該品的含量測定方法，以更好地控制產品質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津公司LC系列高效液相色譜儀（SPD-M20A二極管陣列檢測器、SIL-10AD自動進樣器、LC Solution色譜工作站）。

1.2 試藥

蒙花苷對照品（批號：111528-200504，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，以95.5%計）；感冒安片（廣東羅浮山藥業有限公司）；甲醇（色譜純），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil-C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.8）為流動相；檢測波長：334 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取蒙花苷對照品適量（以95.5%計），加甲醇溶解制成每毫升含15 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取粉末2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 ml，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

按感冒安片處方及制法，取除野菊花外的其余藥材，按制備工藝要求，制成缺野菊花的陰性對照樣品，再按供試品溶液制備方法制成野菊花陰性對照溶液。

2.5 系統適用性試驗

分別精密吸取上述對照品、供試品及陰性對照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，照上述色譜方法進行測定，HPLC色譜圖見圖1。

2.6 線性關系考察

精密稱取蒙花苷對照品適量，加甲醇溶解制成每毫升含0.05706 mg 的溶液，分別精密吸取 1、2、4、6、8、10 μl，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，并以進樣濃度（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得蒙花苷回歸方程：Y=1922145.0144X-8573.2384（r=1.0000）。 蒙花苷在0.05706～0.57060 μg濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

精密吸取蒙花苷對照品溶液10 μl，重復進樣5次，測定色譜峰面積，RSD=0.20%，結果表明本法精密度良好。

2.8 重現性試驗

精密稱取同一批樣品6份，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液、對照品溶液各10 μl進樣，記錄峰面積，結果蒙花苷峰面積積分值RSD=1.61%。結果表明本法重復性良好。

2.9 穩定性試驗

圖1 HPLC色譜圖（A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品）Fig.1 HPLC chromatography(A.Reference substance;B.Sample;C.Negative sample)

分別精密吸取同一供試品溶液，于 0、1、3、6、10、14 h 后分別進樣10 μl，記錄峰面積，RSD=1.52%。結果表明樣品在14 h內基本穩定。

2.10 回收率試驗

取已知含量的感冒安片樣品（含量：0.4241 mg/g），精密稱取6份，每份1 g，分別精密加入約等量的蒙花苷對照品，按供試品溶液制備方法制備并進行測定。試驗結果表明，平均回收率為99.65%，RSD=1.2%，結果見表1，表明本法準確性良好。

表1 回收率試驗結果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 樣品含量測定

取5批樣品，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，精密量取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積按外標法計算含量，結果見表2。

3 討論

感冒安片質量標準收載于中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第14冊，為中西藥組方制劑，原標準中沒有建立方中的中藥成分含量測定方法，為控制產品質量，提高質量控制水平，有必要研究制訂處方中的中藥含量測定方法。處方中野菊花具有疏風清熱，消腫解毒，治風熱感冒頭痛的作用，為方中主要藥物，有效成分蒙花苷明確，故選擇野菊花中的蒙花苷成分為含量測定指標成分也是科學合理的。

表2 樣品含量測定結果（%，n=5）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=5)

曾經試用乙腈-磷酸二氫鈉-磷酸（30∶70∶0.06）作為流動相，結果分離度不好，參考《中國藥典》2005年版一部野菊花“密蒙花”項下流動相，試用甲醇-水-磷酸系統，選用流動相甲醇-水-磷酸（48∶52∶0.8），峰純度檢測為重疊峰。 重新調整流動相比例為甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.8），在該色譜條件下，樣品峰純度檢查為單峰，陰性對照對測定無干擾，且蒙花苷與其相鄰峰的分離度＞1.5，理論板數大于2000，分離效果較好。

經試驗柱溫在25～40℃范圍內變動，對含量測定結果無明顯影響，但隨著柱溫的升高，分離度逐漸降低，在25℃分離度較好，30℃和40℃時分離度＜1.5，拖尾因子良好。

綜上所述，本法簡便、靈敏、準確、方法耐用性好，可用于感冒安片的質量控制。

[1]謝敏.肉桂中有機氯農藥殘留量的含量測定[J].中國現代醫生,2007,45(5):34-35.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005.

[3]朱小燕,王鋒.不同產地野菊花中蒙花苷含量的比較研究[J].安徽農業科學,2008,36(34):1504.

[4]王伯濤,王鋒.反相高效液相色譜法測定野菊花中蒙花苷的含量[J].時珍國醫國藥,2009,20(1):166.

[5]朱小燕,王鋒.不同產地野菊花中蒙花苷含量的比較研究[J].安徽農業科學,2008,36(34):150.

[6]陳蕾,朱霽虹.高效液相色譜法測定野菊花中蒙花苷的含量[J].中國藥事,2005,19(2):97-98.

[7]譚曉杰,賈英,陳曉輝,等.RP-HPLVC法測定野菊花中蒙花苷含量[J].沈陽藥科大學學報,2004,21(6):434-435.

[8]孫寶興,吉剛峰.HPLC法測定感冒靈膠囊中蒙花苷的含量研究[J].中醫藥導報,2007,13(2):70-71.

[9]劉麗,趙玉江,柳森國.HPLC法測定刺五加注射液中總異嗪皮啶的含量[J].中國現代醫生,2007,45(9):52-53.

[10]林冬杰.中藥退黃外洗液中大黃酸的含量測定[J].中國當代醫藥,2009,16(4):42-43.