高效液相色譜－二極管陣列檢測(cè)器法同時(shí)鑒定中藥制劑中非法添加的4種成分

吳衛(wèi)濤

(河南省安陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 安陽(yáng) 455000)

一些不法分子利用患者對(duì)中藥制劑的信任，以及急于治療而又懼怕藥物副作用的心理，在傳統(tǒng)中藥制劑中非法添加西藥成分[1]以擴(kuò)大功效，并從中牟取暴利。患者在不知情的情況下長(zhǎng)期使用，會(huì)造成肝腎功能嚴(yán)重?fù)p害，引起類腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)綜合征等不良反應(yīng)[2]。筆者采用高效液相色譜－二極管陣列檢測(cè)器法同時(shí)鑒定中藥制劑中非法添加的氨基比林、醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬[3]4種消腫止痛的西藥成分，25 min以內(nèi)可實(shí)現(xiàn)4種成分的完全分離與鑒定，快速準(zhǔn)確，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國(guó)Waters高效液相色譜儀，包括2695型泵，PDA 2996型二極管陣列檢測(cè)器，全自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱。氨基比林對(duì)照品(批號(hào)為100503－200301)、醋酸潑尼松對(duì)照品(批號(hào)為10012－0105)、雙氯芬酸鈉對(duì)照品(批號(hào)為100334－200302)、布洛芬對(duì)照品(批號(hào)為100179－200303)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;樣品均為市售品;甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特 C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:0.02 mol/L醋酸銨 －0.1% 醋酸水溶液 /甲醇(35∶65);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取氨基比林、醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬對(duì)照品適量，分別加流動(dòng)相制成每1 mL含0.50 g/L的溶液作為對(duì)照貯備溶液，分別取1.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為混合對(duì)照品溶液。取1次服用量的樣品，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相40 mL，超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果氨基比林、醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬的保留時(shí)間分別為4.5，8.9，13.8，23.3 min，與相鄰色譜峰的分離度均大于 1.5(圖 1)。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取同一份混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果各色譜峰保留時(shí)間 RSD均不大于0.7%，峰面積 RSD不大于0.8%。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份混合對(duì)照品溶液，分別在0，3，6，9，12 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果各色譜峰保留時(shí)間 RSD均不大于0.8%，峰面積 RSD不大于1.4%。

重復(fù)性試驗(yàn):配制混合對(duì)照品溶液5份，依法測(cè)定。各色譜峰保留時(shí)間 RSD均不大于0.7%，峰面積 RSD不大于0.7%。

最低檢測(cè)限:取混合對(duì)照品溶液適量，加流動(dòng)相逐步稀釋，依法測(cè)定。4種成分最低檢測(cè)限均小于5 μg(S/N=3)，可滿足試驗(yàn)要求。

2.4 樣品含量測(cè)定

取供試品溶液10 μL進(jìn)樣，結(jié)合色譜保留時(shí)間、紫外光譜兩方面的信息，可以證實(shí)2批次樣品中非法添加了雙氯芬酸鈉(保留時(shí)間 13.8 min)。結(jié)果見(jiàn)圖 2。

圖2 紫外吸收光譜圖

3 討論

通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器在200～400 nm波長(zhǎng)處對(duì)供試品溶液進(jìn)行光譜掃描，提取4種成分不同波長(zhǎng)處的三維光譜圖進(jìn)行對(duì)比分析，確定檢測(cè)波長(zhǎng)。選擇230 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，能使4種成分都有較靈敏的響應(yīng)值，溶劑峰的干擾也較小。

此類中藥制劑一般為多成分中成藥，因此在測(cè)定時(shí)對(duì)分析方法的選擇性提出了更高要求，本試驗(yàn)采用高效液相色譜－二極管陣列檢測(cè)器法對(duì)各組分進(jìn)行了很好的分離，結(jié)合紫外光譜，可進(jìn)一步判定此類藥物的性質(zhì)。所用方法可快速、準(zhǔn)確地鑒定中藥制劑中摻入的氨基比林、醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬4種成分，為打擊不法行為提供了技術(shù)支撐。

[1]劉 斐，陳長(zhǎng)青，鄭 靜，等.LC－MS/MS方法鑒定中藥制劑中摻入的7 種西藥成分[J].藥物分析雜志，2009，29(8):1378－1380.

[2]徐 浩.臨床用藥須知[M].天津:天津電子出版社，2005:286，289，1074－1078.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:60，95－96，845－846.