藍耳病血清學檢測與防控應用

唐 利

（上海海利生物藥品有限公司，上海 201403）

近年來，豬場發病越來越復雜，主要以混合感染和繼發感染的為主，很難看到疾病的典型特征，僅僅根據臨床癥狀已經很難來進行疾病診斷。在這種疾病流行趨勢下，血清學檢測方法尤其是ELISA抗體檢測方法，因其操作簡便、快速準確成為確診疾病和建立疾病預警系統的有效手段。本人長期從事實驗室檢測分析和臨床豬場疫病防控等工作，就藍耳病ELISA抗體檢測與該病防控應用做些總結，以供參考。

1 檢測的目的

1.1 疾病預警和感染壓力評估

通過檢測豬藍耳病病毒（PRRSV）抗體水平，可以了解豬藍耳病（PRRS）在豬群中的流行及感染情況。目前使用比較廣泛的是IDEXX藍耳病ELISA抗體檢測試劑盒，用其檢測不同階段仔豬或群體的抗體水平（包括ELISA數值高低和抗體均勻度），可以較好的了解藍耳病在各個群體中的感染時間和感染壓力。如圖1所示。

該豬場仔豬未接種任何藍耳病疫苗（包括“自家苗”），從檢測結果可以看出：仔豬抗體陽性率在4～8周之間不明確（沒有詳細檢測4～8周抗體），但是8周齡以后一直維持高的陽性率，顯示存在藍耳病病毒感染，同時，PRRS抗體數值也呈現上升趨勢，抗體陽性率和抗體S/P值變化同步，提示存在藍耳病病毒血癥或急性感染。14周齡和24周齡一直處于高強度感染。

在評估豬群某個疾病感染壓力的時候，群體抗體的均勻度更加重要。一般均勻度越好，整個群體的穩定性相對要好；反之，均勻度越差，離散度越高，群體穩定性越差。但是，均勻度好，抗體S/P值也很高，到也不是好現象。因此，綜合評估依然要結合抗體水平的高低、抗體均勻度、豬群臨床癥狀以及相應的病原學檢測。

圖1 PRRS抗體檢測結果分析（仔豬－IDEXXPRRSAb）

很多豬場如果想很快了解仔豬PRRSV感染狀況，可以直接檢測仔豬特定階段的PRRSV抗體水平，一般采集80日齡左右階段比較常見，如圖2。

場仔豬沒有接種任何藍耳病疫苗，在80日齡藍耳病抗體（IDEXX藍耳病抗體檢測試劑盒）參差不齊，顯示該階段仔豬處于不穩定狀態；PRRSV抗體陽性率很高，達到89.30%（見圖3），顯示該階段仔豬已經有大部分存在PRRSV野毒感染。S/P值超過2.5占1/3左右，有的血清抗體S/P值超過3.0甚至更高，顯示仔豬在80日齡之前已經受到藍耳病野毒感染，且感染率比較高（S/P值≥0.4為陽性）。

1.2 免疫程序安排與免疫效果評估

疫苗免疫接種應該考慮藍耳病在豬場內的感染規律，如有針對性地檢測各個階段仔豬藍耳病抗體水平，從而進行有針對性的免疫預防，會取得比較好的接種效果。

通過抗體檢測了解母源抗體的消長規律，能夠初步確定免疫時機。一般很多疫苗接種仔豬的首免時間跟很多因素有關系，最主要的是仔豬母源抗體水平。如，仔豬豬瘟的首免時間要考慮母源抗體干擾，仔豬偽狂犬疫苗的首免也是。

如圖4：該場仔豬未接種任何藍耳病疫苗，在60～80日齡表現出死亡率升高，僵豬比例增加。藍耳病抗體檢測結果顯示：仔豬在50日齡以后藍耳病抗體陽性率和抗體水平上升，基于該場沒有做過藍耳病疫苗（包括“自家苗”），提示仔豬群在保育前期開始感染PRRSV，之后陽性率一直升高。根據商品豬PRRSV感染規律，建議該豬場藍耳病活疫苗接種放在10～14日齡。該豬場雖然商品豬PRRSV感染率不斷增高，甚至達到100%，但不一定所有豬只均發病或表現出PRRSV感染后的臨床癥狀，這也是PRRSV感染的一個特點，即感染PRRSV，豬只不一定發病或表現出明顯的臨床癥狀。這在臨床控制藍耳病上就有個誤區，即豬群不表現出藍耳病癥狀，就認為沒有藍耳病。也有人提出這樣一個觀點：既然豬只感染PRRSV但是不發病，那是好事，無需接種疫苗。對于這個觀點，本人持保留意見。豬只感染PRRSV不發病，但會引起免疫抑制、影響豬只生長以及會引起其它一些類問題，如繼發感染等。防疫就是“預防為主”，等到發病（表現出癥狀）再想到防疫，損失要大得多。

圖2 藍耳病抗體檢測結果－80日齡（IDEXXPRRSAb）

但這里要提醒的是，母源抗體對接種疫苗有干擾，檢測的抗體水平不一定是母源抗體的全部，很可能僅是母源抗體的一部分指標，當然也不能認為就是中和抗體或保護性抗體，這和試劑盒檢測的目標蛋白的抗體有關系。所以，不能混為一談。如目前使用的IDEXX藍耳病抗體檢測試劑盒檢測的抗體是PRRSVN蛋白抗體，N蛋白抗體不具有中和活性。因此，用該試劑盒檢測的抗體水平與保護力之間沒有相關性，不能用于評估疫苗免疫后的保護力。至于評估疫苗接種的效果，通過試驗室檢測方法可以從側面來評估。體液免疫在抗擊藍耳病感染過程中到底有多大作用，仍不確定。因此，僅僅通過抗體檢測來評估疫苗免疫效果有很大局限。即檢測到的抗體高，不一定免疫效果就好；檢測到的抗體很低，不一定免疫效果就差。這在藍耳病免疫防疫中更加突出。筆者通過大量的臨床檢測顯示，該試劑盒PRRSVELISA抗體檢測S/P值過高，反而提示可能存在藍耳病野毒感染。而S/P值的高低和病毒的毒力和感染強度似乎有一定關系。不過，該試劑盒檢測PRRSV抗體水平用于評估豬群穩定及PRRSV感染狀況有很大優勢。

值得分享的是，藍耳病活疫苗（CH-1R株）免疫后的用該試劑盒檢測的抗體S/P值相對較低。經長期免疫的母豬，其藍耳病抗體檢測的S/P值能夠維持在較低水平，抗體水平均勻度好；仔豬免疫后用該試劑盒檢測的PRRSV抗體S/P值很低甚至小于0.4（S/P值＜0.4為陰性），這能與野毒感染狀態進行區分，也說明該疫苗毒株的毒力更弱。

當然，影響疫苗免疫效果的因素很多，包括疫苗的質量，保存和運輸，免疫途徑和使用方式，免疫時機以及有無免疫抑制因素存在和豬群的健康狀況等。

1.3 疾病診斷

圖3 藍耳病抗體檢測結果－80日齡（陽性率）

圖4 豬場藍耳病抗體檢測

根據臨床情況，對疑似病例加以確診，為現場診斷提供良好的依據。IDEXX公司PRRSV抗體檢測試劑盒檢測的抗體S/P值的高低可能提示一些信息：當S/P≥2.5時則表示豬群可能處于病毒血癥期；當S/P≥3.5時表示豬群處于急性感染；6-7周齡時，多數仔豬抗體可變為陰性（無病毒循環），之后如果PRRSV抗體依然存在，提示有PRRSV野毒感染。所以，臨床上應用該試劑盒檢測分析能夠很輕松地評估豬群/場PRRSV感染壓力，以制定科學合理的預防措施。當然，要確診仍需要做病原學檢測。當藍耳病暴發時，診斷工作相當重要。雖然有時候診斷費用很高，但是誤診或者片面診斷的代價將比正確診斷所需的花費要多得多，這個和豬群穩定時不做預防，而當藍耳病暴發時才采取預防措施的后果相似。一旦確診，首要考慮PRRSV是如何在畜群中流行的。

2 藍耳病防控

2.1 藍耳病感染

美國通過對118個豬場進行研究其中56%(66/118)是由感染豬只的引進而感染；20%（23/118）是由污染的精液而感染；21%（25/118）是由污染物/泥漿，以及人員的流動而感染；還有3%（4/118）懷疑是由空氣和節肢動物傳播的。

妊娠母豬和1月齡以內的仔豬最易感。豬與豬之間相互傳播是PRRSV傳染發生的最主要的途徑，與污染有PRRSV的運輸工具、器械接觸均可受到感染。感染豬的流動也是本病的重要傳播方式。豬感染病毒后2～14周均可通過接觸將病毒傳播給其他易感豬。

持續性感染是PRRS流行病學的重要特征，PRRSV可在感染豬體內存在很長時間，造成PRRSV在豬群中生存、循環及再傳播。這也是藍耳病控制中的一個難點。在PRRSV感染致病過程中也可能涉及抗體依賴性增強作用（ADE）這一特性，即亞中和水平抗體會增強PRRSV致病性，這也是為什么仔豬斷奶不久感染PRRSV后發病且死亡高的一個原因。

同時，引進帶病毒血癥的后備種豬與本場豬群間的水平和垂直傳播導致本場發病，以及引進PRRSV陰性豬與本場PRRSV強陽性豬群之間傳播導致新引進豬發病成為目前引種工作的一個難點。

空氣傳播在PRRSV傳播途徑中的作用還存有不同意見。傳播媒介的傳播可能與其機械性攜帶PRRSV有關系，如蒼蠅體表攜帶PRRSV進行傳播，但這不是PRRSV傳播的主要途徑。

2.2 免疫防疫

根據PRRSV的傳播特點以及感染特點，即仔豬一般在斷奶后至保育前期是PRRSV感染高峰期，及早接種疫苗是控制該病的重要有效措施。因此，筆者建議陽性豬場仔豬免疫一般“宜早不宜遲”。接種活疫苗能顯著降低藍耳病野毒感染率和發病嚴重程度，降低藍耳病暴發時引起的損失。這些損失還沒有包括生豬價格市場行情的變化和飼料價格的增長帶來的影響。藍耳病暴發后繼發其他疾病會導致更加大的損失，還有診斷及檢測上的發費。在開始采取預防措施之前，弄清楚病毒在畜群中的傳播途徑相當重要，尤其是在生長育肥豬中采取措施時更是如此。如果母豬群是穩定的，仔豬階段通過采取小保育，疫苗接種和分階段飼養等措施可以取得很好的預防效果。

當然，控制藍耳病依然要采取綜合措施，包括飼養管理、生物安全、免疫接種等措施，同時還要做好其他疫病免疫防疫工作，如豬瘟、偽狂犬、喘氣病、細小、豬圓環病毒2型等。