復方維鋅口腔貼膜的制備及質量控制

郭美華，馬妍妍，劉世萍（哈爾濱醫科大學附屬第一醫院藥學部，哈爾濱市 150001）

口腔扁平苔蘚是一種原因不明的慢性淺在性炎癥的角化性病變，尚無特效的根治方法，其病程慢性遷延，可以復發，且有癌變可能。對發生潰瘍或糜爛者，應采用全身和局部藥物治療[1～3]。筆者根據口腔扁平苔蘚的病理特點將維生素E、硫酸鋅、維生素A、醋酸地塞米松、鹽酸土霉素和鹽酸丁卡因6種成分以適當比例組方，以具有優良的成膜性的聚乙烯醇為載體，制成膜劑，并探討了該制劑處方及制備工藝、質量控制方法等，旨在尋求一種治療口腔扁平苔蘚方便有效的局部用藥制劑。

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜（HPLC）系統，包括2996 PDA檢測器、717自動進樣器（美國Waters公司）；SB3200型超聲波儀（必能信超聲（上海）有限公司）；AE200型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。維生素E標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100062-200608，純度：98.8%）；維生素E（巴斯夫（中國）維生素有限公司，批號：200805003，純度：99.3%）；維生素A（浙江醫藥股份有限公司新晶制藥廠，批號：090109，純度：99.5%）；硫酸鋅（湖南爾康制藥有限公司，批號：20080701，純度：100.1%）；醋酸地塞米松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：071201，純度：98.4%）；鹽酸丁卡因（北京市燕京藥業有限公司，批號：070406，純度：100.0%）；鹽酸土霉素（山東金洋藥業有限公司，批號：20080701，純度：94.1%）；復方維鋅口腔貼膜（自制，批號：20090604、20090612、20090615，每片含維生素E 6 mg，硫酸鋅0.4 mg，維生素A 0.2 mg，醋酸地塞米松0.1 mg，鹽酸土霉素2 mg，鹽酸丁卡因0.25 mg，規格：每袋10片）；其它輔料均為藥用規格；甲醇與異丙醇均為色譜純，其余試劑為分析純、水為超純水。

2 處方與制備

2.1 處方

維生素E 6 g，硫酸鋅0.4 g，維生素A 0.2 g，醋酸地塞米松0.1 g，鹽酸土霉素2 g，鹽酸丁卡因0.25 g，甘油2 g，丙二醇2 g，吐溫-80 2 g，乙醇5 mL，聚乙烯醇20 g，純化水200 mL，制成1 000片膜片。

2.2 制備

取聚乙烯醇加水膨脹后，在水浴上加熱，溶解，放冷。加入甘油、丙二醇及研細的硫酸鋅、鹽酸丁卡因和鹽酸土霉素，再加入用少量乙醇溶解的維生素A、維生素E及醋酸地塞米松溶液，攪勻，倒在涂有少量液體石蠟的玻璃板上，制成膜片，自然干燥，脫膜，裁成3 cm×4 cm面積大小，經紫外燈正反面各滅菌15 min，包裝，即得。

3 質量控制

3.1 性狀

本品為淡黃色均勻的薄膜。

3.2 鑒別

3.2.1 維生素E。取本品40片，加無水乙醇10 mL，振搖使維生素E溶解，濾過，濾液加硝酸2 mL，搖勻，在75℃加熱約15 min，溶液顯橙紅色。

3.2.2 維生素A。取本品10片，加氯仿5 mL，振搖使溶解，取出數滴，再加氯仿2 mL與三氯化銻的氯仿溶液（1→4）0.5 mL，即顯藍色，逐漸變成紫紅色。

3.2.3 醋酸地塞米松。取本品50片，照氧瓶燃燒法[4]進行有機破壞，用水15 mL與氫氧化鈉液（0.01 mol·L－1）5 mL為吸收液，待燃燒完畢后，充分振搖，取吸收液2 mL，加茜素氟藍試液0.5 mL，再加含有12%醋酸鈉與6%醋酸的溶液0.2 mL，用水稀釋至4 mL，加硝酸亞鈰試液0.5 mL即顯藍紫色。

3.2.4 本品顯鋅鹽、硫酸鹽及氯化物的鑒別反應[4]。

3.3 檢查

參照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅠM膜劑項下要求制定本品的檢查項目[4]。

3.3.1 重量差異。取供試品3批，每批20片，依法檢測[4]。結果，3批樣品重量差異在－8.2%～7.5%范圍內，符合要求。

3.3.2 微生物限度。檢查結果符合要求。

3.4 含量測定

3.4.1 檢測波長的確定。取維生素E標準品溶液在190～450 nm的波長范圍內掃描，記錄光譜。可知維生素E在204 nm及284 nm波長處均有吸收峰，考慮到前者為邊緣吸收，可能受溶劑等因素的影響，所以選擇284 nm作為檢測波長。

3.4.2 色譜條件。色譜柱：Sinochrom ODS-BP（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-異丙醇（88∶12）；檢測波長：284 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

3.4.3 試液的制備。（1）標準品溶液。精密稱取維生素E標準品50.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含維生素E 0.5 mg）。（2）供試品溶液。取本品10片（約相當于維生素E 60 mg），置于100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，即得。（3）陰性供試品溶液。按處方量稱取處方中除維生素E以外的其它藥用原料及輔料，按制備工藝制成不含維生素E的陰性供試品，按上述操作制備。

3.4.4 系統適用性試驗。取上述3種溶液，按色譜條件進樣，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性供試品；B.維生素E標準品；C.供試品；1.維生素EFig 1 HPLC chromatogramsA.negative sample；B.vitamin E control；C.test sample；1.vitamin E

由圖1可知，基線平穩，維生素E與雜質峰分度良好，雜質對其測定無干擾，且柱效高，峰形理想。

3.4.5 線性關系。取標準品溶液（0.5 mg·mL－1），經針頭過濾器過濾后進樣，在軟件內設置使自動進樣器將樣品按2、4、8、12、16、32 μL的體積依次進樣，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，以標準品進樣量（X，μg）為橫坐標，繪制標準曲線，擬合回歸方程：Y＝2.65×106X－3.98×105（r＝0.999 98），表明維生素E進樣量線性范圍為1.0～16.0 μg。

3.4.6 回收率試驗。取陰性供試品9份，分成3組，每組3份，每份10片，分別精密加入48、60、72 mg維生素E標準品，按上述供試品溶液的制備方法制備成加樣回收供試品溶液，進樣分析，計算回收率。結果平均回收率為（99.28±1.15）%，詳見表1。

3.4.7 精密度試驗。精密吸取上述同一份標準品溶液10 μL和同一份供試品溶液10 μL，分別在上述的色譜條件下連續進樣6次，計算RSD分別為0.39%、0.52%。表明精密度良好。

3.4.8 穩定性試驗。取同一份供試品溶液分別于0、1、2、4、6、8 h，分別進樣10 μL，測定維生素E的峰面積。結果，RSD＝0.71%，表明穩定性良好。

3.4.9 重復性試驗。對同一批樣品分別取樣6份，按擬定的含量測定方法，制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定供試品溶液和標準品溶液的峰面積，計算維生素E的含量。結果，平均含量為每片6.03 mg，RSD＝1.57%，表明重復性良好。

3.4.10 樣品含量測定。分別取3批樣品，制備成供試品溶液，進樣分析，測定含量，結果見表2。

表1 回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結果Tab 2 Content determination results of samples

3.4.11 含量限度的確定。根據處方量，考慮到投藥量及檢測的誤差，并參考《中國藥典》2005版二部中相同劑型的含量限度的制定，確定本品的含量限度為維生素E應為標示量的85%～115%。表2結果表明上述3批樣品含量均在合格范圍內。

4 討論

處方中維生素E在體內、外均有很強的抗氧化作用，可維持生物膜的正常脂結構和生理功能，可用于延緩衰老、浸出性或炎癥性皮膚病、皮膚角化癥等；維生素A具有促進生長，維持上皮組織如皮膚、結膜等正常功能的作用；硫酸鋅有收斂、防腐作用及促進肉芽組織形成的作用，可加速創傷、潰瘍的愈合，對維生素A的代謝也起重要作用；丁卡因屬于局部麻醉藥，可減輕局部疼痛；地塞米松具有較強的抗炎、抗過敏和免疫抑制作用，局部應用副作用小；土霉素為廣譜抗生素具有抑菌作用。針對口腔扁平苔蘚的特點，將上述藥物科學組方后可用于該病的治療。

維生素E在本品中含量較高，容易測定，通過一系列預試驗，筆者選擇維生素E作為本品的含量控制的指標性成分。對于維生素E的含量測定，在試驗過程中，筆者曾選用以甲醇-水（95∶5）、甲醇-氯仿（95∶5）、甲醇-乙腈（95∶5）為流動相，結果均因其色譜峰分離效果不好而未被采用。最終采用甲醇-異丙醇（88∶12）作為流動相，結果可使主峰的保留時間縮短。維生素E制劑含量測定除《中國藥典》規定采用氣相色譜法外，還有分光光度分析法[5，6]、HPLC 法[7～9]等方法的文獻報道。高效液相色譜法大多采用反相色譜柱進行分析，多以水和甲醇作為流動相[7]，這易造成脂溶性大分子化合物在柱內的沉淀，污染色譜柱，也可能使色譜峰形不理想。氣相色譜法所用的內標物正三十二烷[4]在市場上難購買，給日常分析造成困難，而且樣品前處理較煩瑣。而本文采用的HPLC法是以甲醇和異丙醇作為流動相，使脂溶性維生素E不殘留在柱內，能減少維生素E的保留時間，并提高了柱的穩定性，保持柱分離效能，延長其使用壽命。

對于成膜材料的選擇，相關文獻[10～12]已有報道，與文獻相比，本試驗所選材料雖然成膜性較好，但在延緩藥物釋放、生物相容性等方面有待進一步研究改進。

綜上所述，復方維鋅口腔貼膜處方及制備工藝合理可行，質量控制方法快速、簡便，準確性好，靈敏度高。

[1]張麗梅，王 卓，徐慧欣，等.口腔粘膜疾病的藥物治療[J].醫藥導報，2002，21（3）：170.

[2]洪 鋼，方 紅.扁平苔蘚的治療進展[J].國外醫學-皮膚性病學分冊，2004，30（6）：339.

[3]劉 巍，楊京蓉，于 鐵.復方苔蘚散結合醋酸地塞米松貼膜治療口腔糜爛型扁平苔蘚臨床療效觀察[J].中國實用口腔科雜志，2008，1（12）：728.

[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：21、14、93、674、附錄43.

[5]陳 雅，陳 鈞，何鳳慈.二階導數光譜法測定維生素E乳膏含量[J].中國醫院藥學雜志，2003，23（1）：49.

[6]黃林清，張恩娟，葛 勤，等.維生素E珍珠霜的研制及質量控制[J].中國藥業，2007，16（6）：41.

[7]王 燕，俞 佳，王貴發.高效液相色譜法測定多維護膚乳膏中維生素A、E的含量[J].中國醫院藥學雜志，2004，24（5）：318.

[8]李旭梅，涂厲標，王 真.反相高效液相色譜法測定維生素E乳膏中維生素E的含量[J].醫藥導報，2006，25（5）：463.

[9]王啟硯，饒春愷.HPLC法測定維生素E乳膏中維生素E的含量[J].中國藥品標準，2006，7（4）：290.

[10]鄭利光，王衣祥，翟所迪，等.口腔潰瘍散Ⅱ號雙層膜的研制及藥效學研究[J].中國藥師，2008，11（2）：147.

[11]賈守雄，李 平，魏 琴，等.復方雌三醇陰道生物黏附膜的制備及質量控制[J].中國藥房，2008，19（7）：526.

[12]王 斌，鐘明康，施孝金.治療口腔潰瘍的雙層膜復方制劑的研制[J].中國藥學雜志，2009，44（4）：274.