毛細管氣相色譜法測定鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷的殘留量

宋更申，郭毅，付焱，閆凱（.河北省藥品檢驗所，石家莊市0500；.河北醫科大學藥學院，石家莊市 05007）

鹽酸美金剛（Memantine hydrocloride），化學名稱為1-氨基-3，5-二甲基三環癸烷鹽酸鹽，臨床上主要用于治療帕金森病。鹽酸美金剛原料藥在合成過程中，使用了乙醇、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷等有機溶劑，前3種有機溶劑均可在氫火焰離子化檢測器（FID）上得到良好的靈敏度；而三氯甲烷在上述檢測器上靈敏度低，無法準確定量。因為其結構上含有鹵原子，選用電子捕獲檢測器（ECD）后靈敏度可顯著提高。人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）[1]和《中國藥典》2005年版[2]均規定，三氯甲烷屬第二類殘留溶劑，限度均為0.006%，屬于在藥品中應限制殘留量的溶劑，控制其殘留量對保證藥品質量和用藥安全有重要意義。本文根據ICH的指導原則和《中國藥典》2005年版的相關規定，并參考有關文獻[3]，采用ECD，以N，N-二甲基甲酰胺為溶解介質，測定鹽酸美金剛中三氯甲烷的殘留量。結果表明，本方法簡單、準確、靈敏度高、重復性好，可用于鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷殘留量的測定。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；AB304-S型電子天平（瑞士梅特勒公司）。

鹽酸美金剛（國內M公司，批號：20060818、20060819、20060820，含量：均為100.0%）；三氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-1701毛細管柱（30 m×320 μm×0.25 μm）；柱溫：80℃維持5 min，以35℃·min－1的速率升至210℃，維持10 min；分流進樣方式，分流比：10∶1，進樣口溫度：200 ℃；采用ECD，檢測器溫度：250 ℃；載氣：氮氣，流速：1.0 mL·min－1；進樣量：1μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液。精密稱取三氯甲烷12 mg，置于200 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液。精密量取對照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液。精密稱取本品約0.5 g，置于5 mL容量瓶

中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統適用性試驗

照“2.2”項下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄色譜。結果，三氯甲烷的理論板數為26 852，N，N-二甲基甲酰胺在ECD上沒有響應，不干擾三氯甲烷的測定，詳見圖1。

2.4 線性關系

分別精密量取“2.2.1”項下的對照品貯備液5、10、5、5、5、1 mL，分別置于5、25、25、50、100、50 mL容量瓶中，均加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件測定，以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸。結果，線性方程為A＝1 023.59C+898.21（r＝0.999 9），三氯甲烷檢測濃度線性范圍為1.2～60μg·mL－1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；1.三氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.chloroform

2.5 精密度試驗

2.5.1 日內精密度試驗。精密量取“2.2.2”項下的對照品溶液1μL，按“2.1”項下的色譜條件，連續測定6次，計算三氯甲烷的峰面積的RSD＝1.1%。

2.5.2 日間精密度試驗。精密量取“2.2.2”項下的對照品溶液1μL，按“2.1”項下的色譜條件，連續3 d分別連續測定6次，計算三氯甲烷的峰面積的RSD＝1.2%。

2.6 重復性試驗

精密稱取本品（批號：20060818）約0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共6份，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件測定，檢出本品中三氯甲烷為0.000 4%，RSD＝1.0%。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知三氯甲烷含量的樣品（批號：20060818）約0.5 g，置于5 mL容量瓶中，共9份，分別加入“2.2.1”項下的對照品貯備液0.400、0.500、0.600 mL，各3份，再分別用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件測定，按外標法計算，三氯甲烷的平均回收率為99.6%，RSD＝0.8%。

2.8 檢測限與定量限試驗

采用逐步稀釋法測得，以S/N＝2～3時計算三氯甲烷的檢測限，以S/N＝10時計算三氯甲烷的定量限，結果檢測限為0.32 pg，定量限為1.02 pg。

2.9 樣品中三氯甲烷的含量測定

取三氯甲烷和3批樣品，按“2.2”項下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，按外標法計算三氯甲烷的殘留量，結果3批樣品中三氯甲烷的殘留量均為0.000 4%。

3 討論

鹽酸美金剛在合成過程中使用的4種有機溶劑中，乙醇、乙醚、乙酸乙酯在FID上有良好的靈敏度，而在ECD上響應很弱；三氯甲烷在ECD上靈敏度高，而在FID上靈敏度很低。這種情況下，很難用1種檢測器同時測定上述4種有機溶劑，可以用1根色譜柱分離上述4種溶劑，用FID測定前3種溶劑，用ECD測定三氯甲烷。關于同時測定上述4種溶劑的方法，還有待進一步研究。

三氯甲烷的沸點為61.7℃，N，N-二甲基甲酰胺的沸點為152.8℃，兩者相差較大，采用程序升溫可以更有效地使兩者分離，并縮短分析時間。

本文還采用標準加入法對樣品（批號：20060818）的殘留溶劑的含量進行驗證，結果與外標法一致，表明該方法的基質效應不明顯。由于本方法的分離度、精密度、準確度均達到了《中國藥典》2005年版的相關要求，故此法適用于鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷殘留量的檢測。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊的國際技術要求·質量部分[M].北京：人民衛生出版社，2001：343.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：54～57.

[3]李珂珂，譚豐蘋.毛細管氣相色譜法測定拉米夫定中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18（19）：1 502.