北京番茄黃化曲葉病毒病的發生及分子檢測

李常保 柴 敏 李 季 鄭建秋

番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）為菜豆金色花葉病毒屬（Begomoviruses）的一種雙生病毒，由媒介昆蟲煙粉虱傳播（Zhang Huiet al.，2009）。該病毒可以侵染茄科、豆科等多種植物，主要為害番茄、辣椒、茄子、甘藍和黃瓜等蔬菜以及煙草等經濟作物，特別是在番茄上為害更重。受害植物表現為生長緩慢，植株明顯矮化；頂部葉片皺縮、葉周邊向上卷曲，葉片變厚變小，葉片區域性黃化；病株頂端似菜花狀；坐果少，果實硬、小，不能正常轉色，喪失商品性；為害嚴重時不能開花坐果，造成絕產（褚云霞和朱為民，2009；馮蘭香 等，2009）。

番茄黃化曲葉病毒是近幾年新傳入我國的有害生物，1964年最早在以色列發生，之后迅速擴散到中東、地中海沿岸、東亞、南亞、非洲、歐洲、美國、中美洲、澳大利亞等眾多國家和地區（Momol et al.，1999）。2002年傳入我國南方省份，2005年秋在廣西番茄主產區百色市田陽鎮大面積暴發，同年傳入江浙一帶，2007年傳入河南和山東，2008年該病在全國多個省市發展蔓延（蔡健和 等，2006；何自福 等，2007；趙統敏 等，2007；吳永漢 等2007；于力 等，2009）。2009年該病在河北局部地區和山東大爆發（龔一帆2009），發生面積逾1.3萬hm2，給番茄生產造成巨大損失。

1 病害發生情況

近幾年，番茄黃化曲葉病毒病在我國由南向北迅速蔓延，筆者一直密切關注著北京TYLCV病情及其傳毒媒介煙粉虱的變化。2008年秋冬之際，在北京蔬菜研究中心番茄育種試驗地溫室選種時，筆者觀察到體型較小的煙粉虱，同時在大興、順義區的試驗基地也看到了同樣的現象。2009年8月中旬，北京大興、順義、通州區多個農民來電話反映，自家秋棚番茄生產田病毒病特別嚴重、粉虱難防等，這些信息引起了筆者的警覺。8月17日在本中心的試驗地里，發現了幾株疑似病株，經本院植病專家李興紅老師取樣檢測，9月初確認被檢樣含有TYLCV病毒。隨著疑似病樣被確診，本中心的試驗棚中TYLCV典型癥狀株越來越多。鑒于TYLCV是初次在北京發現且潛在為害甚大，而京郊各區縣的農業技術推廣人員和廣大農民大多缺乏對這一新病害的了解和防控知識，北京市果類蔬菜創新團隊組織了TYLCV防控應急培訓。通過此次應急培訓，使TYLCV為害的嚴重性得到了重視，對其防控策略達成了共識，為下一步的具體防控起到了指導和預警作用。

2 病原分子檢測

2.1 樣本采集 通過創新團隊在京郊的網絡體系，安排部署了對京郊TYLCV發生情況調查和取樣檢測任務。取樣范圍包括順義、大興、通州、密云、房山和延慶6個區縣的番茄主產鄉鎮，還有朝陽、平谷、昌平、懷柔及北京蔬菜研究中心，共采集番茄樣本337份。經過專家對各區縣采集的樣本進行甄別，發現有些病樣癥狀不典型，表現為普通花葉或蕨葉病毒病癥狀。

2.2 分子檢測方法 首先根據TYLCV病毒全序列特異區自主設計PCR引物，研發出對于檢測TYLCV具有專一性、高效性和特異性的引物對序列。也就是說通過PCR擴增反應，只有感染TYLCV的植物才能擴增出條帶，而沒有感染該病的健康植株以及感染其他病毒的植物都擴增不出該條帶，根據PCR擴增產物的條帶有無從而判斷出植物體內是否含有TYLCV。經過典型癥狀植物PCR驗證以及擴增條帶測序檢驗，該對引物檢測TYLCV具有專一性、高效性和特異性（圖1）。在此基礎上，結合植物DNA快速提取技術和平板瓊脂糖快速電泳技術，建立并完善了TYLCV快速高效的分子檢測平臺，用于番茄育苗和番茄育種材料帶毒性檢測。

2.3 分子檢測結果 采用筆者建立的TYLCV快速高效的分子檢測技術檢測樣本337份，其中163份帶有TYLCV病毒，占總樣本數的48%；171份未檢測出TYLCV。對于所有樣本進行發病癥狀確認，檢測出帶有病毒的樣本均具有TYLCV典型癥狀，進一步證明該分子檢測真實有效（圖2）。京郊番茄黃化曲葉病毒病樣本病原的分子檢測結果見表1。

圖1 番茄黃化曲葉病毒特異引物的PCR分子驗證

圖2 番茄黃化曲葉病毒田間取樣的分子檢測電泳圖

表1 京郊番茄黃化曲葉病毒病樣本病原分子檢測結果

檢測出帶毒的163份樣本遍及通州、大興、順義、平谷、密云、延慶、昌平、房山、懷柔、豐臺、朝陽、海淀等區縣的60多個鄉鎮。所調查的發病棚室占調查棚室的45.7%，一般病株率5%～10%，重病棚室病株率20%左右，個別棚室發病率達90%以上。在發生該病的區縣中以大興區發生較為普遍，發病棚室約占種植棚室的80%左右。在京郊番茄生產中種植的品種多達60個，常見品種有：阿魯娜、白奇帝王、百奇、倍盈、菜都3號、大紅粉、大秦粉、東勝、繁榮系列、福樂、改良印第安、格瑞斯、瑰麗100、合作918、合作928、紅天珠、吉朋達、佳麗系列、佳譽、金粉1號、金冠18號、金冠28號、金冠5號、金棚1號、金鵬賽歐、京丹小黃玉、京丹8號、京丹綠寶石、千禧、魁貫、美粉1號、蒙特卡羅、農大128、農大1號、歐頓、棚友、熱帶、三星新秀、勝寶、太寶、天福501、仙客1號、仙客5號、仙客6號、硬粉8號、硬特粒、元粒、躍佳、浙粉202、指航、卓越等。此次普查和檢測的結果表明，目前京郊種植的番茄品種尚沒有對TYLCV表現抗病的品種。但是品種間對TYLCV的敏感性差異較大，多數特色櫻桃類型的番茄品種如京丹綠寶石、京丹8號、09-CG-71和千禧等對TYLCV耐病性較強，而大多數主栽的粉色大果番茄品種對該病毒敏感，發病嚴重。由此可見番茄黃化曲葉病毒已經在京郊番茄主產區以及主栽品種上普遍發生，必須引起高度重視。

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