海豹兩起疫病的診治

肖開提,阿曼古麗·夏依扎,卡那提白克

(1.新疆維吾爾自治區動物衛生監督所,新疆 烏魯木齊 830063;2.新疆維吾爾自治區塔城地區動物疫病控制與診斷中心,新疆 塔城 834700)

1 發病情況及臨床癥狀

烏魯木齊市某娛樂場所先后從內地引進兩批共4只海豹。第一批海豹在2008年6月下旬開始出現游動緩慢、食欲減退、腹瀉等為主要癥狀的疾病。第二批海豹在同年11月下旬開始出現以游動緩慢、食欲減退、腹瀉帶血等為主要癥狀的疾病。娛樂場兩次都是拿著海豹的排泄物要求診斷治療,筆者對兩起病例都進行了實驗室診斷,通過病原菌分離、培養及生化鑒定,結合流行病學、臨床癥狀,確診第一批為嗜水/貂鼠氣單胞菌和大腸桿菌混合感染,第二批為熒光假單胞菌和大腸桿菌混合感染。

2 細菌學鑒定

2.1 鏡檢 在無菌環境中取病海豹的糞便作觸片固定后,進行革蘭染色鏡檢。

2.2 細菌的分離培養 無菌取病海豹的糞便,接種于普通肉湯培養基和厭氧肝湯培養基,37℃培養24 h觀察并進行鏡檢,將普通肉湯培養基中的培養物分別接種于普通培養基、麥康凱培養基和鮮血瓊脂培養基上經37℃培養24 h分離培養,觀察培養特性并進行染色鏡檢,挑取兩個菌株的兩個菌落,分別接種于普通肉湯培養基上,37℃培養24 h培養,進行純培養,并備用。

2.3 動物試驗 將上述兩株菌的純培養物鏡檢,按0.2mL/只,分別腹腔注射兩組小鼠(每組2只,體重16 g左右,由新疆醫科大學實驗動物中心提供),并設對照組進行觀察。

2.4 生化試驗 分別取上述兩株致病菌在普通瓊脂培養物進行氧化酶試驗,結果都為陰性。將2株培養物分別接種于ATB EXPESSION(細菌自動鑒定及藥敏測試儀)ID 32E和ID 32ENG試條上37℃培養24 h。

2.5 血清型鑒定 分別用大腸桿菌腸道致病性埃希氏菌診斷血清(中國生物技術集團公司蘭州生物制品研究所提供,國藥準字S10820097)進行分型。

2.6 藥敏試驗 取上述2株革蘭陰性致病菌的純培養物混合作藥敏試驗(藥敏紙片由北京天壇藥物生物技術開發公司提供,批號200404)。藥敏試驗根據美國臨床標準委員會(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法進行,試驗所選用藥物包括下列抗生素:氨芐西林,阿莫西林/克拉維酸,頭孢噻吩,頭孢噻肟,慶大霉素,環丙沙星,青霉素,鏈霉素,利福平,復方新諾敏。藥敏結果判定標準參照NCCLS手冊(2005版)。

3 結果

3.1 鏡檢結果 在第1批樣品中可見兩端鈍圓、直形或略彎,呈單個或成雙排列,沒有芽孢和莢膜的革蘭陰性短小桿菌和兩端鈍圓、散在或成對,有微莢膜的比前者較大的直桿菌,以下簡稱1號菌株和2號菌株。在第2批樣品中可見兩端鈍圓、直形或略彎,呈單個或成雙排列,沒有芽孢和莢膜的革蘭陰性較小桿菌和兩端鈍圓,散在或成對,有微莢膜的比前者較大的直桿菌,以下簡稱3號菌株和4號菌株。

3.2 細菌的分離培養

3.2.1 在第1批樣品中經普通培養基37℃培養18～20 h后,有凸起、光滑、濕潤、乳白色、邊緣整齊的中等偏大菌落和白色至淺黃色、圓形、表面光滑、邊緣整齊半透明、微隆起的菌落。在麥康凱培養基上可見較大圓整或不規則、扁平或突起的深紅的濕潤菌落和露滴狀、帽針頭大小,呈桔黃色的菌落。在鮮血瓊脂培養基上可見灰白色、不透明、圓而隆起、邊緣整齊或不規則、大而濕潤但不溶血的菌落和白色、小圓形、表面光滑、邊緣整齊,微隆起有β-溶血環菌落。普通肉湯培養基呈均勻混濁液體,對兩株菌分別進行革蘭染色鏡檢可見同樣品鏡檢中見到的兩株菌。

3.2.2 在第2批樣品中經普通培養基 37℃培養18～20 h后,有一株菌的培養特性和3.2.1前面所描述的相同;另一株細菌普通培養基上呈圓形、微隆起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊、灰白色、半透明,菌落呈淺綠色,在紫外線照射下呈現熒光,鮮血培養基為β型溶血。

3.3 動物試驗 4個試驗組8只小鼠均在12～24 h內死亡,剖檢死亡小鼠,臟器分別涂片,經革蘭染色鏡檢,可見與注射培養物相同的細菌,對照小鼠沒有死亡。

3.4 生化試驗 對分離到的4株細菌的培養物分別做氧化酶測定試驗,結果2號菌株和4號菌株呈陰性,將其接種于細菌自動鑒定ID 32E試條上,1號菌株和3號菌株呈陽性將其接種于細菌自動鑒定ID 32NG試條上,37℃培養24 h。細菌自動鑒定儀讀出2號和4號為大腸埃希氏菌,1號為嗜水/豚鼠氣單胞菌,3號為熒光假單胞菌,它們主要的生化試驗指標結果如表1。

表1 生化試驗結果

3.5 血清型鑒定 大腸桿菌用腸道致病性埃希氏菌診斷血清,2號菌株和4號菌株的血清型均為02。

3.6 藥敏試驗 結果對第一批病料痢特靈、新霉素效果好,對第二批病料阿米卡星、新霉素、氧哌嗪青霉素、頭孢哌酮鈉(先鋒必)效果好,其他藥物效果不明顯。

4 討論

4.1 Popoff等(1981)根據有動力氣單胞菌之間的表型和遺傳關系將本群氣單胞菌分為嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和溫和氣單胞菌3個種,嗜水氣單胞菌是條件性致病菌,在淡水、海水及浮游生物中普遍存在,一旦環境被污染,水生動物抵抗力降低,就會暴發本病,稱為有動力氣單胞菌敗血癥。熒光假單胞菌是草魚等魚類的假單胞菌敗血癥或出血性敗血癥的病原菌,在我國流行較廣,在放養、扦捕或凍傷后易感染此菌。大腸桿菌系人和溫血動物腸道后段正常菌群的主要成員之一。是條件性致病菌,并從糞便散播至周圍環境。兩批病料雖感染不同的水生動物傳染性疾病,但同時都感染大腸桿菌。這可能是給海豹飼喂了被這些細菌污染的食物,加之飼養管理跟不上,水源造成污染,使海豹感染上述細菌。另一個可能是海水的配制有問題,水的酸堿度(pH)及鹽度沒有達到要求,使海豹的免疫抵抗力下降,而感染疾病。

4.2 由于治療嗜水氣單胞菌病和熒光假單胞菌病的主要治療藥物為呋喃唑酮,而大腸桿菌對多數藥物有較強的耐藥性,本實驗室的藥敏結果是上述菌株對痢特靈、新霉素、阿米卡星、氧哌嗪青霉素、頭孢哌酮鈉(先鋒必)效果好,其他藥物效果不明顯,娛樂場飼養人員只是盲目的根據海豹提供主的要求用慶大霉素進行治療,使得海豹的病情加劇。因此,最好根據藥敏試驗結果選用敏感的抗菌藥物進行治療,避免同一藥物連續使用,方可避免一些不必要的損失。

[1]楊本升,劉玉斌,茍仕金,等.動物微生物學[M].長春:吉林科學技術出版社,1995:5.

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[3]白文彬,于康震.動物傳染病診斷學[M].北京:中國農業出版社,2002:12.

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