酸美酵素在改善小中豬生產性能和免疫調節上的應用

張超峰,沈建軍

(浙江美保龍生物工程有限公司,浙江金華321017)

酸美酵素是由α-甘露聚糖肽、復合醋酸桿菌、酵母、芽孢桿菌益生菌、小肽和酶等組成。主要成分α-甘露聚糖肽是從經基因修飾的α-溶血性鏈球菌33#菌株的深層發酵培養液中提取的具有多種生物活性的一種多糖物質。主要作用于骨髓、脾臟等免疫器官和實質性器官,在人醫上多用來抗腫瘤以及增強免疫力,在畜、禽上主要用來提高免疫力,促進消化吸收等。

2008年4～7月,筆者在福建某3 000頭母豬規模豬場專門針對保育階段的40日齡小豬,添加不同劑量的酸美酵素,通過測定試驗周期末始個體均重差、料肉比、發病率等研究生長性能的改善;通過測定免疫球蛋白(IgG)、紅細胞數、超氧化物歧化酶(SOD)活性、豬瘟抗體水平來分析酸美酵素在提高小中豬免疫力方面的作用。

1 材料

1.1 試驗地點 福建某生產狀況正常的3 000頭母豬規模豬場。

1.2 試驗材料 酸美酵素是由浙江美保龍生物工程有限公司提供,批次20080319,主要成分α-甘露聚糖肽含量為5%。所有參與試驗的小中豬均為“杜×長×大”三元雜交的起始個體均重在11.3～12.3 kg之間的小豬,由豬場提供。

試驗所需藥品、器材除豬瘟正向間接血凝抗原、陰性和陽性血清購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所外,其余由美保龍生物研究所提供。

1.3 試驗飼糧 所有參與試驗的小中豬飼糧根據試驗要求統一配制,均參照美國NRC(1998版)豬營養需要配合而成。其中,6%龍卷風小中豬系列預混料由浙江大飛龍動保集團提供,飼糧配方見表1。

表1 試驗飼糧配方

2 方法

選取960頭個體健康、生長良好、發育整齊的健康“杜×長×大”小豬,個體均重 11.3～12.3 kg之間。疫苗免疫程序試驗組與對照組相同,試驗分為4組,每組 240頭,即試驗 A組、試驗B組、試驗 C組和對照組。

試驗開始前預喂5 d,試驗周期為40 d。在預試驗的基礎上,各組分別飼喂含酸美酵素0.2%(試驗A 組)、0.4%(試驗B組)、0.6%(試驗C 組)比例的飼料,所有組均為自由采食飲水。試驗初末稱重、記錄飼料使用量、發病情況,同時在試驗起始、中期、末期前腔靜脈竇采血,進行相關檢測。

2.1 實驗室檢測地點 浙江美保龍生物新技術研究所。

2.2 生長性能測定 試驗小豬均在試驗正式開始的第1天隨機分組,并稱重,到第40天再次稱重。同時記錄飼養過程中的飼料使用量,試驗周期內的各組發病率和死亡率。

2.3 免疫力測定 在第1天、第20天、第40天隨機抽樣采血,每組 30頭,每頭 5mL,其中 2.5 mL全血,2.5mL用來制備血清。利用免疫比濁法測定豬的免疫球蛋白。紅細胞計數采用試管稀釋法：用沙利氏吸血管吸取20μL全血吹入含有4mL紅細胞稀釋液的試管底部,吸、吹數次后混勻,用血細胞計數板在顯微鏡下計數并計算。

2.4 豬瘟抗體水平的測定 所以參與試驗豬在出生后25日齡首免豬瘟弱毒活疫苗,60日齡進行二免。試驗開始時(40日齡)、20 d時(60日齡)前、40 d時(80日齡)分別檢測,采用正向血凝試驗。具體操作步驟如下：即在96孔血凝板上,每孔加入50 μL稀釋液,每排第1孔加入待檢血清50μL,遞比稀釋待檢血清至血清濃度為1∶512,最后50μL丟棄。再在每孔加入抗原診斷液25μL,置于濕盒中25℃孵育1.5～3 h,判定結果。

2.5 血清超氧化物歧化酶活性測定 利用黃嘌呤氧化酶法測定,SOD檢測試劑盒和紫外分光光度計測定SOD活性,參照試劑盒使用說明進行。

2.6 數據分析 試驗結果使用SPSS 15.0軟件進行統計分析。

3 結果與分析

3.1 生長性能測定結果 從表2可以看出,添加不同劑量的酸美酵素,試驗B、C組的日增重分別比對照組提高59.46 g(P＜0.05)和81.98 g(P＜0.01),但B、C組間差異不明顯;料肉比和發病率分別降低0.19(P＜0.05)和0.27(P＜0.05)、12.5(P＜0.01)和12.92(P＜0.01),B、C組間差異不明顯。不同試驗組與對照組相比,各組間的日均耗料量未見明顯差異(P＞0.05)。添加酸美酵素的各組死亡率均明顯低于對照組。考慮到使用成本,試驗B組0.4%的酸美酵素添加量較為合適。

表2 添加不同劑量酸美酵素對仔豬生長性能影響的測定結果

3.2 免疫調節因子測定結果 見表3。

表3 添加不同劑量酸美酵素對仔豬免疫調節因子的測定結果

從表3可以看出,試驗初始測定的免疫球蛋白水平并無差異,當試驗進行到20 d時,試驗B組與對照組相比IgG水平較高,差異明顯(P＜0.05),但其他各組間未見明顯差異。到試驗進行的第40天,試驗組免疫球蛋白的測定水平均比對照組的要高,差異明顯(P＜0.05)。可見,短期使用酸美酵素的免疫效果并不明顯,連續使用1個月以上,對仔豬的免疫力提升見到明顯效果。

從不同采血時間測得的紅細胞數目來看,試驗進行到20 d時試驗組與對照組相比較紅細胞數均有顯著提高(P＜0.05),但試驗組間差異不明顯(P＞0.05)。這表明酸美酵素有增加紅細胞,提高免疫容量的作用[1],但是0.2%～0.6%的添加量沒有差異。當試驗進行到40 d時,試驗組紅細胞數雖然仍有增加,試驗組間仍不明顯(P＞0.05),與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。40 d時試驗組所測得的紅細胞水平與20 d時相比未見明顯差異,這表明當酸美酵素使用一段時間后能夠穩定機體免疫系統,自體調節免疫容量的平衡,防止免疫紊亂現象的發生。

試驗進行到第20天時,各試驗組間的超氧化物歧化酶活性與對照組相比變化差異顯著(P＜0.05);試驗進行到第40天時,各試驗組間的超氧化物歧化酶活性與對照組相比變化差異顯著(P＜0.05);試驗組間20 d時與40 d時相比較差異顯著。這表明隨著使用酸美酵素時間的延長,SOD活性在進一步增強,從而刺激機體器官的生長發育,迅速進行代謝。

3.3 豬瘟抗體水平的測定結果 見表4。

表4 豬瘟抗體水平的測定合格率 (%)

從試驗檢測結果來看,25日齡仔豬豬瘟弱毒苗首免效果并不好,試驗組與對照組均在43%左右波動。當試驗進行到20 d時(60日齡2免前),發現試驗組的豬瘟抗體水平均有提升;對照組豬瘟抗體水平在下降(P＞0.05),試驗組與對照組相比差異顯著(P＜0.05)。當試驗進行到40 d時,試驗組與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。

4 討論

4.1 試驗結果表明,酸美酵素在改善仔豬生產性能方面的效果明顯。0.4%和0.6%的添加量對提高仔豬日增重、降低死亡率和發病率比0.2%的添加量有更為明顯的效果,同時降低了料肉比,提高了飼料報酬。

4.2 酸美酵素在提升免疫力方面需要時間較長,實驗結果表明,提升免疫球蛋白水平至少需要1個月以上。要連續使用不少于40 d,才能有效降低死淘率,控制在5%左右。當然,科學合理的飼養管理操作對豬群整體水平的影響不可忽略,即使使用再好的藥物,但管理跟不上依然不會取得較好的效果。

4.3 紅細胞自身具有攜氧、運輸氣體的功能外,還具有識別、粘附、殺傷抗原、清除循環免疫復合物和病原體、參與免疫調控等多種重要免疫功能。本試驗進行20 d和40 d時,試驗A、B、C組的紅細胞數均比對照組高,差異明顯。這表明酸美酵素通過提升紅細胞數量增加了機體免疫容量,間接提升了組織器官的免疫功能。

超氧化物歧化酶就是正常組織細胞中存在的抗氧化酶,它能夠滅活自由基,具有保護細胞的功能。

試驗結果表明：40日齡仔豬飼喂不同劑量的酸美酵素,在試驗0～40 d過程中,豬血清內SOD含量一直在不斷升高,與對照組相比,試驗經20 d時差異顯著(P＜0.05),達到40 d時差異極顯著(P＜0.01),但試驗組間差異不明顯。從外觀上看,試驗豬只精神活躍,主要是因為體內各器官組織的細胞在α-甘露聚糖肽作用下活化能力加強,組織代謝旺盛引起的,這也是試驗組死淘率較低(5%左右)的原因,而對照組仔豬的精神狀況一般,死淘率超過10%。

4.4 在筆者實際工作過程中,發現很多規模場豬瘟抗體實際檢測水平均達不到合格標準。免疫不合格產生的原因可能是獸醫操作不規范、疫苗使用不合理以及應激和飼養管理不善造成的。使用酸美酵素以后發現不僅提高了豬瘟免疫合格率(74%～85%),而且延緩了抗體水平下降速度,對保證豬群的穩定,提高豬群有效生產力發揮出重要作用。

5 結語

添加不同劑量的酸美酵素對仔豬的生長性能和免疫調節有明顯的改善作用,其中0.4%～0.6%的添加量比0.2%的添加量效果更好。

[1] 樊福好.繼承免疫學與現代豬病的發展[J].廣東養豬業,2009(1)：45-51.

[2] 汪敬武,王兆喜,楊偉平.流動注射免疫比濁法測定血清中免疫球蛋白A[J].分析化學,2004,32(6)：724-728.

[3] Kaw ai K,Kuauda R,Itam i T.Mechanism s of proctection in ayuorally vaccinated for vib risis[J].Fish Path,1981,15(3/4)：257-262.