葛根素對摘除卵巢小鼠血清激素含量的影響

白東義,韓 慧,佟春玲,巴音吉日嘎拉

(內蒙古農業大學動物科學與醫學學院,內蒙古 呼和浩特 010018)

葛根素為葛根中提取的一種異黃酮類化合物,具有擴張冠脈和腦血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收縮功能、促進血液循環等作用。在臨床上現已廣泛使用,近幾年有許多葛根素具有雌激素樣作用的報道,但還沒有得到充分的依據。因此,為了證實葛根素是否有雌激素樣作用,設計了本試驗,為以后在臨床上應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 50只清潔級純系昆明種21日齡雌性小鼠,體重9～12 g,由內蒙古大學實驗動物研究中心提供(許可證號:SCXK(蒙2002-0001))。

1.2 試驗藥物 葛根素粉劑由陜西省安康市禾燁生物工程有限公司提供,批號為 050703、純度為99.70%;己烯雌酚片劑由上海信誼康捷藥業有限公司提供,批號為050301;黃體酮注射液由浙江仙琚制藥股份有限公司提供,批號為050203;血清孕酮放免試劑盒(P(HY-021)RIA KIT);人血清雌二醇放免試劑盒(E2-17β(HY-022)RIA KIT);人胎盤催乳素放免試劑盒(HPL(HY-024)RIA KIT);人血清生長激素放免試劑盒(HGH(HY-026)RIA KIT);藥盒廠家:北京華英生物技術研究所。

1.3 儀器 金諾 TD5002電子天平(產品編號:53474,余姚市金諾天平儀器有限公司),日本OLYMPUS電子讀數分析天平,普通手術器械,各種型號注射器等。

1.4 雙側卵巢摘除小鼠模型的建立 取小鼠40只,施摘除卵巢術,切除卵巢,然后逐層縫合、消毒,做術后護理[1]。

1.5 實驗動物分組情況 將雙側卵巢摘除小鼠正常飼養1周后,按體重隨機分為4組。即陰性對照組、試驗組(葛根素組)、陽性對照組Ⅰ(己烯雌酚組)和陽性對照組Ⅱ(DSP+P混合組),另設正常對照組,每組10只,共50只小鼠。

1.6 給藥方法 正常對照組和陰性對照組蒸餾水灌胃;試驗組葛根素水溶液(10 mg/mL)灌胃;陽性對照組I己烯雌酚懸浮液(20μg/mL)灌胃;陽性對照組Ⅱ己烯雌酚懸浮液(20μg/mL)和黃體酮注射液(20 mg/mL)混合灌胃。隔日給藥1次,各組每次每只0.1mL,連續給藥3周。

1.7 檢測方法及指標 給藥結束后將各組小鼠眼球靜脈叢采血致死,分離血清,在-4℃冰箱內保存片刻后冷凍,然后采用放射免疫分析法測定小鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、生長激素(GH)、催乳素(PRL)的含量。

2 試驗結果

2.1 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中E2含量的影響由表1可見,陰性對照組與正常組比較,摘除卵巢后小鼠血清雌二醇含量顯著降低,差異顯著(P＜0.05);陰性對照組與兩個陽性對照組比較,血清雌二醇含量差異不顯著(P＞0.05);葛根素組與陰性對照組、陽性對照組之間亦均無顯著差異(P＞0.05)。

表1 葛根素對卵巢摘除小鼠血清中雌二醇(E2)含量的影響 (單位:p g/mL)

2.2 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中孕酮(P)含量的影響 由表2可見,正常對照組與摘除卵巢的陰性對照組比較,摘除卵巢后血清孕酮含量降低,有顯著差異(P＜0.05)。葛根素組、己烯雌酚組、DSP+P混合組,均能提高血清孕酮含量,與陰性對照組比較差異顯著(P＜0.05),與正常組比較差異不顯著(P＞0.05),提示葛根素、己烯雌酚及DSP+P均能提高血清孕酮含量,并使其恢復到正常水平。

表2 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中孕酮(P)含量的比較 (單位:n g/mL)

2.3 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中生長激素(GH)含量的影響 由下表可見,正常對照組與陰性對照組血清生長激素含量比較,摘除卵巢后小鼠血清生長激素含量升高,差異顯著(P＜0.05)。葛根素組、己烯雌酚組、DSP+P組,均能顯著的降低血清生長激素含量,與陰性對照組比較差異顯著(P＜0.05),與正常組比較差異不顯著,即葛根素、己烯雌酚、DSP+P均能顯著抑制卵巢摘除所引起的血清生長激素含量過高,并使其恢復到正常水平。

表3 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中生長激素(GH)含量的影響 (單位:n g/mL)

2.4 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中催乳素(PRL)含量的影響 由表4可見,正常對照組與陰性對照組比較,摘除卵巢后小鼠血清催乳素含量無顯著變化,差異不顯著(P＞0.05)。葛根素、己烯雌酚、DSP+P對血清催乳素含量均無明顯影響。

表4 葛根素對摘除卵巢小鼠血清中催乳素(PRL)含量的影響 (單位:μg/mL)

3 討論

雌激素主要由卵巢合成和分泌。本試驗中,摘除卵巢后陰性對照組小鼠血清雌二醇含量比正常對照組降低,差異顯著(P＜0.05),這表明建立的動物模型成立。事實證明,在動物體內類固醇激素在靶細胞上的作用部位主要是細胞質和細胞核,只有對某種激素敏感的細胞才具有積聚這種激素的能力[2]。DES是非類固醇合成雌激素,但是具有和類固醇雌激素同樣的生物學效能的化學合成藥品,所以它對靶器官的作用非常明顯。本試驗中,摘除卵巢后小鼠血清中雌二醇含量顯著降低,說明血清中雌二醇含量水平與卵巢的功能密切相關。葛根素對摘除卵巢小鼠血清雌二醇含量無明顯影響,說明葛根素雖然有雌激素樣作用,但不能取代卵巢的功能而保證機體內雌二醇的正常水平。

體內的孕激素對動物正常性機能的維持具有決定性作用,外源性孕激素則可以調節正常的和紊亂的性機能。本試驗結果顯示,摘除卵巢后,血清P含量明顯下降,與正常組相比差異顯著(P＜0.05)。摘除卵巢后,使用DES和DES+P的兩個陽性對照組小鼠的血清P含量均提高到正常對照組的水平。其中DES+P組小鼠血清P含量最高。表明使用的外源性P對血清 P水平的提高有一定的作用。研究證實[3],外源性孕酮在母馬外周血槳中消失極快。因此,內源性血清P含量可能是由外源性激素刺激所致。由此認為,葛根素有效地升高了卵巢摘除鼠血清中孕酮的含量,其作用機理可能是通過刺激腎上腺皮質代償性分泌孕酮。

生長激素(GH)是一種由垂體前葉分泌,調節脊椎動物生長發育的重要多肽類激素。試驗證明,如若長期服用雌激素,血清GH基礎水平升高而生長激素介質(SM)降低。若一次大劑量投藥,3 h內,SM降低50%,同時GH升高[4]。雌激素所致上述兩種變化的關系尚不清楚。但本次試驗結果和以上的試驗結果不同,摘除卵巢后小鼠血清雌二醇水平明顯降低,而生長激素水平顯著升高(P＜0.05)。這是因為卵巢有調節多種激素之間復雜關系的重要作用,摘除卵巢后可能雌激素和生長激素的正相關關系被破壞所致。DES和DES+P兩個陽性對照組小鼠血清GH含量均降低到正常對照組的水平,無差異(P＞0.05)。葛根素組小鼠的血清GH含量與正常對照組和兩個陽性對照組的差異不顯著(P＞0.05)。葛根素對GH的分泌調節的作用存在兩種可能性:(1)雌激素和孕激素有協同情況下,葛根素能提高GH分泌。(2)機體失去雌激素和孕激素的協同情況下,葛根素能抑制GH分泌。

催乳素(PRL)是垂體前葉分泌的一種重要的單純蛋白質生殖激素,而且與機體其他系統的功能也具有密切關系。本研究結果顯示,對照組與使用DES、DES+P和葛根素的3組之間血清PRL含量差異不顯著(P＞0.05),其中DES+P組的血清PRL含量稍低。總之,葛根素、DES和DES+P對摘除卵巢小鼠的血清PRL含量無顯著影響,證明卵巢摘除和外源性激素對其含量無顯著影響。

[1]巴音吉日嘎拉,松元光春,西中川駿,等.穿山甲、王不留行對卵巢摘除小白鼠乳腺實質發育的影響研究[J].中獸醫醫藥雜志,2007,1:7-8.

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