李寶聚博士診病手記（二十）如何利用顯微鏡簡易診斷蔬菜細菌病害

張珊珊 李寶聚 王相晶 謝學文 石延霞

在生產實踐中，基層農民和相關從業人員，對蔬菜細菌病害的田間識別主要是通過發病癥狀進行診斷，但植物病害的發生是致病菌、寄主和環境共同作用的產物，土壤、溫濕度、輪作物等環境條件的差別可能導致病原物積累、發病癥狀甚至致病菌自身發生變化，這樣，一種病害表現的癥狀就不一而足。單是憑借癥狀識別細菌病害不準確，容易誤診。在很多時候，人們的傳統認識還拘泥在病斑水浸狀、流膿、腐爛等就是細菌病害的固定模式中，實際上，這種認識是不科學的。我們在廣泛采集標本鏡檢、鑒定的基礎上發現，很多生理性病害也會有細菌病害的常見癥狀，比較可靠的方法是利用顯微鏡對病部進行顯微診斷，根據有無病原細菌菌體溢出（簡稱菌溢，切開感病組織后，組織液中大量繁殖的細菌溢出）來判別細菌病害，這是比較科學的方法，也很簡單易行。

在蔬菜生產中，茄果類青枯病、瓜類細菌性果腐病、十字花科軟腐病及馬鈴薯環腐病都是常見的為害性很強的細菌病害，也是世界性的重要病害，造成了巨大的經濟損失。僅2009年8、9月發生在貴州省修文縣的番茄潰瘍病造成的番茄絕產就達66.7 hm2。所以，在農業生產中，對細菌病害的正確識別尤為重要，早期發現、對癥下藥，可減少一定的經濟損失。

細菌病害主要侵染植株的葉片、果實和根莖部等器官。我們以小白菜黑腐病〔由油菜黃單胞菌油菜致病變種Xanthomonas campestris pv.campestris（Pammel）Dowson.引起〕病葉和番茄青枯病〔由青枯假單胞桿菌Pseudomonas solanacearum（Smith）Smith引起〕病莖為例，來具體介紹如何對病葉和病莖切片顯微觀察菌溢。

1 葉部細菌病害顯微觀察

1.1 切片的制作 采集新鮮的植物感病葉片（彩色圖版1）。取一塊干凈的載玻片，在中間滴1滴清水（最好是飲用純凈水），不宜過多，1滴即可。在病健交界處（發病組織和健康組織的交界處），用干凈（紗布擦拭即可，沒有紗布，面巾紙擦拭也可以）的刀片（我們用的是實驗室專用切片刀片，用男士雙面刮胡刀片也可，注意防止劃傷手指）切取大約5 mm見方的組織（彩色圖版2）。在載玻片的干燥處，用刀片將切下的組織按“十”字形劃成4小塊（彩色圖版3），以破壞被侵染組織，使其中的細菌大量釋放（經我們的研究證明，真正由細菌引起的病害感病組織中定會有大量的細菌存在，破壞組織可使其快速溢出）。可用刀尖蘸少量水粘附小的切片組織蘸入水滴中（彩色圖版4）。先將蓋玻片的一側觸到水滴（彩色圖版5），輕輕蓋上蓋玻片，注意避免氣泡的產生。使清水在蓋玻片下充分展開（彩色圖版6）。用吸水紙吸干多余的水。

1.2 顯微鏡觀察 把做好的切片放在低倍顯微鏡下觀察（物鏡10倍即可），將切片上的感病組織置于光源投射的中心，調節粗準焦螺旋直到切片與目鏡的距離最近，緩慢調節細準焦螺旋，使載物臺緩慢下降，視野中若有物質一晃而過時即停止調節，調回原來的位置，移動到病組織邊緣，可見溢出的大量云霧狀細菌菌體（彩色圖版7）。燈光不宜過亮，視野調暗更易觀察。若想觀察更清楚，可轉換到高倍鏡下觀察，適當調亮視野。

感病組織菌溢非常明顯時，可把做好的切片對準燈光，或放在黑色背景下，肉眼即可見白色向外擴展的細菌菌溢（彩色圖版8）。

2 根莖部細菌病害顯微觀察（以莖部病害為例）

2.1 切片的制作 采集一段新鮮的植物感病莖部。取一塊干凈的載玻片，在中間滴1滴清水。找到莖表皮的感病處（內部一般有病灶），用無菌的雙面刀片（莖組織內部包含韌皮部和木質部，排列比較緊密，需用鋒利的刀片，注意防止劃傷手指）縱剖，可見感病變色的木質部或韌皮部，縱向切取薄薄的一小片感病的內部組織（彩色圖版9）。在載玻片的干燥處，用刀片把切片中健康的部分（主要是白色沒有病變的組織）除去，將感病組織切成幾塊。可用刀尖蘸少量水將小的切片組織蘸入水滴中。先將蓋玻片的一側觸到水滴，輕輕蓋上蓋玻片，注意避免氣泡的產生。因為莖部組織較厚實，1滴水可能無法完全浸潤感病組織，可從蓋玻片邊緣酌量滴入少許水，使感病組織在蓋玻片下充分展開浸潤。用吸水紙吸干多余的水。

2.2 顯微鏡觀察 觀察方法同葉部細菌病害。

3 生理病害與細菌病害顯微診斷區別

在生產中，有些生理性病害也有水漬狀、流膿、腐爛等癥狀，如常見的黃瓜泡狀斑點病（彩色圖版10）、辣椒臍腐病等，都很容易與細菌病害發生混淆。為了便于大家更好的識別細菌病害，我們以黃瓜泡狀斑點病為例，將鏡檢制片結果與被病原細菌侵染的感病組織進行對比，便于大家進一步了解如何正確的診斷和區別細菌病害與生理病害。

發生黃瓜泡狀斑點病的病葉正面有黃白色小泡狀凸起，葉背面病斑周圍水浸狀（彩色圖版11），所以生產中很容易被誤認為細菌病害。通過病組織切片顯微觀察，確認其沒有菌溢（彩色圖版12），與細菌病害病組織切片對比觀察，區別更為明顯。這也充分說明對蔬菜細菌病害的簡易診斷，顯微觀察是真正科學和有效的方法。