單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對(duì)側(cè)睪丸組織CGRP和LDH的測(cè)定

包小周，秦樂，陳肖鳴

(溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院 小兒外科，浙江 溫州 325035)

單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)好發(fā)于青春前期男性，除引起同側(cè)睪丸受損外，也可累及對(duì)側(cè)睪丸[1]。降鈣基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是目前已知的生物體內(nèi)最強(qiáng)大的舒血管活性肽[2]，近幾年來，被廣泛應(yīng)用于腦、心、肝、腎等組織器官的缺血再灌注損傷研究；但其在睪丸組織中的作用罕見報(bào)道。本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后CGRP及乳酸脫氫酶（lactate dehydrojgenase，LDH）在對(duì)側(cè)睪丸組織中濃度變化，了解CGRP在對(duì)側(cè)睪丸中的作用。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物分組 選取處于青春發(fā)育前期28～30 d的健康雄性SD大鼠30只，體重150～200 g，隨機(jī)分為假手術(shù)組、扭轉(zhuǎn)復(fù)位組和扭轉(zhuǎn)切除組，每組10只。

1.2 動(dòng)物模型建立 所有大鼠均在術(shù)前以25%烏拉坦行腹腔注射全麻。假手術(shù)組將左側(cè)陰囊打開，分離暴露左側(cè)睪丸后即予固定縫合。扭轉(zhuǎn)復(fù)位組和扭轉(zhuǎn)切除組先依Turner法[3]建立左側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型：左下腹小切口，游離左側(cè)睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍組織至附睪頭，睪丸順時(shí)針扭轉(zhuǎn)720 °，固定扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸防止自然復(fù)位，維持4 h后原切口打開，扭轉(zhuǎn)復(fù)位組復(fù)位扭轉(zhuǎn)睪丸并固定后關(guān)閉切口；扭轉(zhuǎn)切除組不予復(fù)位，直接切除扭轉(zhuǎn)的睪丸及附睪，結(jié)扎精索末端后縫合切口。

1.3 標(biāo)本制備 各組大鼠分別于術(shù)后4 h和24 h時(shí)以快速脫頸法處死5只，采集未扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸標(biāo)本用于制備組織勻漿。

1.4 檢測(cè)方法 按試劑盒要求制備組織勻漿；以ELISA法測(cè)定CGPP、LDH濃度。均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊性用LSD檢驗(yàn)，方差不齊性用Dunnett T3檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 相對(duì)于假手術(shù)組與扭轉(zhuǎn)切除組，扭轉(zhuǎn)復(fù)位組的對(duì)側(cè)睪丸CGRP、LDH濃度（見表1）均在術(shù)后4 h起有明顯升高（P<0.05），而假手術(shù)組與扭轉(zhuǎn)切除組的同類指標(biāo)比較差異無顯著性。

表1 大鼠CGRP及LDH濃度值

2.2 Tuner法是較為成熟的睪丸扭轉(zhuǎn)模型制作方法，經(jīng)不斷改良，現(xiàn)有操作有創(chuàng)口小、出血較少的優(yōu)點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)中無大鼠死亡；扭轉(zhuǎn)復(fù)位組大鼠煩躁不安明顯，其余2組未見此現(xiàn)象。麻醉蘇醒后各組大鼠飲食情況良好，按統(tǒng)一條件飼養(yǎng)，未使用其他藥物，但扭轉(zhuǎn)復(fù)位組大鼠煩躁不安感明顯，其余2組未見此現(xiàn)象。

2.3 術(shù)后4 h及24 h時(shí)取材時(shí)見扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸呈黑紫色，淤血腫脹明顯（見圖1）；各組對(duì)側(cè)睪丸肉眼可見改變不甚明顯（見圖2）；既往曾行類似實(shí)驗(yàn)并行病理檢查，示扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸出現(xiàn)大面積凝固性壞死，而對(duì)側(cè)睪丸亦有不同程度受損[4]。

圖1 扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸

圖2 對(duì)側(cè)睪丸

3 討論

組織低氧時(shí)可導(dǎo)致乳酸堆積，從而引起LDH濃度上升，因此LDH水平可以反映組織的低氧程度。本實(shí)驗(yàn)中，相比于扭轉(zhuǎn)切除組與假手術(shù)組，扭轉(zhuǎn)復(fù)位組LDH的濃度4 h時(shí)即見明顯升高，示對(duì)側(cè)睪丸組織存在低氧情況。我們此前的類似實(shí)驗(yàn)也已證實(shí)對(duì)側(cè)睪丸存在一定程度的缺血再灌注損傷[4，6]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。

而CGRP作為目前已知的生物體內(nèi)最強(qiáng)大的舒血管活性肽，在周圍神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布，具有傳遞傷害性感覺信息、參與痛覺信息傳入的調(diào)制、擴(kuò)張組織血管等作用[2]。本實(shí)驗(yàn)中，相比于扭轉(zhuǎn)切除組與假手術(shù)組，對(duì)側(cè)睪丸組織中的CGRP 4 h時(shí)即開始升高，間接說明對(duì)側(cè)睪丸存在明顯的血管擴(kuò)張現(xiàn)象。國(guó)內(nèi)陳林等[5]應(yīng)用B超觀察單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對(duì)側(cè)睪丸血流情況，發(fā)現(xiàn)直至復(fù)位后72 h，對(duì)側(cè)睪丸的血供仍遠(yuǎn)高于對(duì)照的假手術(shù)組，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。

據(jù)本實(shí)驗(yàn)中對(duì)側(cè)睪丸CGRP、LDH的濃度增高，以及既往實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的對(duì)側(cè)睪丸存在缺血再灌注損傷的情況，我們推測(cè)由于單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對(duì)側(cè)睪丸存在一定程度的缺血、低氧，引起局部包括自由基、一氧化氮、乳酸等在內(nèi)的大量有毒物質(zhì)積聚[6]，進(jìn)而通過刺激廣泛分布于對(duì)側(cè)睪丸的周圍神經(jīng)而導(dǎo)致局部CGRP大量釋放，引起對(duì)側(cè)睪丸血管擴(kuò)張，血供增加；就血管擴(kuò)張本身而言，我們推測(cè)可能為一種拮抗組織缺血低氧的反應(yīng)性保護(hù)機(jī)制，具體尚待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

值得指出的是，CGRP與LDH兩項(xiàng)指標(biāo)在假手術(shù)組與扭轉(zhuǎn)切除組對(duì)側(cè)睪丸的比較中差異均無顯著性，提示扭轉(zhuǎn)切除組中大鼠的對(duì)側(cè)睪丸未受明顯影響。我們?cè)诩韧念愃蒲芯恐幸惨炎C實(shí)扭轉(zhuǎn)切除組的對(duì)側(cè)睪丸無明顯受損[6]。因此，我們認(rèn)為在證實(shí)單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)并出現(xiàn)嚴(yán)重壞死的情況下，不予復(fù)位而行睪丸切除可能對(duì)另側(cè)睪丸組織有保護(hù)作用。

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