水泡狀胎塊與水腫性流產(chǎn)患者印記基因P57kip2檢測(cè)分析

廖旭慧 宋 云 (浙江麗水市人民醫(yī)院 323000)

水泡狀胎塊(HM)是最常見的妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病，根據(jù)肉眼檢查、顯微鏡下特點(diǎn)及染色體核型分析和臨床表現(xiàn)不同，分為完全性水泡狀胎塊(CHM)和部分性水泡狀胎塊(PHM)[1]。臨床上單純依靠病理組織學(xué)難以區(qū)分一些不典型病例。本研究采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)CHM、PHM及水腫性流產(chǎn)(HA)組織中P57kip2的表達(dá)情況，以探討P57kip2在HM的診斷分型及臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集本院2003年1月至2008年12月經(jīng)病理確診CHM 30例、PHM 30例、HA 15例，均為首次清宮標(biāo)本，孕齡為6～16周，年齡22～37歲，平均29歲。取正常早期妊娠絨毛組織20例作為對(duì)照組。

1.2 試劑與方法 鼠抗人單克隆抗體P57kip2和Elivision檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化采用Elivision法，常規(guī)設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，用已知陽性片作陽性對(duì)照，以TBS代替一抗作陰性對(duì)照。所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水、檸檬酸緩沖液高壓抗原修復(fù)、3%H2O2封閉過氧化物酶。滴加鼠抗人P57kip2單克隆抗體工作液室溫孵育60min,PBS液沖洗3次，再滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫孵育30min，室溫下DAB顯色，自來水沖洗，復(fù)染，脫水透明，封片。

1.3 結(jié)果判定 P57kip2蛋白陽性定位于細(xì)胞核，以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色的顆粒為陽性，陽性細(xì)胞<5%為(-)，5%～24%為(+)，25%～49%(++)，>75%(+++)。

2 結(jié)果

2.1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常絨毛中的表達(dá)情況(表1) P57kip2在CHM中存在表達(dá)分布的細(xì)胞有特異性，CHM高度水腫的絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞P57kip2表達(dá)幾乎陰性，絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞散在陽性。PHM水腫的絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞P57kip2表達(dá)陽性。HA組織中絨毛間質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛外的滋養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞P57kip2均陽性表達(dá)。早孕正常絨毛的表達(dá)與HA相似。四種類型的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞P57kip2均陰性。可見，P57kip2在CHM與其他三種類型的胎盤比較，細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)有顯著差異，而絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)和合體滋養(yǎng)層細(xì)胞無明顯差別。

表1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常絨毛中的表達(dá)情況

2.2 CHM、PHM、HA細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞中的P57kip2表達(dá)(表2) CHM與PHM、HA三種組織類型細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞P57kip2基因表達(dá)陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2＝52.32，P<0.01)。

表2 CHM、PHM、HA細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞中的P57kip2表達(dá) [例(%)]

3 討論

水泡狀胎塊是一組良性妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病，但是有一定的惡變傾向，完全性水泡狀胎塊的惡變率約20%，部分性水泡狀胎塊為1%～10%[2]。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道侵襲性葡萄胎主要來自完全性水泡狀胎塊，罕見來自部分性水泡狀胎塊[3]。盡管有病理組織學(xué)診斷與鑒別診斷標(biāo)準(zhǔn)，但當(dāng)送檢標(biāo)本的臨床和病理特征不明顯時(shí)，診斷較為困難，特別是處于妊娠6～9周之間的早期CHM，常常被誤診為水腫性流產(chǎn)。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者運(yùn)用分子及細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，為水泡狀胎塊的分類、發(fā)病機(jī)制和臨床預(yù)后評(píng)估提供了更客觀、科學(xué)的診斷方法。基因組印記被認(rèn)為在HM的形成中起關(guān)鍵作用[4]。CHM形成機(jī)制是空卵受精，不含母體核的DNA，核型為46XX，均為純合子，為二倍體，滋養(yǎng)層細(xì)胞核只含父系的染色體[5]，父體DNA過多引起胚胎外過度生長(zhǎng)和分化，結(jié)果導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞的顯著增生。PHM染色體組成為三倍體（69，XXX或69，XXY），一個(gè)來自母體，另兩個(gè)來自父本單倍體，為正常卵子的雙精子受精[6]。

P57kip2是細(xì)胞周期抑制因子和腫瘤抑制因子。此基因是母源等位基因表達(dá)，父源等位基因的表達(dá)印記被抑制而不表達(dá)。CHM均由父系DNA產(chǎn)生，無母系DNA，P57kip2不表達(dá)；PHM由一個(gè)母源性DNA和兩個(gè)父源性DNA構(gòu)成，表達(dá)P57kip2。Fukunaga[7]研究發(fā)現(xiàn)，P57kip2在正常早孕絨毛的細(xì)胞滋養(yǎng)層及絨毛間質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)，而DNA完全來自父方的CHM不表達(dá)或極少表達(dá)；DNA來自父母雙方的PHM的表達(dá)類似正常絨毛。P57kip2抗體單克隆可以在石蠟切片中表達(dá)，染色陽性定位胞核。我們運(yùn)用免疫組化方法，研究結(jié)果顯示，P57kip2在CHM中幾乎陰性表達(dá)，而在PHM和HA中為強(qiáng)陽性表達(dá)。

綜上所述，P57kip2基因的免疫組化分析有助于水泡狀胎塊的診斷分類，輔助臨床正確治療及判斷預(yù)后。

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