益智仁醇提取物對(duì)動(dòng)物胃腸運(yùn)動(dòng)的影響Δ

李興華，胡昌江，李文兵，黃勤挽，謝秀瓊（成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都市 611137）

益智仁醇提取物對(duì)動(dòng)物胃腸運(yùn)動(dòng)的影響Δ

李興華＊，胡昌江#，李文兵，黃勤挽，謝秀瓊（成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都市 611137）

目的：研究益智仁醇提取物對(duì)動(dòng)物胃腸運(yùn)動(dòng)的影響。方法：采用小鼠在體胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，觀察益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠胃排空、小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)和家兔離體腸肌收縮的影響。結(jié)果：益智仁醇提取物在5、10、20 g·kg-1劑量下給藥對(duì)正常小鼠胃排空有顯著抑制作用，對(duì)家兔離體腸肌收縮有顯著抑制作用，對(duì)氯化乙酰膽堿引起的腸肌興奮有顯著拮抗作用。結(jié)論：益智仁醇提取物對(duì)動(dòng)物胃腸運(yùn)動(dòng)有抑制作用，其作用途徑可能與M膽堿受體有關(guān)。

益智仁醇提取物；胃排空；小腸推進(jìn)；離體腸肌

Δ國(guó)家科技支撐計(jì)劃子課題（2006BAI09B06-09）

＊講師，博士。研究方向：中藥炮制學(xué)。E-mail：tangzhongli1981@163.com

#通訊作者：教授，博士研究生導(dǎo)師。研究方向：中藥炮制學(xué)。E-mail：hhccjj@hotmail.com

益智為姜科植物益智Alpinia oxyphyllaMiq.的干燥成熟果實(shí)，主產(chǎn)于我國(guó)的海南和廣東，為四大南藥之一。其功效為溫脾止瀉、攝唾涎、暖腎、固精縮尿，主治脾寒泄瀉、腹中冷痛、口多涎唾、腎虛遺尿、小便頻數(shù)、遺精白濁[1]。《本草綱目》記載：“腹脹忽瀉，日夜不止，諸藥不效，此氣脫也。用益智子仁二兩，濃煎飲之，立愈。[2]”現(xiàn)代中醫(yī)臨床對(duì)于中焦虛寒或脾腎虛寒的泄瀉，也多重用益智。筆者采用小鼠在體胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)離體試驗(yàn)，觀察益智仁醇提取物對(duì)動(dòng)物胃腸運(yùn)動(dòng)的影響，以期探討其止瀉功效的作用機(jī)制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AS-HJ-Ⅱ型恒溫平滑肌槽（成都遨生電子有限公司）；JH-2型肌張力傳感器（北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所）；BL-420E型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）。

1.2 試藥

益智仁購(gòu)于海南省醫(yī)藥總公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為真品；硫酸阿托品片（廣東邦民制藥廠有限公司，批號(hào)：060204）；氯化乙酰膽堿（上海三愛思試劑有限公司，批號(hào)：20061130）。

1.3 動(dòng)物

普通級(jí)新西蘭家兔8只，♀♂兼用，體質(zhì)量（2.0±0.5）kg；普通級(jí)昆明種小鼠50只，♂，體質(zhì)量（20±2）g，均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2004-11）。

2 方法與結(jié)果

2.1 益智仁醇提取物制備方法

取益智仁100 g，粉碎，過(guò)1號(hào)篩，置2 000 mL圓底燒瓶中，加乙醇600 mL回流提取2次，每次1 h，紗布濾過(guò)，合并2次濾液，60℃以下減壓回收溶劑，浸膏加吐溫-80 5 mL，在研缽中充分研磨混勻，加蒸餾水配成100 mL，使充分乳化，即得。

2.2 益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響

取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白（5%的吐溫-80）、硫酸阿托品（0.3 mg·kg-1）和益智仁醇提取物高、中、低劑量（20、10、5 g·kg-1）組。ig給藥，給藥1 h后每只小鼠ig營(yíng)養(yǎng)性半固體糊（參照文獻(xiàn)[3]配制）0.8 mL。30 min后脫頸椎處死小鼠，開腹，結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙擦干后稱胃全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱胃凈重，以胃全重和胃凈重之差為胃內(nèi)殘留物質(zhì)量，計(jì)算胃內(nèi)殘留物占所灌半固體糊的質(zhì)量百分比為胃內(nèi)殘留率。同時(shí)迅速取出小腸，輕輕剝離后直鋪于白紙上，測(cè)量幽門至回盲腸部全長(zhǎng)及幽門至黑色半固體糊前沿的距離，以幽門至黑色半固體糊前沿的距離占幽門至回盲部全長(zhǎng)的百分率為小腸推進(jìn)率。結(jié)果，高、中、低劑量益智仁醇提取物均對(duì)正常小鼠的胃排空有顯著性的抑制作用（P＜0.01），高劑量益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠的小腸推進(jìn)有顯著性抑制作用（P＜0.05），且其作用有隨劑量遞增而增大的趨勢(shì)。益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響見表1。

2.3 益智仁醇提取物對(duì)正常家兔離體腸肌收縮的影響

表1 益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of EEAO on the evacuation of stomach and intestinal propulsive movement in mic（e±s，n＝10）

表1 益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of EEAO on the evacuation of stomach and intestinal propulsive movement in mic（e±s，n＝10）

與空白組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

劑量/g·kg-1組別空白組益智仁醇提物低劑量組益智仁醇提物中劑量組益智仁醇提物高劑量組硫酸阿托品組-51 0小腸推進(jìn)率/%49.55±11.75 49.20±19.66 46.76±12.03 38.75±9.05＊33.66±16.64＊20 0.000 3胃內(nèi)殘留率/%25.38±13.95 48.74±19.95＊＊55.97±12.05＊＊74.55±14.20＊＊53.06±10.81＊＊

實(shí)驗(yàn)分為5組，即正常（克氏液）、空白（5%的吐溫-80）和益智仁醇提取物高、中、低濃度（0.003、0.002、0.001 g·mL-1）組。猛擊家兔頭部致昏，快速取出十二指腸，用克氏液漂洗干凈，置于盛有低溫克氏液的培養(yǎng)皿中。剪取2 cm腸段，置于盛有50 mL、（37±0.5）℃克氏液的平滑肌槽中，持續(xù)通以氧氣。腸段的一端固定在肌槽底部的不銹鋼彎鉤上；另一端與肌張力傳感器連接，后者接生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄腸段的等長(zhǎng)收縮活動(dòng)。腸段負(fù)荷1 g張力，溫育30 min，待腸段自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)，記錄2 min正常收縮曲線。分別累積給予各種藥液，每次加藥體積為50 μL，記錄給藥后2 min收縮曲線，以給藥前后腸肌收縮的平均張力計(jì)算抑制率。抑制率（%）＝（給藥前平均張力－給藥后平均張力）/給藥前平均張力×100%。結(jié)果，高、中、低濃度益智仁醇提取物對(duì)正常家兔離體腸肌的收縮運(yùn)動(dòng)有顯著抑制作用（P＜0.01），表現(xiàn)為使腸肌舒張，平均張力下降。益智仁醇提物對(duì)正常家兔離體腸肌活動(dòng)的影響見圖1、表2（表中正常組數(shù)值無(wú)意義故略去）。

圖1 益智仁醇提取物對(duì)正常家兔離體腸肌活動(dòng)的影響Fig 1 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbit

表2 益智仁醇提取物對(duì)正常家兔離體腸肌活動(dòng)的影響（±s，n＝4）Tab 2 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbi（t±s，n＝4）

表2 益智仁醇提取物對(duì)正常家兔離體腸肌活動(dòng)的影響（±s，n＝4）Tab 2 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbi（t±s，n＝4）

與空白組比較：＊P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.01

組別空白組益智仁醇提物低濃度組益智仁醇提物中濃度組益智仁醇提物高濃度組浴槽內(nèi)終濃度/g·ml-1-0.001 0.002 0.003抑制率/%0.22±0.79 18.32±6.41＊39.65±7.65＊51.11±8.55＊

2.4 益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿興奮家兔離體腸肌活動(dòng)的影響

分組及給藥、腸肌制取同“2.3”項(xiàng)下方法操作，待腸段自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后，在浴槽中加入1.0×10-5mol·L-1（浴槽內(nèi)終濃度）的氯化乙酰膽堿，使腸肌出現(xiàn)持續(xù)性收縮，處于痙攣狀態(tài)，記錄2 min收縮曲線，再分別累積給予各種藥液，操作同前，以給藥前、后腸肌收縮的平均張力計(jì)算抑制率。抑制率（%）＝（給氯化乙酰膽堿后平均張力－給藥后平均張力）/給氯化乙酰膽堿后平均張力×100%。結(jié)果，高、中、低濃度益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿引起的腸肌痙攣有顯著性的拮抗作用（P＜0.01）。益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿興奮家兔離體腸肌活動(dòng)的影響見圖2、表3（表中正常組數(shù)值無(wú)意義，故略去）。

圖2 益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿興奮家兔離體腸肌活動(dòng)的影響Fig 2 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbit due to acetylcholine chloride

表3 益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿興奮家兔離體腸肌活動(dòng)的影響（±s，n＝4）Tab 3 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbit due to acetylcholine chlorid（e±s，n＝4）

表3 益智仁醇提取物對(duì)氯化乙酰膽堿興奮家兔離體腸肌活動(dòng)的影響（±s，n＝4）Tab 3 Effects of EEAO on the activity of isolated jejunum in rabbit due to acetylcholine chlorid（e±s，n＝4）

與空白組比較：＊P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.01

組別空白組益智仁醇提物低濃度組益智仁醇提物中濃度組益智仁醇提物高濃度組浴槽內(nèi)終濃度/g·ml-1-0.001 0.002 0.003抑制率/%2.70±1.06 33.25±3.54＊55.91±1.30＊68.49±4.05＊

3 討論

胃腸運(yùn)動(dòng)功能是受體液調(diào)節(jié)和神經(jīng)調(diào)節(jié)的復(fù)雜生理過(guò)程[4]，目前研究胃腸運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)方法可分為在體實(shí)驗(yàn)和離體實(shí)驗(yàn)。離體實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，易于操作，有助于揭示藥物的作用機(jī)制，但在體實(shí)驗(yàn)更能體現(xiàn)藥物的綜合作用并預(yù)測(cè)其臨床療效，整體動(dòng)物的胃排空和腸推進(jìn)更能直觀地體現(xiàn)動(dòng)物胃腸肌運(yùn)動(dòng)狀況。

本研究結(jié)果表明，益智仁醇提取物對(duì)正常小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)有明顯的抑制作用，對(duì)家兔離體腸肌收縮有明顯的抑制作用，對(duì)氯化乙酰膽堿引起的腸肌興奮有明顯的拮抗作用。提示益智仁醇提取物對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有抑制作用，這一作用可能是益智仁溫脾止瀉、治療脾寒泄瀉的藥理學(xué)基礎(chǔ)之一。其作用途徑除與M膽堿受體有關(guān)之外，是否還與影響胃腸運(yùn)動(dòng)功能的其他神經(jīng)、體液因素相關(guān)，有待進(jìn)一步深入研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：204.

[2]李時(shí)珍.本草綱目（校點(diǎn)本第二冊(cè)）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1977：870.

[3]邢建峰，封衛(wèi)毅，侯家玉.小鼠胃排空及小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法的探討[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26（4）：50.

[4]李文勝，彭定國(guó)，屈萬(wàn)紅，等.耳葉牛皮消對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)藥房，2007，18（33）：2 575.

Effects of the Ethanol Extracts ofAlpinia oxyphyllaon Animal Gastrointestinal Activity

LI Xing-hua，HU Chang-jiang，LI Wen-bing，HUANG Qin-wan，XIE Xiu-qiong（Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China）

OBJECTIVE：To study the effect of ethanol extracts ofAlpinia oxyphylla（EEAO）on animal gastrointestinal activity.METHODS：Effects of EEAO on the evacuation of stomach，the propulsive movement of intestine and the extraction of isolated rabbit jejunum were observed by mice gastrointestinal activity test and isolated rabbit jejunum movement experiment.RESULTS：5 g·kg-1，10 g·kg-1，20 g·kg-1dose of EEAO could distinctly inhibited the evacuation of stomach in mice.EEAO could also inhibit the extraction of isolated rabbit jejunum.EEAO showed significant antagonistic effect on depression of EEAO on spasmodic muscle of duodenum due to acetylcholine chloride.CONCLUSION：EEAO could inhibit animal gastrointestinal activity，the mechanism of which may be associated with M-receptor.

Ethanol extracts ofAlpinia oxyphylla；Evacuation of stomach；Propulsive movement of intestine；Isolated jejunum

R285；R97

A

1001-0408（2010）39-3649-02

2009-11-27

2010-04-24）