菟絲子提取物對自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

蘭 鴻，杜士明（鄖陽醫學院附屬太和醫院，十堰市 442000）

菟絲子提取物對自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

蘭 鴻＊，杜士明（鄖陽醫學院附屬太和醫院，十堰市 442000）

目的：研究菟絲子提取物對自然衰老小鼠的抗衰老作用。方法：給自然衰老小鼠灌胃菟絲子提取物，先用Y-型電迷宮檢測小鼠的學習記憶能力，后應用生化方法檢測老年小鼠腦組織內超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活力和丙二醛（MDA）含量。結果：小鼠行為實驗結果表明，菟絲子提取物能使小鼠Y-型電迷宮測試正確次數顯著降低，但對記憶的保持力影響不大。小鼠腦組織抗氧化酶的活力實驗結果表明，菟絲子提取物能提高小鼠腦組織SOD、GSH-PX活力，降低MDA的含量。結論：菟絲子提取物抗衰老作用可能通過提高腦組織抗氧化酶SOD、GSH-PX活力，降低脂質過氧化物MDA含量而實現。

菟絲子提取物；抗衰老作用；機制

菟絲子為旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensisLam.的干燥成熟種子，具有滋補肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉的功效。王昭等[1]發現菟絲子能明顯增強衰老模型小鼠的紅細胞免疫功能，具有延緩衰老作用。筆者給自然衰老小鼠灌胃菟絲子提取物，先用Y-型電迷宮檢測小鼠的學習記憶能力，后應用生化方法檢測老年小鼠腦組織內超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活力和丙二醛（MDA）含量，以進一步探討菟絲子抗衰老的機制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

手術器械（大連醫療器械有限公司）；UP200H型超聲破碎儀、V-560型紫外分光光度儀（日本Jasco公司）；Y-型電迷宮（中國科學院上海生命科學研究院植物生理生態研究所）；TGL16G型臺式高速離心機（上海醫用分析儀器廠）；組織研磨器（北京惠澤奧科貿有限公司）。

1.2 試藥

組織蛋白、SOD、GSH-PX、MDA檢測試劑盒（南京建成生物工程公司）；菟絲子、人參購自十堰市醫藥公司，均由鄖陽醫學院陳吉炎教授鑒定為真品；維生素E（海南養生堂保健品有限公司，批號：2009012311）。

1.3 動物

昆明種SPF級老年小鼠，♀♂兼半，體質量（40.5±3）g，由鄖陽醫學院實驗動物中心提供（動物生產合格證號：2008A005）。

2 方法

2.1 實驗用藥的制備

2.1.1 菟絲子提取物的制備：菟絲子藥材500 g，加4 000 mL水浸泡2 h，至微脹，文火煎2次，每次煎煮0.5 h，過濾。合并2次提取液，濃縮至生藥濃度為0.4 g·mL-1，置4℃冰箱貯藏，備用。

2.1.2 人參提取物的制備：取藥材500 g，加4 000 mL水浸泡2 h，至微脹，文火煎2次，每次煎煮1 h，過濾。合并2次提取液，濃縮至生藥濃度為0.4 g·mL-1，置4℃冰箱貯藏，備用。

2.1.3 維生素E混懸液的制備：取維生素E膠囊400 mg，以吐溫-80乳化配制成濃度為1.25 mg·mL-1的混懸液，備用。

2.2 分組及給藥

實驗分為6組，即模型（等容生理鹽水）、人參提取物（4 000 mg·kg-1）、維生素 E（12.5 mg·kg-1）和菟絲子高、中、低劑量（300、200、100 mg·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續30 d。

2.3 Y-型電迷宮行為實驗

2.3.1 動物篩選：將小白鼠放入Y-型電迷宮箱中適應3～5 min后，給予適當電擊，至小白鼠有3足均探索進入電迷宮箱為止，選擇活躍、對電擊反應較敏感、逃避反應迅速者供測試用。淘汰反應過于遲鈍或特別敏感的小鼠。預選出達到連續2次且≤3次對電擊正確反應，對電擊反應較敏感的小白鼠供實驗用[2，3]。在上述初步篩選的基礎上，通過正式迷宮訓練，淘汰達不到學會標準（學不會）的小鼠[4]。

2.3.2 學習測試（隨機休息法[5]）：安全區以無規則次序變換，以訓練小鼠辨別燈光刺激及安全方位的能力。小鼠受電擊后逃到安全區后，燈光繼續作用10～15 s，熄燈后結束1次測試，小鼠所在肢臂就作為下一次測試的起點，2次測試時間間隔為30 s或休息1 min后再予以第2次測試，依次重復，測試至達連續9/10標準。

2.3.3 記憶保持（再現）測試：學習測試1周后，再以同樣方法測試，正確反應次數定為A，以A/10表示記憶保持的能力，此值越高說明記憶力越好[3]。

2.3.4 測試指標和相關標準：（1）達標所需的訓練次數（電擊次數、反應次數、測試次數）：用動物學習達到學會標準前所需的測試數，表示其空間分辯反應的學習記憶成績。所需次數越少，說明學習速度越快或學習能力越強；所需次數增多，提示學習記憶能力下降。（2）正誤判定的標準：以小鼠在足底通電后10 s內一次性跑向安全區為正確反應，否則為錯誤反應[5]。（3）達標（學會）標準：以連續10次中有9次或以上正確反應（正確反應率90%）定為學會標準。

2.4 腦組織處理及指標測定

行為實驗結束24 h后，應用乙醚將動物深度麻醉，用100 mL冰冷的生理鹽水經心臟做顱內灌注，在冰袋上小心快速剝離腦組織，并放入0.9%冰冷生理鹽水中洗凈表面血液。稱重后，應用冰冷的生理鹽水制備成10%組織勻漿，貯藏于－70℃冰箱內以備生化分析。檢測當日，組織勻漿低速、低溫離心（4 000 r·min-1，4℃）10 min，取上清測定組織蛋白、SOD、GSH-PX活力及MDA含量。

2.5 統計學方法

3 結果

3.1 菟絲子對模型小鼠行為學的影響

菟絲子中劑量組小鼠Y-型電迷宮測試學會次數顯著低于模型組（P＜0.05），但對記憶的保持力影響不大。菟絲子提取物對小鼠被動躲避學習記憶的影響見表1。

表1 菟絲子提取物對小鼠被動躲避學習記憶的影響Tab 1 Effect of the extracts of C.chinensis on the memory retention

3.2 菟絲子對模型小鼠腦組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量的影響

模型組小鼠腦組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量分別為（127.82±24.83）、（104.87±20.58）IU·mg-1，（19.02±0.62）nmol·mg-1；菟絲子中劑量組小鼠GSH-PX活力提高至（209.12±24.17）IU·mg-1，SOD活力提高至（199.25±23.73）IU·mg-1，同時MDA含量降低至（10.15±1.73）IU·mg-1。菟絲子提取物對模型小鼠腦組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量的影響見圖1。

圖1 菟絲子提取物對模型小鼠腦組織SOD、GSH-PX活力及MDA含量的影響A.SOD；B.GSH-PX；C.MDA；1.模型組；2.菟絲子低劑量組；3.菟絲子中劑量組；4.菟絲子高劑量組；5.人參提取物組；6.維生素E組Fig 1 Effects of the extracts of C.chinensis on the activity of SOD and GSH-PX and the content of MDAA.SOD；B.GSH-PX；C.MDA；1.model group；2.C.chinesis low dose group；3.C.chinesis media dose group；4.C.chinesis high dose group；5.extracs of Panax ginseng group；6.VE group

4 討論

衰老是由許多因素綜合作用引起的復雜的過程，老年動物學習記憶能力明顯不如青年動物[6]。在眾多有關衰老發生發展的學說中，“自由基學說”是目前贊同者較多的一種理論，氧化應激和活性氧自由基被認為是引起衰老和導致一些神經退行性疾病如阿爾茨海默?。ˋD）、帕金森疾?。≒D）的主要原因[7]?；钚匝踝杂苫求w內代謝的產物，機體可通過自身的酶系統或非酶系統，將體內不斷生成的自由基清除，以維持一種動態平衡。過多自由基的生成可直接破壞生物大分子如蛋白質、脂質、核酸等，導致細胞壞死；也可間接影響細胞的信號轉導和基因調控，誘導細胞凋亡。由于腦組織富含大量不飽和脂肪酸及自身抗氧化能力較低，使其更易受到自由基的攻擊，產生損傷，因此清除過多的自由基對于腦組織的保護意義尤為重大。

本研究選用自然衰老的小鼠作為衰老動物模型，神經系統損害屬自然發生。目前普遍認為該衰老模型在神經生理、結構、行為上更接近人，是適于研究的對象。此模型多用于中藥治療AD的篩選和療效評價以及研究AD的病理生理學特征等方面。

氧化應激是許多神經退行性疾?。ㄈ鏏D、PD等）的致病因素之一。當氧化產物超過內源性抗氧化物時，就會導致細胞組織發生氧化損傷。SOD、GSH-PX是體內清除自由基最為重要的酶系，MDA含量的高低能間接反映機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度，近年來被廣泛用作氧化應激程度的標示物。老年小鼠的學習、記憶功能明顯下降，其腦組織中內源性抗氧化酶SOD和GSH-PX活性顯著下降，體內自由基清除減少，產生增多，造成自由基聚集，進而導致腦損傷，使MDA含量增高。筆者對小鼠腦組織內抗氧化物的研究結果表明，菟絲子可以顯著提高腦組織內SOD、GSH-PX活力，同時降低脂質過氧化水平，說明其對小鼠學習能力的提高是通過改善腦組織中內源性抗氧化體系活力、提高自身的抗氧化能力而實現的。

筆者在體外細胞實驗的基礎上，進一步在老年小鼠體內，通過動物行為變化指標、腦組織內氧化酶活性及脂質過氧化程度的觀測，確定菟絲子在生物體內的作用，可為菟絲子基礎研究和藥物開發提供依據。

[1]王 昭，樸金花，張鳳梅，等.菟絲子對D2半乳糖所致衰老模型小鼠紅細胞免疫功能的影響[J].黑龍江醫藥科學，2003，26（6）：16.

[2]周佳麗，徐曉玉.中藥防治腦缺血再灌注損傷的研究進展[J].中國藥房，2007，18（18）：1 419.

[3]李勝休，舒斯云，包新民，等.海仁藻酸損傷邊緣區后對大鼠學習和記憶功能影響的研究[J].神經解剖學雜志，1996，12（3）：37.

[4]裴 媛，林庶茹，李德新.腦老化的中醫藥實驗研究進展[J].中國老年學雜志，2005，6：740.

[5]Andersen MB，Sams DF.Transient cerebral ischemia inhibits juvenile recognition in the mongolian gerbil[J].Pharmacol Biochem Behav，1997，56：19.

[6]Chan PH.Reactive oxygen radicals in signaling and damage in the ischemic brain[J].Cereb Blood Flow Metab，2001，21：2.

[7]Sugawara T，Chan PH.Reactive oxygen radicals and pathogenesis of neuronal death after cerebral ischemia[J].Antioxid Redox Signal，2003，5：597.

Study on theAnti-agingAction of the Extracts ofCuscuta chinensisin NaturalAging Mice

LAN Hong，DU Shi-ming（Taihe Hospital of Yunyang Medical College，Shiyan 442000，China）

OBJECTIVE：To observe the Anti-aging activity of the extracts ofCuscuta chinensisin natural aging mice.METHODS：Natural aging mice were given the extracts ofC.chinensisvia i.g.gtt.Y-type electric maze was used to determine their abilities of learning and memory，then biochemical method was adopted to detect the activity of superoxide dismutase（SOD）and glutathione peroxidase（GSH-PX），and the content of malondialdehyde（MDA）in cerebral tissues of aging mice.RESULTS：The test behavior of mice expressed thatC.chinensiscould significantly lower the correct percentage in Y-type electric maze test，but had little effect on the memory retention.The antioxidase activity experiment of cerebral tissues of mice expressed thatC.chinensiscould improve the activity of SOD and GSH-PX in mice cerebral tissue，and lower the contents of MDA.CONCLUSION：The anti-aging activity of the extracts ofC.chinensisis achieved by improving the activity of SOD and GSH-PX，and lowering the contents of MDA.

Extracts ofCuscuta chinensis；Anti-aging activity；Mechanism

R285；R976

A

1001-0408（2010）39-3667-03

＊主管藥師。研究方向：醫院藥學。E-mail：Lh76117611@163.com

2009-11-25

2010-03-29）