補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響

劉亮鋒，賴平，唐立海，劉丹丹，蔡大可，葉木榮（廣州中醫藥大學中藥學院藥理學教研室，廣州市 510006）

補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響

劉亮鋒＊，賴平，唐立海，劉丹丹，蔡大可，葉木榮#（廣州中醫藥大學中藥學院藥理學教研室，廣州市 510006）

目的：研究補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響。方法：取11月齡雌性SD大鼠，正常飼養至11.5月齡時開始給藥，連續給藥4個月。觀察補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響。結果：補陽壯骨方可一定程度上防止自然衰老引起的骨密度下降；能改善自然衰老引起的骨小梁結構退化。結論：補陽壯骨方對自然衰老導致的雌性大鼠骨密度及骨小梁退變有一定的預防作用。

補陽壯骨方；骨密度；骨小梁；自然衰老

＊碩士研究生。研究方向：中藥藥理與毒理學。電話：020-39358084。E-mail：liongphone@163.com

#通訊作者：教授。研究方向：中藥藥理與毒理學。電話：020-39358084。E-mail：pharm3@gzhtcm.edu.cn

補陽壯骨方主要由淫羊藿、黃芪、補骨脂等中藥組成，臨床主要用于預防及治療腎陽虛引起的骨質疏松。在傳統中醫學的認識中，骨與腎的關系十分密切，腎藏精，生髓主骨。《素問·宣明五氣篇》曰：“腎主骨”。腎的這一功能通過腎陽來實現，《素問·生氣通天論》曰：“因而強大，腎氣乃傷，高骨乃壞”，論及了先傷及腎，而后影響到骨，腎陽虛導致的骨質疏松其治療當以補腎溫陽為主。而腎藏精，精化為氣，人體的生理功能主要是腎氣的促進作用，所以腎陽虛中佐以補氣治療，使陽升氣行，以達到更好的補腎陽的療效。本方中淫羊藿與補骨脂為補陽藥，黃芪為補氣藥；淫羊藿辛甘溫功，擅溫腎壯陽，強筋骨；補骨脂辛苦溫功，擅補火壯陽，兼具收澀之性，兩者相輔相成，以培補腎中元陽；黃芪甘微溫，補氣升陽，三藥相合，補腎陽之虛，助氣化之復。本研究針對補陽壯骨方的功能主治，研究其對雌性自然衰老大鼠骨密度（BMD）及骨小梁的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Lunar Prodigy骨密度測量儀（美國GE公司）；KM2255型全自動石蠟切片機、TP1020型全自動生物組織脫水機、EG1140型石蠟包埋機、5010型全自動染色機（德國徠卡公司）；BX50型生物顯微鏡（日本Olympus公司）；200型漂烘片機（深圳市雅博電子有限公司）；MIAS型醫學圖像分析管理系統（北京航天航空大學）。

1.2 試藥

補陽壯骨方提取物（廣州中醫藥大學新藥開發研究中心，批號：20071201），每1 g約相當于原生藥3.9 g；右歸丸（河南省宛西制藥股份有限公司，批號：071004）。

1.3 動物

SPF級11月齡自然衰老SD大鼠60只，♀，體質量300 g，由廣東省實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK（粵）2003-0001）。

2 方法

2.1 分組及給藥

實驗分為5組，即模型（等容生理鹽水）、右歸丸（4.5 g·kg-1）和補陽壯骨方高、中、低劑量（2.2、1.1、0.55 g（生藥）·kg-1，分別相當于成人臨床用量的20、10、5倍）組。ig給藥，每天1次，連續給藥4個月，末次給藥后動物禁食12 h。

2.2 指標的檢測

BMD測定：麻醉后采用雙能X射線法（DEXA法）測定大鼠全身BMD、腰椎BMD、雙側股骨頸BMD以及雙側股骨BMD。

骨小梁面積、骨小梁面積率的測定及骨小梁計數：取2～4腰椎，10%甲醛固定，常規石蠟包埋切片，HE染色，用圖像分析軟件測定骨小梁面積及骨小梁面積率；每片隨機觀察椎體3個視野，計算視野內骨小梁個數，取平均值。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠BMD的影響

右歸丸組大鼠全身、腰椎、雙側股骨及左股骨頸BMD均高于模型組，說明雌性自然衰老大鼠全身、腰椎、雙側股骨頸及雙側股骨都出現了不同程度的骨量丟失；補陽壯骨方高、中劑量組大鼠全身、腰椎、雙側股骨頸及雙側股骨BMD均高于模型組；補陽壯骨方低劑量組全身、腰椎、雙側股骨及左股骨頸BMD均高于模型組，右股骨頸BMD低于模型組，但無顯著差異。結果表明，補陽壯骨方在一定程度上可緩解雌性自然衰老大鼠各部位BMD下降。補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠BMD的影響見表1。

表1 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠BMD的影響（±s，g·cm-2）Tab 1Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone density of female natural aging rat（±s，g·cm-2）

表1 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠BMD的影響（±s，g·cm-2）Tab 1Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone density of female natural aging rat（±s，g·cm-2）

與模型組比較：＊P＜0.05vs.model group：＊P＜0.05

組別模型組右歸丸組補陽壯骨方高劑量組補陽壯骨方中劑量組補陽壯骨方低劑量組右股骨0.202±0.014 0.216±0.011＊0.213±0.017 0.219±0.033 0.210±0.009 n88888全身0.173±0.014 0.187±0.007＊0.183±0.011 0.186±0.010 0.181±0.007腰椎0.202±0.026 0.212±0.019 0.216±0.026 0.214±0.016 0.221±0.017左股骨頸0.222±0.013 0.227±0.013 0.228±0.012 0.228±0.021 0.222±0.022右股骨頸0.226±0.019 0.222±0.015 0.228±0.016 0.227±0.020 0.222±0.019左股骨0.205±0.017 0.217±0.015 0.209±0.015 0.211±0.020 0.207±0.010

3.2 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響

各給藥組骨小梁面積率均高于衰老模型組，其中右歸丸組和補陽壯骨方高、中劑量組有顯著差異（P＜0.01或P＜0.05）。結果表明，補陽壯骨方可緩解自然衰老引起的骨小梁結構退化。補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響見表2。

表2 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響（±s）Tab 2 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula area of female natural aging rat（±s）

表2 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響（±s）Tab 2 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula area of female natural aging rat（±s）

與模型組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs.model group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型組右歸丸組補陽壯骨方高劑量組補陽壯骨方中劑量組補陽壯骨方低劑量組n 5 5 5 5 5骨小梁面積/μm 130 811.8±23 206.2 244 159.6±19 986.9＊＊238 970.6±55 800.4＊＊186 114.0±31 058.0＊164 330.6±47 739.3骨小梁面積率/%0.302±0.054 0.564±0.047＊＊0.551±0.128＊＊0.429±0.071＊0.379±0.110

3.3 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁計數的影響

各給藥組骨小梁數量均高于模型組，其中右歸丸組和補陽壯骨方高、中劑量組有顯著差異（P＜0.05）。結果表明，補陽壯骨方可改善自然衰老導致的骨小梁結構退化。補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁計數計的影響見表3。

表3 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁計數的影響（±s）Tab 3 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula quantity of female natural aging rat（±s）

表3 補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠骨小梁計數的影響（±s）Tab 3 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula quantity of female natural aging rat（±s）

與模型組比較：＊P＜0.05vs.model group：＊P＜0.05

n組別模型組右歸丸組補陽壯骨方高劑量組補陽壯骨方中劑量組補陽壯骨方低劑量組10 10 10 10 10骨小梁個數17.0±4.2 20.8±3.0＊22.3±6.4＊20.9±4.1＊18.6±3.5

3.4 骨小梁病理切片

自然衰老大鼠椎骨骨小梁明顯變細變薄，右歸丸組和補陽壯骨方高、中、低劑量組椎骨骨小梁明顯厚于模型組。骨小梁病理切片見圖1。

4 討論

骨質疏松癥是以低骨量及骨組織微結構退變為特征的一種全身性骨骼疾病，常見于50歲以上的老年人，且女性由于峰骨量較低及絕經后的雌激素水平降低，發病率是男性的3倍。中醫對骨質疏松辨證多以補腎為主，分陰陽為綱。臨床上常見證型主要分為腎陽虛、腎陰虛2種，治療上以溫補腎陽、滋補肝腎、填精生髓、強壯筋骨為主[1]。根據上述特點，本研究選取雌性自然衰老大鼠作為實驗對象，研究了補陽壯骨方對雌性自然衰老大鼠BMD及骨小梁的影響。結果表明，補陽壯骨方可在一定程度上緩解雌性衰老大鼠的BMD下降以及骨小梁的退變。提示補陽壯骨方對防治老年骨質疏松有一定作用。

圖1 骨小梁病理切片A.衰老模型組；B.右歸丸組；C.補陽壯骨方高劑量組；D.補陽壯骨方中劑量組；E.補陽壯骨方低劑量組Fig 1 Pathological section of bone trabeculaA.aging model group；B.Youguiwan group；C.Buyang zhuanggu prescription high-dose group；D.Buyang zhuanggu prescription medium-dose group；E.Buyang zhuanggu prescription low-dose group

現代醫學研究發現，補陽壯骨方中的主要成分淫羊藿、黃芪可防治因腎上腺皮質激素所致的腎陽虛等不良反應。李青南等[2]進行了淫羊藿提取液對糖皮質激素所致骨質疏松大鼠的骨形態計量學分析，發現淫羊藿提取液能抑制骨吸收，促進骨形成。謝華等[3]發現黃芪水提液可促進骨形成、抑制骨吸收，有效防治激素繼發性骨質疏松。補陽壯骨方防止雌性自然衰老大鼠BMD降低及緩解骨小梁退變的機制可能通過調節下丘腦-垂體-性腺軸功能，促進性激素作用（本課題相關論文待發表），同時調節體內鈣平衡來實現。為進一步闡明其機制，可研究補陽壯骨方對破骨細胞、成骨細胞的影響，目前實驗正在進行。

[1]侯 勵，張榮華，楊 麗，等.益骨膠囊對骨質疏松模型大鼠骨形態學及血清TNF-α水平的影響[J].中國藥房，2005，16（8）：577.

[2]李青南，廖進民，吳 鐵，等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨質疏松的實驗研究[J].中國藥學雜志，1996，31（8）：467.

[3]謝 華，吳 鐵，黃連芳，等.黃芪水提液對大鼠的類固醇性骨質疏松的防治作用[J].中草藥，1997，28（1）：25.

Effect of Buyang Zhuanggu Prescription on Bone Density and Bone Trabecula of Female NaturalAging Rats

LIU Liang-feng，LAI Ping，TANG Li-hai，LIU Dan-dan，CAI Da-ke，YE Mu-rong（Dept.of Pharmacology，School of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

OBJECTIVE：To study the effect of Buyang zhuanggu prescription on the bone density and bone trabecula of female natural aging rats.METHODS：11-month-old female SD rats

normal feeding till 11.5 months old.SD rats were given medicine for 4 months.The effects of Buyang zhuanggu prescription on bone density and bone trabecula of female natrual aging rats were observed.RESULTS：Buyang zhuanggu prescription can prevent the reduction of bone density and the degeneration of bone trabecula structure caused by natural aging at a certain extent.CONCLUSION：Buyang zhuanggu prescription can prevent the reduction of bone density and the degeneration of bone trabecula of female natrual aging rats at a certain extent.

Buyang zhuanggu prescription；Bone density；Bone trabecula；Natural aging

R285；R97

A

1001-0408（2010）39-3671-03

2009-12-05

2010-03-29）