不同產地醋莪術飲片中β-欖香烯的含量比較Δ

姜國非，毛春芹，陸兔林，徐佳佳（南京中醫藥大學藥學院，南京市 210046）

不同產地醋莪術飲片中β-欖香烯的含量比較Δ

姜國非＊，毛春芹#，陸兔林，徐佳佳（南京中醫藥大學藥學院，南京市 210046）

目的：建立以氣相色譜法測定不同產地醋莪術飲片中β-欖香烯含量的方法。方法：以水楊酸甲酯為內標物，采用HP-5彈性石英毛細管色譜柱，程序升溫，氫火焰離子化檢測器，氣化室溫度為240℃，檢測室溫度為250℃，不分流進樣，進樣量為1 μL。結果：β-欖香烯進樣量在0.015 07～0.150 70 μg范圍內同其與水楊酸甲酯峰面積的比值呈良好線性關系（r＝0.999 6）；平均回收率為96.13%，RSD＝1.37%（n＝9）。溫郁金中的β-欖香烯含量相對較高。結論：本方法可作為不同產地醋莪術飲片中β-欖香烯的含量測定方法。

醋莪術飲片；β-欖香烯；氣相色譜法；含量測定

莪術是姜科姜黃屬植物蓬莪術Curcuma phaeocaulisVal、廣西莪術C.kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang和溫郁金C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根莖，為常用傳統中藥，主產于廣西、四川、浙江等地。現代研究顯示，莪術中含有兩大類成分，即姜黃素類和揮發油（1%～2.5%）成分[1]。姜黃素類物質有抗炎、抗腫瘤、降血脂、抗氧化等作用[2，3]。揮發油中的主要成分為莪術醇、β-欖香烯（β-elemene）、蓬莪術酮、姜黃醇酮等[4]。β-欖香烯作為一種新型非細胞毒性抗癌藥已被廣泛應用于臨床，近年來研究發現β-欖香烯對腫瘤細胞起直接殺傷作用，且具有放化療協同作用[5]。醋莪術飲片因產地的不同，β-欖香烯的含量也存在明顯差異。筆者利用氣相色譜（GC）法對醋莪術飲片中β-欖香烯的含量進行測定，旨在為制定醋莪術飲片的質量標準提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HP4890D型GC儀（美國安捷倫公司）；WDL-95型工作站（中國科學院大連化學物理研究所）；GH-500B型氫氣發生器、GA2000A型低噪音空氣泵（北京中興匯利科技發展有限公司）。

1.2 試藥

β-欖香烯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100268-200401）；水楊酸甲酯（內標物，化學純，純度≥98.0%，上海凌峰化學試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。樣品藥材購自莪術主產地（四川、廣西、浙江，見表1），經南京中醫藥大學藥學院巢建國教授鑒定為姜科植物蓬莪術C.phaeocaulisVal、廣西莪術C.kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang及溫郁金C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根莖，分別取凈莪術片按醋炙法生產標準操作規程制得各產地相應的醋莪術飲片。

表1 樣品來源及批次Tab 1 Sources and batches of sample

2 方法與結果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：HP-5彈性石英毛細管柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）；程序升溫：初始溫度105℃，以每分鐘5℃的速率升溫至145℃，保持7 min，再以每分鐘10℃的速率升溫至240℃，保持4 min；進樣口溫度：240℃；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250℃；不分流進樣。在此色譜條件下，各對照品均達到完全分離。理論板數按β-欖香烯峰計算應不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取β-欖香烯對照品適量，加丙酮溶解并稀釋成1.507 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 內標溶液 精密稱取水楊酸甲酯適量，加丙酮制成1.515 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液 取批號為080716的醋莪術飲片碾碎成粉末，過4號篩，稱取粉末約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚50 mL，加熱回流提取至無色，提取液置于通風櫥中揮干溶劑，殘渣加丙酮溶解并轉移至10 mL量瓶中，精密加入內標溶液0.5 mL，用丙酮定容，搖勻，即得。

2.2.4 混標溶液 精密吸取1.507 mg·mL-1的對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，置于10 mL容量瓶中，再精密吸取1.515 mg·mL-1的內標溶液0.5 mL至上述各容量瓶中，加丙酮定容，搖勻，使β-欖香烯濃度分別為0.015 07、0.030 14、0.060 28、0.090 42、0.120 56、0.150 70 mg·mL-1，水楊酸甲酯濃度均為0.075 75 mg·mL-1。

2.3 校正因子的測定

分別吸取對照品溶液和內標溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加丙酮定容，搖勻，取1 μL注入GC儀，計算，得校正因子為0.453 3（n＝5）。

2.4 專屬性試驗

分別取空白溶劑、內標溶液、內標加對照品的混合溶液及內標加供試品的混合溶液，注入GC儀中，按上述色譜條件測定，結果表明在對照品峰處無干擾。色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.空白溶劑；B.內標；C.對照品+內標；D.供試品+內標；1.水楊酸甲酯；2.β-欖香烯Fig 1 GC chromatogramsA.blank solvent；B.internal standard；C.reference substance+internal standard；D.test sample+internal standard；1.methyl salicylate；2.β-elemene

2.5 線性關系考察

分別精密吸取混標溶液1 μL，按上述色譜條件進樣，重復2次，測定峰面積。以β-欖香烯進樣量（X）為橫坐標，β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值（Y）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝29.275X+0.050 2（r＝0.999 6）。結果表明，β-欖香烯進樣量在0.015 07～0.150 70 μg范圍內同其與水楊酸甲酯的峰面積比值呈良好線性關系。

2.6 精密度試驗

取濃度為0.060 28 mg·mL-1的混標溶液，按上述色譜條件進樣1 μL，連續進樣6次，以β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值計算精密度。結果，RSD＝1.46%，表明本方法精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液，按上述色譜條件，在0、6、10、14、18、24 h各進樣1 μL，計算β-欖香烯與水楊酸甲酯峰面積比值。結果，RSD＝0.96%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 重復性試驗

取本品同一批粉末2 g，精密稱定，平行6份，按“2.2.3”項下方法制成供試品溶液，分別精密吸取1 μL注入GC儀，計算含量。結果，樣品中β-欖香烯的平均含量為0.040 12%，RSD＝1.51%，表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取本品粉末1 g，精密稱定，平行9份，分別加入濃度為0.286 33 mg·mL-1的對照品溶液 0.8、1.0、1.2 mL，加乙醚50 mL，索氏回流提取至無色，提取液置通風櫥中揮干溶劑，加適量丙酮溶解并轉移至10 mL量瓶中，移入濃度為1.515 mg·mL-1的內標溶液0.5 mL，用丙酮定容，即得供試品溶液。按照校正因子法測定樣品含量，并計算加樣回收率，結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n＝9）Tab 2Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測定

取15批醋莪術飲片粉末各2 g，精密稱定，平行3份，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述方法測定樣品中β-欖香烯的含量，結果見表3。

3 討論

筆者比較了HP-50毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）、HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）、HP-INNOWAX毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）3種色譜柱，分別采用同一色譜條件進行分離。結果表明，用HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm×1.0 μm）分離效果較佳。

筆者對提取溶劑、提取方式及提取時間進行了考察，發現采用乙醚索氏提取，提取效果較好，且色譜峰峰形較好；而采用無水乙醇提取的樣品，內標物水楊酸甲酯峰峰形前延，對稱度稍差，故確定采用乙醚索氏提取。且當樣品提取至無色以后，延長提取時間對β-欖香烯提取量影響較小。可見，樣品使用乙醚作溶劑，以索氏提取器提取至無色為宜。

表3 醋莪術飲片中β-欖香烯含量測定結果Tab 3 Content determination of β-elemene in Rhizoma Curcumae decoction pieces

本試驗結果表明，3種不同來源的醋莪術飲片中，溫郁金中β-欖香烯的含量高于其它兩個產地樣品的含量。本方法簡便、快速、準確，可為制定醋莪術飲片的質量標準提供依據，同時對含莪術的中成藥制劑的質量控制也有參考價值。

[1]謝永忠，夏 泉.高效液相色譜法測定莪術中吉馬酮的含量[J].中國藥房，2005，16（6）：461.

[2]王 琰，王慕鄒.姜黃屬常用中藥的研究進展[J].中國藥學雜志，2001，36（2）：80.

[3]戚愛棣.HPLC法測定姜黃、郁金、廣西莪術中姜黃素的含量[J].中草藥，2002，33（6）：510.

[4]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第8卷）[M].上海：上海科學技術出版社，1999：626.

[5]Liu MZ，He LR.Effect of hypoxic radiosensitizer sodium glycididazole on long-term result of radiotherapy for nasopharyngeal carcinoma[J].Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2006，28（12）：932.

[6]馮海紅，陸兔林，熊汝菊，等.氣相色譜法測定不同品種莪術中β-欖香烯的含量[J].內蒙古中醫藥，2008，27（2）：37.

Comparison of the Content ofβ-elemene in Rhizoma Curcumae Decoction Pieces from Different Habitats

JIANG Guo-fei，MAO Chun-qin，LU Tu-lin，XU Jia-jia（College of Pharmacy，Nanjing University of TCM，Nanjing 210046，China）

OBJECTIVE：To establish GC method for the content determination ofβ-elemene in Rhizoma Curcumae decoction pieces from different habitats.METHODS：The determination condition were as follows：HP-5 capillary column（30 m×0.53 mm×1.0 μm），methyl salicylate as the internal standard，itemperature programmng，FID，splitless and injection volume of 1 μL.The temperature of gasification room was set at 240℃；the temperature of detecting room was set at 250℃.RESULTS：The linear range forβ-elemene was 0.015 07～0.150 70 μg（r＝0.999 6）with an average recovery of 96.13%（RSD＝1.37%，n＝9）.β-elemene took up relative high proprotion inCurcuma wenyujin.CONCLUSION：The method can be used for the content determination ofβ-elemene Rhizoma Curcumae in decoction pieces.

Rhizoma Curcumae decoction pieces；β-elemene；GC；Content determination

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2010）39-3697-03

2009-10-08

2009-12-10）