寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油成分分析

張素英，張仁波（1.遵義師范學(xué)院化學(xué)系，遵義市 56300；.遵義師范學(xué)院生物系，遵義市 56300）

寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油成分分析

張素英1＊，張仁波2（1.遵義師范學(xué)院化學(xué)系，遵義市 563002；2.遵義師范學(xué)院生物系，遵義市 563002）

目的：分析寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油的化學(xué)成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油，用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)對揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，并與云南滬西縣松風(fēng)草揮發(fā)油化學(xué)成分作比較。結(jié)果：共分離出49種組分，鑒定出其中的48種，占揮發(fā)油總量的95.85%；以烷類（二十三烷到三十三烷等）、酸類（棕櫚酸、亞油酸等）、香豆素（異虎耳草素、花椒毒素等）、萜類（欖香烯、大根香葉烯等）和辛基油等成分為主，其中一些成分（如異虎耳草素、花椒毒素、欖香烯、亞油酸）具有重要的生物活性。本次研究所分離的松風(fēng)草揮發(fā)油成分及含量與云南滬西縣所產(chǎn)的成分和含量有顯著差異，其中有45種成分為首次從該種植物中檢出。結(jié)論：本試驗(yàn)結(jié)果可為松風(fēng)草的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

松風(fēng)草；揮發(fā)油；化學(xué)成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)

松風(fēng)草（Boenninghausenia albiflora（Hook.）Reichb.ex Meisn.），為蕓香科石椒草屬植物，多年生草本，全株有強(qiáng)烈氣味[1]。松風(fēng)草具有散寒退熱、行氣化滯、活血化瘀、斂瘡拔膿、解毒定痛之功效。彝醫(yī)以松風(fēng)草的根或全草入藥，主治感冒發(fā)燒、腹脹、跌打損傷、瘡瘍潰膿。

目前對松風(fēng)草的研究報(bào)道較少，僅1999年葉曉雯等[2]對云南滬西縣松風(fēng)草的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了研究。為了更深入了解這種植物的揮發(fā)油成分，筆者采集貴州寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MC）聯(lián)用技術(shù)對其揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行分析，并與云南滬西縣松風(fēng)草揮發(fā)油化學(xué)成分作比較，以期為松風(fēng)草的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

HP6890/5975C型GC-MS聯(lián)用儀、HPMSD化學(xué)工作站（美國Agilent公司）；蒸餾裝置自配。

松風(fēng)草采自貴州省遵義市綏陽縣寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)遵義師范學(xué)院生物系種子植物分類學(xué)張仁波講師鑒定為蕓香科石椒草屬植物松風(fēng)草B.albiflora（Hook.）Reichb.ex Mesin.；乙醚、無水硫酸鈉均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 松風(fēng)草揮發(fā)油的提取

取干燥后粉碎的松風(fēng)草進(jìn)行水蒸氣蒸餾，餾出液用乙醚萃取，無水硫酸鈉干燥，回收乙醚后得到揮發(fā)油。

2.2 松風(fēng)草揮發(fā)油的測定

2.2.1 GC條件 色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱（30 m×250 μm×0.25 μm）；載氣：99.999%氦氣；載氣流量：1.0 mL·min-1；柱前壓：7.62 psi；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：20∶1；色譜柱溫度為50 ℃（保持2 min），以5 ℃·min-1升至300℃后，保持5 min；氣化室溫度：250℃。

2.2.2 MS條件 電離方式：EI；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150 ℃ ；電離能量：70 eV；發(fā)射電流：34.6 μA；倍增器電壓：1 037 V；接口溫度：280℃；溶劑延遲4 min；質(zhì)量范圍：20～550 amu。

2.2.3 分析方法 通過HPMSD化學(xué)工作站，結(jié)合Nist 05標(biāo)準(zhǔn)MS圖庫和Wiley 275MS圖譜庫，確認(rèn)松風(fēng)草揮發(fā)油的化學(xué)成分。

2.3 松風(fēng)草揮發(fā)油的化學(xué)成分分析

經(jīng)GC-MS分析，從貴州寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油中共分離出49種成分，鑒定出其中的48種，占揮發(fā)油總量的95.85%，其中45種成分在該種植物中首次檢出。松風(fēng)草揮發(fā)油的檢出成分分析結(jié)果見表1；總離子流圖見圖1。

表1 松風(fēng)草揮發(fā)油的檢出成分分析結(jié)果Tab 1 Analysis of chemical constituents of the volatile oil from B.albiflora

由表1可見，貴州寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草含量較多的是烷類、脂肪酸類和一些有重要活性的香豆素及萜類物質(zhì)。其中含量最高的為烷烴類（12個(gè)），占揮發(fā)油總量的26.124%，從二十三烷到三十三烷均有分布；其次為脂肪酸類（5個(gè)，17.031%）和萜類（11個(gè)，17.278%）。脂肪酸類化合物中含量最高的為棕櫚酸（8.375%）、亞油酸（4.499%），其它如月桂酸、肉豆蔻酸、十五烷酸含量均在1%以上。萜類化合物中萜烯（6個(gè)）占9.216%，萜醇（5個(gè)）占8.062%，萜類氧化物（1個(gè)）占1.945%，萜烯中含量最高的為吉瑪烯D（4.842%），其它還包括α-蛇麻烯、雙環(huán)吉瑪烯及具有抗癌活性的欖香烯等；香豆素類化合物（3個(gè)）也是松風(fēng)草中含量較大的一類化合物，而且有重要的生物學(xué)活性，占揮發(fā)油總量的11.236%。香豆素類化合物中含量最高的為花椒毒素（8.405%），其它如5，7-二甲氧基香豆素和異虎耳草素含量也均在1%以上；酯類化合物的含量為13.58%，其中辛基油的含量為9.481%；其它（醛類、酚類、酮類、胺類、雜環(huán)化合物及一般烯烴和醇類）含量都較低。

圖1 松風(fēng)草揮發(fā)油的總離子流圖Fig 1 Total ion current chromatogram of the volatile oil from B.albiflora

2.4 貴州產(chǎn)松風(fēng)草與云南產(chǎn)松風(fēng)草化學(xué)成分的比較

為更清楚了解松風(fēng)草揮發(fā)油成分情況，現(xiàn)將貴州寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草與1999年葉曉雯等研究的云南滬西縣松風(fēng)草揮發(fā)油成分進(jìn)行對比，以便人們對松風(fēng)草進(jìn)行綜合研究、開發(fā)利用。貴州寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油中烷烴類、酯類、酸類及香豆素類成分含量較豐富，其中香豆素類成分為該地松風(fēng)草的特有成分種類。而云南滬西縣松風(fēng)草揮發(fā)油中鑒定出的成分以酯類和醇類（1，3-丁二醇的含量為21.90%）居多，另外還有少量的酸類和萜類。雖都含有酯類和萜類，但兩地成分差異較大，貴州產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的酯類為辛基油、丁基酞酸酯和乙酸橙花酯；云南產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的酯類主要以乙酸癸酯（28.20%）、乙酸乙酯（10%）為主，其它如乙酸十二酯、乙酸辛酯、乙酸金合歡酯含量均在1%以上。兩地萜類成分的差異也較大，貴州產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的萜類成分主要為吉瑪烯D（4.842%）和植醇（4.638%）；云南產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的萜類成分含量較少，但種類豐富，共有17種成分，除2種共有成分β-欖香烯、α-蛇麻烯外，其它萜類成分均不相同。另外，酸類成分也大不相同，貴州產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的酸類成分主要為棕櫚酸（8.375%）和亞油酸（4.499%），而云南產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油的酸類成分為乙酸（4.40%）。通過比較可知，松風(fēng)草揮發(fā)油所含化學(xué)成分種類較豐富，但兩地成分存在較大差異[3]。除3種共有成分（β-欖香烯、α-蛇麻烯及乙酸金合歡酯）外，其余均為各地松風(fēng)草特有成分。

3 討論

松風(fēng)草揮發(fā)油所含化學(xué)成分種類豐富，但兩地成分差異較大，這種差異產(chǎn)生的原因有待進(jìn)一步研究。

貴州產(chǎn)松風(fēng)草揮發(fā)油中含有許多具有重要生物活性的成分，如香豆素類成分。其中，異虎耳草素對人膀胱癌細(xì)胞系EJ細(xì)胞株和人肝癌細(xì)胞株BEL-7402細(xì)胞的生長有一定程度的抑制作用，呈濃度-效應(yīng)關(guān)系[4，5]?；ń范舅鼐哂泻軓?qiáng)的光敏性，國外臨床上主要用于光化學(xué)（PUVA）療法治療白癜風(fēng)、牛皮癬等皮膚頑疾[6]；近些年來發(fā)現(xiàn)花椒毒素對血液中多種DNA病毒和RNA病毒等有很好的滅活作用[7]；花椒毒素還可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[6]，對艾氏瘤和不能手術(shù)的乳腺癌有效[7]。另外，貴州和云南松風(fēng)草揮發(fā)油的共有成分β-欖香烯是近年來我國首先從活血化瘀中藥莪術(shù)揮發(fā)油中提取出的一種抗癌有效成分，是目前應(yīng)用于臨床療效比較明確的國家二類抗腫瘤藥物。大量研究表明，欖香烯能夠抑制胃癌、肝癌、宮頸癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖[8]。酸類成分中的棕櫚酸具抗腫瘤活性，在高濃度時(shí)能將小鼠乳腺癌tsFT210細(xì)胞的細(xì)胞周期抑制在G2/M期并誘發(fā)tsFT210細(xì)胞發(fā)生凋亡[9]；棕櫚酸還能引起成人骨肉瘤細(xì)胞MG63的凋亡[10]。亞油酸是人體必需的脂肪酸之一，它不僅可通過影響血漿脂蛋白磷脂的分子組成，改變膽固醇脂蛋白在肝臟的吸收，從而降低血膽固醇[11]，還有抑制MiaPaCa2人胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移和促進(jìn)其凋亡的作用，且呈劑量依賴性，高濃度的亞油酸作用更加顯著[12]；另外，亞油酸還對人體乳腺髓樣癌BCaP-37細(xì)胞的生長增殖有劑量和時(shí)間依賴性的抑制效果[13]；并且，不飽和脂肪酸（LA）對人肺腺癌細(xì)胞系（SPC-A1）細(xì)胞還有明顯的抑制作用[14]。

鑒于寬闊水國家級(jí)自然保護(hù)區(qū)松風(fēng)草揮發(fā)油中有多種具有重要活性的化學(xué)成分，這些化學(xué)成分是否會(huì)直接影響到它的臨床應(yīng)用，將是進(jìn)一步探究的問題。

[1]黃成就.中國植物志（第43卷第2分冊）[M].北京：科學(xué)出版社，1997：82～83.

[2]葉曉雯，李樹幟，唐自明.松風(fēng)草揮發(fā)油化學(xué)成分研究[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，22（1）：16.

[3]楊榮平，王賓豪，勵(lì) 娜，等.GC-MS法分析腫節(jié)風(fēng)莖和葉中揮發(fā)油化學(xué)成分[J].中國藥房，2008，19（30）：2 368.

[4]楊秀偉，徐 波，冉福香，等.11種香豆素類化合物對人膀胱癌細(xì)胞系EJ細(xì)胞株生長抑制活性的篩選[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2007，5（1）：56.

[5]楊秀偉，徐 波，冉福香，等.40種香豆素類化合物對人胃癌細(xì)胞株BGC和人肝癌細(xì)胞株BEL-7402細(xì)胞生長抑制活性的篩選[J].中國現(xiàn)代中藥，2006，8（11）：79.

[6]王來友，楊得坡，黃世亮.花椒毒素的合成工藝改進(jìn)[J].中國藥物化學(xué)雜志，2004，14（3）：154.

[7]謝少雄，李曉群，金琪漾，等.閩臺(tái)兩省香豆素類抗癌植物[J].福建中醫(yī)藥，1999，30（1）：39.

[8]陳亦明，余 震，張培趁，等.欖香烯對胃癌SGC-7901細(xì)胞株P(guān)PARγ基因的影響[J].浙江醫(yī)學(xué)，2008，30（7）：689.

[9]蘇秀芳，林 強(qiáng)，梁振益.蝴蝶果花、葉揮發(fā)油的化學(xué)成分[J].廣西植物，2008，28（3）：424.

[10]王筱菁，李萬根，蘇 杭，等.棕櫚酸及亞油酸對人成骨肉瘤細(xì)胞MG63作用的研究[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2007，13（8）：542.

[11]周 鴻，山杉公男.亞油酸對大白鼠血膽固醇濃度及磷脂分子組成的影響[J].江西科學(xué)，2002，20（4）：207.

[12]陳傳貴，陳劍秋，孫晉津.亞油酸對MiaPaCa2人胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J].天津醫(yī)藥，2009，39（1）：34.

[13]何永頻，何更生.亞油酸和DHA對人體乳腺髓樣癌BCaP-37細(xì)胞生長增殖的影響[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1999，33（1）：57.

[14]沙慧芳，龔樂羅.不飽和脂肪酸對肺癌細(xì)胞的抑制作用[J].上海醫(yī)學(xué)，1994，17（11）：635.

Analysis of Chemical Constituents of the Volatile Oil fromBoenninghausenia albiflorain Kuankuoshui National Nature Reserve

ZHANG Su-ying（Dept.of Chemistry，Zunyi Normal College，Zunyi 563002，China）
ZHANG Ren-bo（Dept.of Biology，Zunyi Normal College，Zunyi 563002，China）

OBJECTIVE：To analyze the chemical constituents of the volatile oil fromBoenninghausenia albiflorain Kuankuoshui national nature reserve.METHODS：The volatile oil was extracted fromB.albifloraby steam distillation.The chemical constituents of the volatile oil fromB.albiflorain Kuankuoshui national nature reserve were analyzed by GC-MS and compared with that fromB.albiflorain Huxi county of Yunnan province.RESULTS：49 components were separated fromB.albiflora，among which 48 components were identified.The peak areas of the identified components accounted for 95.85%of the total peak areas of components.There were mainly alkanes（ranged from tricosane to tritriacontane），acids（hexadecanoic acid and linoleic acid），coumarin（isopimpinellin and xanthotoxin），terpenes（γ-elemene and germacrene）and octoil.Some of these ingredients（such as isopimpinellin，xanthotoxin，γ-elemene，linoleic acid）had important biological activity.The ingredients and content ofB.albiflorawere significantly different between Kuankuoshui national nature reserve and Huxi county.45 kinds of chemical constituents were identified inB.albiflorafor the first time.CONCLUSION：The results of experiment provide reference for further development ofB.albiflora.

Boenninghausenia albiflora；Volatile oil；Chemical constituents；GC-MS；Kuankuoshui national natural reserve

R284.1；R931.6

A

1001-0408（2010）39-3719-03

＊講師，碩士。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)。電話：0852-8927159。E-mail：suyingzhang333@163.com

2009-11-28

2010-03-03）