正交試驗法優化消風膠囊中牛蒡子的提取工藝

2010-09-15 09:52:58江蘇省張家港市中醫醫院215600

中國中醫藥現代遠程教育 2010年18期

關鍵詞：工藝

余輝張衛江蘇省張家港市中醫醫院（215600）

余輝張衛江蘇省張家港市中醫醫院（215600）

目的優化消風膠囊中牛蒡子的提取工藝。方法采用正交試驗法，以提取液中牛蒡苷的含量為考察指標，對影響水煎提取效果的加水量、煎煮時間、煎煮次數等3個因素進行研究，用HPLC測定消風膠囊中牛蒡子苷的含量。結果消風膠囊的最佳提取工藝為A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時間為2、1.5小時。結論該實驗所優選的工藝得到的干浸膏率和牛蒡苷的含量最高。

消風膠囊；牛蒡子；牛蒡子苷；提取工藝；正交試驗設計

消風膠囊是根據《醫宗金鑒》之處方消風散衍化而成,由牛蒡子、苦參、防風、荊芥、蟬蛻、知母等11味中藥材組成，具有疏風養血、清熱除濕之功效，主要用于治療蕁麻疹、濕疹、糠疹、皮炎等瘙癢性皮膚病。牛蒡子味辛、苦、性寒、歸肺、胃經，具有疏散風熱、解毒透疹、利咽消腫等功效，主要用于治療外感風熱，咽喉腫痛，發熱咳嗽；麻疹初期，疹出不暢；風熱疹癢；熱毒瘡腫；痄腮；咽喉腫痛等[1]；民間用于治療風熱感冒、流行性腮腺炎、風疹、癰腫瘡瘍、梅毒、壞血癥等[2,3]，現代藥理學證明有抗菌、抗腫瘤、降血糖等作用[4,5]。牛蒡子的主要化學成分為牛蒡子苷、牛蒡子苷元[6]，牛蒡苷具有很強的藥理作用，故本研究選擇牛蒡苷的含量作為水提正交工藝研究的評價指標，對影響水煎提取效果的加水量、煎煮時間、煎煮次數等3個因素進行研究，用HPLC法測定消風膠囊中牛蒡子苷的含量對消風膠囊水提取工藝進行優化研究。

1 儀器與材料

SPD-10A、LC-10AT高效液相色譜儀；TG328A電子分析天平；循環水式多用真空泵SHB-ⅢA(上海豫康科教儀器設備有限公司)；數顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司)；2102超聲波清洗器（上海安譜科學儀器有限公司）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海浦東榮豐科學儀器有限公司,上海圣欣科學儀器有限公司)；消風膠囊（張家港市中醫醫院自制）；牛蒡苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所批號0818-200203 供含量測定用）；水為超純水，乙腈為色譜純(購自國藥集團化學試劑有限公司批號07020211)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計選用L，(34)正交表，以牛蒡苷的提取率為考核指標，考察水提取中的加水量（A）、煎煮時間（B）和煎煮次數（C）三個因素，每個因素設三水平。其因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2.2 樣品提取液的制備按處方配比稱取藥材適量，按正交試驗表進行水提取，藥液抽濾，濾液濃縮至1000ml，備用。

2.3 牛蒡子苷含量的測定

2.3.1 正交試驗法提取牛蒡子苷供試品溶液的制備[7]：取處方量的藥材共計121g,煎煮后合并煎液,抽濾,濾液濃縮后定容至1000ml，量取20ml，經微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。精密量取50ml液體置干燥恒重的蒸發皿中于水浴鍋上蒸干,轉移至105℃烘箱干燥，測重，每份樣品平行測兩份，計算得干浸膏得率（%）。

對照品溶液的制備[7]：精密稱取干燥的牛蒡苷對照品16.40mg，置25.0ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.656mg/ml的牛蒡苷對照品溶液。

2.3.2 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算，即得牛蒡苷含量。正交試驗結果見表2。

表2 正交試驗結果

表3 干浸膏得率的方差分析

表4 牛蒡苷含量的方差分析

從正交結果可知：各因素對干浸膏得率影響大小順序為：A（加水量)＞C(煎煮次數)＞B(煎煮時間)；每個因素三個水平之間的趨勢為A2＞A1＞A3,B1＞B2＞B3,C3＞C2＞C1。各因素對牛蒡苷含量的影響大小順序為：A＞B＞C；每個因素三個水平之間的趨勢為A2＞A1＞A3, B1＞B2＞B3,C2＞C3＞C1。直觀分析得到本實驗的最佳提取工藝是A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時間為2、1.5h。方差分析結果表明：A、B、C三個因素均無顯著性差異。

2.3.3 色譜條件的選擇[8]色譜條件BDS Hypersil C18色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相為乙腈∶水（23:77）；測定波長280nm；流速1mL/min；進樣量10μL，理論板數按牛蒡苷峰計算應不低于1500。

2.3.4 標準曲線的制備精密吸取牛蒡苷對照品溶液（0.656mg/ml），分別進樣2μL、4μL、6μL、8μL、10μL，注入高效液相色譜法儀，測定，以牛蒡苷進樣量為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為：A=464359C—96301，R2=0.9981。結果表明：牛蒡苷進樣量在1.312～6.56μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。牛蒡苷線性考察結果見表5。

表5 牛蒡苷線性考察結果

2.3.5 精密度試驗精密吸取取牛蒡苷對照品溶液（0.656mg/ml），進樣10μl，重復進樣5次，測定色譜峰面積，其RSD為1.7240%（n=5），結果表明本法精密度良好.附圖1、附圖2

表6 精密度試驗結果

2.3.6 重現性試驗稱取處方量的藥材共五份，按最佳提取工藝A2B1C2制備供試品溶液，進樣10μL，分別測定其峰面積，求出RSD=1.80%，結果表明本方法重現性良好，附圖3。

表7 重現性試驗結果

3 討論

3.1 正交實驗結果分析從方差分析表中的統計量的值可以知道，三個因素都是不顯著的，即通過方差分析不能確定最好的水平組合。只能通過直觀分析得到本實驗的最佳提取工藝是A2B1C2，即加水量為10、8倍，提取時間為2、1.5h。

3.2 提取方法的選擇口服液體制劑消風合劑為張家港中醫院自制制劑，臨床療效確切，成效顯著，但合劑生產工藝原始，質量標準偏低，且服用量大，不便攜帶，膠囊劑可以提高藥物的穩定性及生物利用度，服用量小，便于攜帶，故進行了膠囊劑的研究。牛蒡子為本處方之君藥，其主要成分和活性成分為牛蒡苷，牛蒡苷極性較大，一般可溶于水，易溶于熱水、稀醇。考慮到大生產的成本及原合劑的生產工藝，故本次實驗選用水提取工藝，但本實驗結果表明采用水提工藝進行牛蒡子的提取，其影響因素無顯著性差異。有研究表明采用70%的乙醇提取牛蒡子所得有效成分較高，鑒于時間關系，本次實驗未進行牛蒡子水提和醇提的差異比較，還有待于進一步實驗研究。

3.3 流動相的選擇本研究曾采用《中國藥典》一部牛蒡子項下的流動相甲醇：水（1:1）進行預試，結果樣品分離不理想，后參考了藥典中羚羊感冒片【含量測定】項下牛蒡子的測定方法，以乙腈-水為流動相，結果采用乙腈-水（23:77）進行分離，可獲得較好的效果。