大耳白兔髂動脈球囊擴張成形術后宏觀四診信息望診的采集及分析※

柴欣樓 黃小龍 張永生

（1.北京中醫藥大學,100029 2.中國中醫藥出版社3.北京中醫藥大學附屬東方醫院）

冠狀動脈嚴重狹窄,造成心肌細胞缺血缺氧,是冠心病的主要病理機制。經皮冠狀動脈內球囊擴張成形術(Percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)可恢復冠狀動脈前向血流,已成為治療冠心病的基石。由于血管的彈性回縮及血管內膜增厚,術后半年內再狹窄的發生率高達40%～60%[1,2]。因而成為目前的研究熱點。中醫對其的認識也不斷提高,但是其所屬的證候不甚明確,本實驗以PTCA術后大耳白兔為研究對象,旨在觀察 PTCA術后實驗動物的癥狀學。

實驗材料

1.實驗動物 :清潔級健康新西蘭兔[提供單位:北京海淀興旺動物養殖場,動物合格證號:SCXK(京)2006-0006]20只 ,雄性,體重2.5±0.3kg。

主要藥品與試劑:①阿司匹林腸溶片(北京天惠藥業股份有限公司,批號:H10940191,50mg/片)。②鹽酸普魯卡因注射液(北京市永康藥業有限公司,批號:H11020574,2ml:40mg/支)。③烏拉坦(國藥集團化學試劑有限公司,批號:T20070921,化學純CP500g)。④肝素鈉注射液(江蘇常州千紅生化制藥有限公司,批號:H32002066,2ml:12500U/支)。⑤注射用青霉素鈉(華北制藥股份有限公司,批號:H13020657,80萬U/瓶)。⑥甲醛溶液(濟南魯康化學工業有限公司,批號:T02010242,分析純500ml)。⑦安爾碘皮膚消毒劑(上海利康消毒高科技有限公司,批號:20080421,40ml/瓶)。⑧ICAM-1試劑盒、VCAM-1試劑盒、MCP-1試劑盒(購買于武漢博士德生物工程有限公司)。

主要實驗儀器:①SigmaK15臺式低溫高速冷凍離心機(博萬力行儀器有限公司)。②電子天平DT-201A(江蘇常熟金羊天平儀器廠)。③全自動生化分析儀(型號:OLYMPUSAU640日本造)。④DADEBEHRING(型號:BN-Prospec,美國 造)。⑤STAR72600酶標儀(型號:ICAP-9000,美國Jarrel-ASH公司)。⑥數碼成像軟件(SPOT-ⅡDiagnotisticinstrument inc.美國)。

動物分組:按計算器隨機數隨機分組編號:正常組6只,模型組6只,中藥組8只。

實驗方法

動脈粥樣硬化模型的建立:新西蘭兔分組適應性喂養 1周后,中藥組(瓜蔞 2.14g/kg,生曬參0.64g/kg,酒大黃0.43g/kg)、模型組均給予高脂飼料(1%膽固醇+7.5%蛋黃粉+8%脂肪+83.5%普通兔全價飼料)100g/日喂養 6周,6周后中藥組及模型組采用球囊拉傷術損傷髂動脈。術后均繼續以高脂飲食喂養5周。正常組全程給予普通兔飼料喂養,各組均自由飲水。

手術方法:術前3天服用阿司匹林腸溶片25mg/日,術前禁食12h,不禁水。兔耳緣靜脈注射部位備皮,75%酒精消毒,普魯卡因注射液局部表面麻醉后靜推10%烏拉坦10ml/kg,同時推入2%肝素鈉注射液5ml。麻醉5min后,兔無明顯掙扎,角膜反射遲鈍,心率增快,將其仰臥位固定于兔臺,右腹股溝區剪毛備皮,安爾碘局部消毒3次。尋找股動脈搏動部位,剪開皮膚約3cm開口,逐層分離筋膜及肌肉,暴露股神經及股靜脈,于股靜脈內下方找到股動脈后,分離股動脈與周圍組織長約2cm段,遠心端用絲線結扎,近心端套活結并加上動脈夾。將眼科鑷柄墊于股動脈下,距離動脈結扎端較近部位剪一“V”形切口,將導管沿切口向近心端插入,拉緊活結,放松動脈夾,再稍放松活結,迅速將導管插入股動脈10～15cm,回拉至髂動脈,連接手推壓力泵,注入肝素生理鹽水,球囊充水約5個大氣壓后緩慢回拉,減除球囊壓力后再次向前推進球囊導管。重復3次后拔出,結扎股動脈近心端,逐層縫合,傷口以安爾碘消毒,用生理鹽水沖洗傷口周圍3遍,臀部注射青霉素鈉80萬U/日(連用3天),待兔蘇醒后放回兔籠,術后8h予生理鹽水10ml口服。

在此過程中系統觀察精神狀態、活動性、毛色、毛質 、毛狀 、耳郭 、望目色 、望舌 、舌形 、苔色 、舌下絡脈 、舌靜脈瘀黑伸展度、爪色、浮腫、傷口愈合、滲血滲液、食欲、飲食量、活動量等。

實驗結果

一般狀態觀察:術后1～7天,各組大耳白兔均出現毛發雜亂、活動緩慢、精神遲鈍等表現,與手術過程后失血、疼痛有關。術后7～10天,模型組、中藥組宏觀表現中精神狀態、毛色、毛質、毛狀、耳郭、目色、舌形、苔色 、舌下絡脈 、舌靜脈 、伸展度 、爪色 、浮腫 、傷口愈合 、滲血滲液、食欲等未見顯著性差異。

各組新西蘭兔腹主動脈內膜、中膜面積及內膜/中膜面積比值比較見表1。

表1 各組新西蘭兔腹主動脈內膜、中膜面積及內膜/中膜比值

結果顯示:模型組、中藥組腹主動脈內膜、中膜面積及內膜/中膜比值較正常組有顯著性差異;中藥組內膜面積及內膜/中膜比值較模型組有顯著性差異。

體重:各組兔子術后體重比較見表2。

表2 各組兔子術后體重比較

結果顯示:PTCA術后20天中藥組兔子的體重比模型組兔子更接近于正常。

各組兔子術后活動性比較見表3。

表3 各組兔子術后活動性比較

結果顯示:PTCA術后20天中藥組兔子的活動性明顯好于模型組兔子。

中藥組和模型組兔子術后傷口愈合程度比較見表4。

表4 中藥組和模型組兔子術后傷口愈合程度比較

PTCA術后20天中藥組兔子的傷口愈合情況好于模型組兔子。

結論

通過正常組、中藥組、模型組大耳白兔髂動脈球囊擴張成形術后宏觀四診信息望診的采集及分析得出:通過中藥治療,大耳白兔髂動脈球囊擴張成形術后比不治療恢復情況更好。

討論

目前常用的球囊拉傷術模型包括兔的髂動脈、犬的股動脈和冠狀動脈及豬的冠狀動脈[1]。兔的優點是易捕捉麻醉,操作簡單、價廉、喂養方便及側支血管豐富,可在術后保證側支循環。缺點為髂動脈反應性高,易發生血管痙攣。本實驗采用純種新西蘭白兔,用與血管直徑約為1.2∶1比例的球囊過度擴張髂動脈,使得髂動脈血管損傷程度盡可能保持一致。病理結果顯示,模型組與正常組相比,內膜和中膜都有不同程度的增厚,說明家兔髂動脈球囊損傷內膜增生模型復制成功,為進一步實驗奠定了基礎。

中醫認為,球囊損傷模型是氣虛血瘀模型,但缺乏相應的證候動物模型的評價體系[2](該體系包括動物的宏觀表現、臨床疾病診斷標準、證候診斷標準和證候臨床生物學標志4個部分)。為此,本課題對大耳白兔進行了宏觀表征的直接觀察(包括動物一般狀態、運動、飲食、呼吸、體重 、舌象等內容);但由于動物在望、聞、問、切四診信息的采集上存在一定困難,且大多數體征模型組和用藥組均無差異,故而單純依賴觀察手段進行辨證是不夠的,借助其他實驗手段或采用更新的實驗儀器是動物模型辨證的必然選擇。

本課題對動物宏觀表征進行了直接觀察,由于采用的是局部球囊損傷模型,而且飼喂的時間較短,再加上動物本身皮毛厚又不能問診,所以動物四診信息采集丟失的信息較多,單純靠動物宏觀表征難以鑒定其病癥,要密切結合動物的生物學信息。

[1]何學令,尹海林,等.動脈粥樣硬化動物模型研究的現狀及存在的問題.實驗動物科學與管理,2006,23(4):41-43.

[2]沈自尹.中醫虛證辨證參考標準.中西醫結合雜志,1986,6(10):598.