抗風濕類中成藥中非法加入尼美舒利的檢測

李存金，郭飛宇

(1.江西省宜春市藥品檢驗所，江西 宜春 336000; 2.宜春職業技術學院，江西 宜春 336000)

抗風濕類中成藥中非法添加的化學物質主要有兩類:一類為抗炎、鎮痛類西藥，有雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、布洛芬、吡羅西康、氨基比林等;另一類為激素類西藥，如醋酸強的松、磷酸地塞米松、強的松等[1]。尼美舒利抗炎效果顯著，解熱鎮痛效力強，其不良反應國內報道不多，但國外報道其有極高的致嚴重肝損害風險。臨床應用也應注意肝功不全患者禁用、避免與有肝損害的藥物聯合應用，且長期應用者定期檢查肝功能，一旦發現肝功能改變應及時停藥[2]。因此，尼美舒利的應用需要臨床醫生的指導。患者服用非法添加了尼美舒利的中成藥后，短期內癥狀雖可緩解，但長遠看會對身體造成傷害[3-6]。為有效查處、打擊此類假藥的生產及銷售，筆者參考文獻[7-9]，用高效液相色譜(HPLC)法檢測了抗風濕類中成藥中非法添加的化學物質尼美舒利，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，Waters 1525型高效液相色譜儀，SK250LHC型超聲波清洗器，普析通用TU1901型紫外分光光度計。尼美舒利對照品(批號為100555-200501，中國藥品生物制品檢定所);水(二次重蒸餾水)，甲醇(色譜純)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μ m);流動相:0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調pH至4.0)-甲醇(45∶55);檢測波長:298 nm;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精取尼美舒利對照品適量，加甲醇超聲溶解并稀釋成0.5mg/mL的對照品貯備液，精取貯備液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶液。若供試品為片劑、丸劑、顆粒劑，研細，稱取一次最大服用劑量，置具塞錐形瓶中，加入約20 mL甲醇超聲處理10 min，放冷至室溫，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過;若供試品為膠囊劑，取一次最大服用劑量內容物，研細，置具塞錐形瓶中，加入約20 mL甲醇超聲處理10 min，放冷至室溫，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液5 mL，置25 mL量瓶中，膠囊殼[9]用熱水(70～80℃)10 mL溶解，用20 mL氯仿萃取，萃取液蒸干，殘渣加甲醇5 mL溶解，并入上述25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過;若供試品為口服液[10]，量取5 mL，置25 mL量瓶中，加入約15 mL甲醇超聲處理10 min，待溫度與室溫平衡后，用乙腈定容至刻度，超聲混勻，置冰箱中冷藏過夜。濾過后取續濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:取質量濃度為1.000 4 mg/mL的對照品貯備液 1，2，3，4，5，6 mL，置 10 mL 量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精取10 μL注入高效液相色譜儀測定，以質量濃度為對峰面積進行回歸，得線性回歸方程為 Y=14.866 98X+9.486 73，r=0.999 9(n=6)。結果表明，尼美舒利質量濃度在 100.04～600.24 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣6次，依法測定。結果峰面積的 RSD小于0.1%(n=6)，表明方法精密度良好。

重復性試驗:取同一供試品6份，依法制備供試品溶液并測定峰面積。結果平均含量為3.2%，RSD=0.2%(n=6)，表明方法重復性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，依法于 0，0.5，1.0，3.0，5.0，24.0 h時分別進樣。結果峰面積的 RSD為1.2%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

空白干擾試驗:共測定了5種劑型20批次抗風濕類中成藥樣品。取樣品，依法制備供試品溶液，注入液相色譜儀。結果在對照品溶液成分色譜峰相應位置上，無其他色譜峰出現(圖1)，證明該色譜條件下，各樣品雜質干擾小。

最低檢測限確定:在 S/N=3時，尼美舒利的最低檢測限為0.6 ng。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:精密稱取陰性樣品適量，精密加入尼美舒利對照品10 mg，依法制備供試品溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 尼美舒利加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密稱取樣品適量，依法制備供試品溶液并測定含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

考察了不同比例(55 ∶45，50 ∶55，60 ∶40)的甲醇-0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調節pH至4.0)作為流動相。結果表明，在選定的3種流動相比例適當變動的情況下，雜質成分仍能很好地分離，理論板數均不小于4 000。比較了本試驗用流動相中0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液的pH(3.9，4.0及4.1)，結果pH在4.0或微小的變動時，雜質成分仍能很好地分離，理論板數均不少于4 000。

曾用不同品牌色譜柱進行試驗，結果Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)均能取得滿意的分離效果與理論板數。

取尼美舒利對照品適量，加甲醇超聲溶解并用流動相稀釋成750 μg/mL的待測溶液。照紫外分光光度法在200～400 nm波長范圍內掃描。綜合考慮尼美舒利的吸收波長范圍，結合中成藥和保健品成分復雜等情況，本試驗選298 nm為分析波長。

取本品陽性樣品，分別超聲處理5，10，15 min，結果超聲處理10min即可將尼美舒利基本提取完全，故本試驗采用超聲處理10min。

[1]吳慶春.中成藥非法添加化學藥品的類型及鑒別[N].中國醫藥報，2008-01-06.

[2]孫 巖，武曉麗，張繼紅.尼美舒利致肝損害2例報告[J].吉林大學學報醫學版，2008，34(1):77.

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[6]張 莉，樊成輝.尼美舒利片劑引起肝功能損害、上消化道出血1例[J].中國藥物應用與監測，2007(2):60.

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[9]洪美華，林 達，王楚錦.摻假糖樂膠囊殼的檢測[J].中國藥業，2007，16(14):41-42.