元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經模型動物的影響

方遠書，何忠平，張 輝，裘穎兒

(浙江省金華市食品藥品檢驗所，金華 321000)

元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經模型動物的影響

方遠書，何忠平，張 輝，裘穎兒

(浙江省金華市食品藥品檢驗所，金華 321000)

目的 采用血清藥理學實驗方法，觀察元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經模型動物的影響。方法 縮宮素誘發大鼠痛經模型和前列腺素E誘發小鼠痛經模型法，對大鼠離體子宮收縮活動的影響。結果 元胡止痛膠囊的含藥血清能減少縮宮素所致大鼠扭體反應次數和前列腺素E1所致小鼠扭體反應次數，并能拮抗縮宮素對大鼠離體子宮的收縮作用。結論 元胡止痛膠囊的含藥血清對痛經模型動物有鎮痛作用，并對大鼠離體子宮收縮有解痙作用。

元胡止痛膠囊;含藥血清;痛經;模型，動物

元胡止痛膠囊是浙江天一堂藥業公司生產產品，具有理氣、活血、止痛之功能，對氣滯血瘀的胃痛、肋痛、頭痛及月經痛有較好的治療作用，主要由元胡、白芷等組成。本實驗采用血清藥理學實驗方法，選擇含藥血清對縮宮素誘發大鼠痛經模型和前列腺素E誘發小鼠痛經模型的作用，及對縮宮素引起的大鼠離體子宮收縮的作用。來比較不同時間段的含藥血清的作用強弱，以確定其藥效關系。

1 材料和方法

1.1 試驗材料與儀器

元胡止痛膠囊，批號080504，規格2.5 g，浙江天一堂制藥公司;縮宮素注射液，南京新天生物化學制藥有限公司，批號080705;注射用前列腺素E1，哈藥集團第六制藥廠，批號090106;已烯雌酚注射液，上海通用藥業股份有限公司，批號 080403。Medlab－u/Ac501H生物信號采集處理系統，南京美易科技有限公司產品，張力換能器(10g)，北京新航興業科貿易有限公司。

1.2 動物

新西蘭家兔，金華市藥檢所動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2006－0078。SD大鼠，浙江省實驗中心提供，合格證號 SCXK(浙)2009－0039。ICR小鼠，金華市藥檢所動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2009－0040。

1.3 含藥血清的制備

取新西蘭家兔40只，體重2.5～3.0 kg，每只兔均灌胃給藥，劑量1mL/kg(給藥劑量=臨床常用量×動物等效劑量系數×培養基內的稀釋度)，每天早、晚各1次，連續給藥7 d，各兔分別于最后一次給藥后后馬上取血(以 0 h表示)、0.5h、1.5 h、3 h取血1mL，置4℃保存2 h，待血液凝固，血清析出后，3 000 r/min離心10 min，取血清，40只兔血清合并在一起，置－20℃冰箱保存備用。

1.4 對縮宮素所致大鼠扭體反應的影響［1］

雌性大鼠30只，體重(200±20)g，隨機分為5組，連續皮下注射己烯雌酚(人工造成動物處于相同的動情期，并提高子宮平滑肌對藥物的敏感性)10 d，每日1次(首日 0.8 mg/只，第 2天至第 9天0.4 mg/只，第 10天 0.8 mg/只)，皮下注射己烯雌酚的大鼠第5天開始給受試藥，連續灌胃7d。末次給己烯雌酚24 h后，再給一次實驗藥物，40 min后腹腔注射縮宮素2 U/只，記錄給縮宮素30 min內大鼠發生的扭體反應次數(大鼠腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臂部與側肢體內旋，為子宮收縮即痛經的指標)。

1.5 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應的影響［2］

雌性小鼠50只，體重(20±2)g，隨機分為5組，連續皮下注射己烯雌酚10 d。(第1天、第10天為0.2 mg/只，其余每天注射0.1 mg/只)，在注射己烯雌酚的第5天開始，連續灌胃給藥7 d，末次給己烯雌酚24 h后，再給1次受試藥物，40 min后腹腔注射前列腺素E112.5 μg/10 g，觀察30 min內小鼠發生的扭體反應次數。

1.6 對大鼠離體子宮的影響

營養液與溫度的選擇:參照不同的文獻，筆者通過反復的預試驗，最后選定文獻［3］方法，在此溫度與營養液條件下子宮既能夠消除自律收縮，又能保持其敏感性。大鼠120～200 g，雌性，實驗前24 h按0.2 mg/100 g體重皮下注射己烯雌酚促使動物處于動情期，以提高子宮對藥物的敏感性。實驗開始前將動物處死，剪取2cm長之子宮，固定于盛有子宮營養液的麥氏浴槽中(15mL)，另一端與張力換能器連接，換能器與電腦相連，調節樣品前負荷為1 g(從電腦中可以直接量出子宮肌張力)，麥氏浴槽中不斷通入 O2，速度每秒1～2個氣泡。待子宮活動平穩后，從浴槽上方加入0.05 U(浴槽終濃度為0.003 U/mL)縮宮素，子宮平滑肌開始收縮，并且能在最高處穩定30 min，我們在縮宮素作用10 min后加入含藥血清，觀察子宮收縮情況。

2 結果

2.1 對縮宮素所致大鼠扭體反應的影響

由表1可見，，與0時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清比較，其0.5、1.5、3 h取血的含藥血清能明顯減少大鼠扭體反應次數，其中1.5 h取血的含藥血清作用最強。

表1 對縮宮素所致大鼠扭體反應的影響(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

表1 對縮宮素所致大鼠扭體反應的影響(±s，n=10)Tab.1 Effect on writhing response of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=10)

注:與0 h取血血清組比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血時間(h)Time to take blood Dose Writhing number 0 0.2 15.9±2.6 0.5 0.2 7.3±2.2※※1.5 0.2 1.9±0.7※※3.0 0.2 8.8±2.9※劑量(mL/kg)扭體次數

2.2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應的影響

由表2可見，與0時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清比較，其0.5、1.5、3 h取血的含藥血清能明顯減少小鼠扭體反應次數，其中1.5 h取血的含藥血清作用最強。

表2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應的影響(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

表2 對前列腺素E1所致小鼠扭體反應的影響(±s，n=10)Tab.2 Effect on writhing response of prostaglandin E－induced dysmenorrhea model mice(±s，n=10)

注:與0 h取血血清組比，※※P＜0.01，※P＜0.05Note:vs.the serum taken at 0 h

取血時間(h)Time to take blood劑量(mL/kg)Dose扭體次數Writhing number 0 0.2 32.3±5.0 0.5 0.2 21.7±3.6※※1.5 0.2 13.8±3.7※※3.0 0.2 28.2±3.9※

表3 對縮宮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

表3 對縮宮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響(±s，n=6)Tab.3Effect on the contraction of isolated rat uterus smooth muscle of oxytocin－induced dysmenorrhea model rats(±s，n=6)

注:同組之間加縮宮素后與再加含藥血清后肌張力比較※※p＜0.01，※p＜0.05Note:Comparison of the muscle tension between the same groups after adding of oxyntocin and that after further adding of drug－containing serum

取血時間(h)劑量(mL)加縮宮素肌張力(g)加藥后肌張力(g)抑制率(%)Time to take blood Dose Muscle tension after oxytocin Muscle tension after drug Inhibition 0 0.5 2.89±1.26 2.80±1.31 0 0.5 0.5 3.01±1.52 1.32±1.12※※ 56.1 1.5 0.5 2.85±1.36 0.86±0.66※※ 69.8 3.0 0.5 2.92±1.35 1.95±1.32※33.2

2.3 元胡止痛膠囊不同時間取血的含藥血清對大鼠離體子宮的影響

由表3可見，當加入含藥血清后子宮肌張力降低，不同時間取血，其作用不同，1.5 h取的含藥血清作用最強。

3 討論

元胡止痛膠囊，具有理氣、活血、止痛之功能，對氣滯血瘀的胃痛、肋痛、頭痛及月經痛有較好的治療作用。痛經多與子宮平滑肌痙攣性收縮、子宮供血不足或子宮炎癥有關?？s宮素和前列腺素E1可從不同機制引起子宮平滑肌痙攣(類痛經反應)，是較公認的痛經模型［4］。注射己烯雌酚是給動物催情，人工造成動物處于相同的動情期，并提高子宮平滑肌對藥物的敏感性。

本試驗采用不同時間取血的元胡止痛膠囊含藥血清，觀察其對動物痛經模型作用。結果元胡止痛膠囊含藥血清能明顯緩解縮宮素和前列腺素E1所致的大鼠、小鼠扭體反應，其中1.5h取的含藥血清作用最強。我們用HPLC測定不同時間取血的血清中延胡索乙素含量，結果血清中延胡索乙素含量從高到低依次為1.5、0.5、3.0 h取的血清，說明鎮痛作用主要是延胡索乙素，并與含量呈正比關系。由于中藥口服后其有機成分常在胃腸道內受到消化液和腸菌微生物生態轉化，也就是說中藥中的有效成分并不一定就是在體內直接發揮作用的成分，用含藥血清進行藥理實驗更能反應其發揮藥理作用的有效成分，通過本實驗，我們認為其鎮痛作用的有效成分主要是延胡索乙素。

［1］芮菁，吳燕敏，唐元泰，等.經痛寧顆粒劑治療痛經的藥理研究［J］.中藥藥理與臨床，2001，17(3):26－27.

［2］嵇波，張露芬，朱江，等.痛經模型建立和評價方法的思考［J］.中國藥理學通報，2008，24(6):712.

［3］H.Gerhard Vogel，WolfgangH.Vogel.著，杜冠華，李學軍，張永祥，譯.藥理學實驗指南—新藥發現和藥理學評價［M］.北京:科學出版社，2001:913.

［4］孫海燕，曹永孝，劉靜，等.小鼠痛經模型的建立［J］.中國藥理學報通報，2002，18(2):233－235.

Effect of the Drug Containing Serum of Yuanhuzhitong Capsule in Animal Model of Dysmenorrhea

FANG Yuan－shu，HE Zhong－ping，ZHANG Hui，Qiu Ying－er
(Jinhua Institute for Food and Drug Control，Jinhua，Zhejiang 321000，China)

Objective To observe the effect of the drug－containing serum of a traditional Chinese medicine，Yuanhuzhitong capsule，on animal model of dysmenorrhea.Methods Oxytocin－induced rat model of dysmenorrhea and prostaglandin E－induced mouse model of dysmenorrhea were prepared，and were treated with the drug containing serum.The effect of the drug－containing serum on isolated rat uterus was examined as well.Results The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule reduced the times of oxytocin－induced and prostaglandin E1－induced writhing response，and excerted antagonistic effect on the oxytocin－induced contraction of isolated rat uterus.Conclusion The drug containing serum of Yuanhuzhitong capsule has an analgesic effect on rat and mouse models of dysmenorrhea，and excerts a spasmolytic effect on the contraction of isolated rat uterus.

Yuanhuzhitong capsule;Drug－containing serum;dysmenorrhea;Model，rat

R－33

A

1671－7856(2010)08－0035－03

2010－05－25

浙江省分析測試基金項目(04003)。

方遠書(1968－)，男，獸醫師，主要研究方向:實驗動物學。E－mail:F19680103@126.com。

何忠平(1964－)，男，主任藥師，研究方向:動物實驗與管理。E－mail:jhshaoyq@163.com。