前列通瘀片對(duì)前列腺蛋白所致 CPPS大鼠前列腺組織細(xì)胞因子的影響

趙子劍

(懷化學(xué)院化學(xué)系，民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室湖南懷化418008)

前列通瘀片由黃芪、土鱉蟲(chóng)、冬葵子等十一味中藥提取而成，具有活血化瘀，清熱通淋之功效，主要用于慢性前列腺炎屬瘀血阻滯兼濕熱內(nèi)蘊(yùn)證，癥見(jiàn)尿頻尿急;余瀝不盡，會(huì)陰、下腹或腰骶部墜脹疼痛，或尿道灼熱，陰囊潮濕，舌紫暗或瘀斑，舌苔黃膩等癥。本研究通過(guò)觀察前列通瘀片干預(yù)CPPS大鼠前列腺組織中 IL-1β、COX-2、PGE2、β-EP 的含量，來(lái)探討前列通瘀片防治慢性前列腺炎的可能作用機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，清潔級(jí)，3月齡，體重180～220 g，♂性。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(陜)08-005。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料及主要儀器 試劑盒來(lái)源:IL-1β、COX-2、PGE2、β-EP試劑盒，由美國(guó) CeuautikineTmmurine公司提供，前列通瘀片(自制，批號(hào)20050908)。塞來(lái)昔布:國(guó)藥準(zhǔn)字J20030098，輝瑞制藥有限公司(普強(qiáng)蘇州制藥有限公司)，200 mg×6粒。佐劑用卡介苗:購(gòu)于陜西省生物制品研究所，批號(hào)20051102。百白破疫苗:購(gòu)于咸陽(yáng)市衛(wèi)生防疫站，武漢生物制品研究所，批號(hào)20050307。0.5%tritonX-100(凱基生物發(fā)展有限公司)生理鹽水溶液:取0.5 m L tritonX-100，加入100 mL生理鹽水溶液中，高溫滅菌。0.1 mol/L pH7.2的 PBS緩沖液:取 0.2 mol/L Na2HPO4360 mL，0.2 mol/L NaH2PO4140 mL，加入 NaCl 1.0 g，用蒸餾水補(bǔ)足至1000 mL。福氏完全佐劑(FCA):將液體石蠟與羊毛脂按2∶1比例共熱至70℃，混勻。高溫滅菌后按5 mg/mL加入佐劑用卡介苗，無(wú)菌乳化后使用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 大鼠前列腺蛋白提純液制作方法［1］取240～300 g♂性Wistar種大鼠，脫頸椎處死，在無(wú)菌條件下剝?nèi)∏傲邢俳M織，用冷生理鹽水洗凈。加入含0.5%tritonX-100生理鹽水溶液，在冰水浴上用玻璃勻漿器使之成勻漿。10 000 r/min離心，離心30 min，取上清液，測(cè)定蛋白含量。最后用0.1 mol/L pH7.2的 PBS緩沖液稀釋到15 mg/mL。

1.3.2 CPPS動(dòng)物模型的制作方法［1］取180～220 g♂性Wistar種大鼠70只，隨機(jī)分為正常組10只、實(shí)驗(yàn)組60只。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射百白破疫苗各0.5mL，并多點(diǎn)皮下注射大鼠前列腺蛋白提純液(劑量為15 mg/mL)和 FCA乳劑(比例1∶1)的混懸液1.0 mL，正常組分別腹腔注射、多點(diǎn)皮下注射PBS緩沖液0.5 mL、1.0 mL。以上各組分別在0、30 d各注射1次。45 d后模型成功。

1.3.3 分組與給藥 實(shí)驗(yàn)組在造模成功后隨機(jī)分為模型組(10只)、塞來(lái)昔布組(10只)及前列通瘀片大、中、小劑量組(各10只)5組。前列通瘀片大、中、小劑量組給藥劑量分別按臨床常用劑量的 12、6、3倍計(jì)算，分別為 36、18、9g生藥/kg。塞來(lái)昔布給藥劑量為0.04 g/kg。正常組和模型組給于相同劑量的蒸餾水，以上各組均灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥30 d。

1.3.4 取材［2］各組大鼠給藥30 d后稱重，用頸椎脫臼法處死大鼠。剖開(kāi)腹腔，取下前列腺，稱濕重。將前列腺組織分為左右兩部分，將右側(cè)部分稱重后，按每克前列腺組織加入0.5%tritonX-100生理鹽水溶液5.0 mL，在冰水浴上用玻璃勻漿器使之成勻漿。3 000 r/min離心20 min后取出上清液，置低溫冰箱中備用。

1.3.5 細(xì)胞因子含量檢測(cè) 用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ABC-ELISA)法;具體操作按各試劑盒使用說(shuō)明。各組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析(成組t)檢驗(yàn)［3］，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用±s表示。

2 結(jié)果

大鼠前列腺組織勻漿中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量變化結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大鼠前列腺組織勻漿中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量變化(±s;n=10)

表1 大鼠前列腺組織勻漿中 IL-1β，COX-2，PGE2，β-EP的含量變化(±s;n=10)

與正常組比較，﹡P<0.05，﹡﹡P<0.01;與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01;與塞來(lái)昔布組比較，▼P<0.05，▼▼P<0.01。

組別 IL-1β/(pg/mL) COX-2/(pg/mL) PGE2/(pg/mL) β-EP/(pg/mL)正常組 45.355±22.495△△ 59.048±21.056△△▼▼ 201.263±114.829△△▼▼ 134.265±27.546△△▼▼模型組 155.038±31.028﹡﹡▼▼ 262.167±58.721﹡﹡▼▼ 1057.715±150.896﹡﹡▼▼ 36.484±14.332﹡﹡▼▼塞來(lái)昔布組 54.363±20.255△△ 98.852±33.473﹡﹡△△ 463.706±129.048﹡﹡△△ 92.728±26.963﹡﹡△△前列通瘀片大劑量組 70.294±37.987△△ 88.301±38.972△△ 529.844±103.897﹡﹡△△ 85.392±18.759﹡﹡△△前列通瘀片中劑量組 80.878±31.939﹡△△▼ 131.921±34.894﹡﹡△△▼ 581.529±140.044﹡﹡△△ 53.745±17.386﹡﹡△▼▼前列通瘀片小劑量組 113.749±37.564△△﹡﹡▼▼ 167.236±45.561﹡﹡△△▼▼ 755.683±255.874﹡﹡△△▼▼ 51.941±22.599﹡﹡▼▼

3 討論

3.1 CPPS動(dòng)物模型的制作目前尚無(wú)公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法。現(xiàn)在使用的造模方法大致可歸納為三類:前列腺注射造模法、雌激素結(jié)合去勢(shì)造模法和通過(guò)自身免疫反應(yīng)造模法。前列腺注射造模法的病理機(jī)制是一種急性或增生性的炎癥，炎性反應(yīng)較為劇烈，與本病的病理表現(xiàn)相比有較大的差距。雌激素結(jié)合去勢(shì)造模法的造模效果與大鼠的種系和年齡等有較大的相關(guān)性，重復(fù)性較差。自身免疫反應(yīng)造模法的動(dòng)物發(fā)病機(jī)制和前列腺的病理改變與人比較接近，是目前相對(duì)較為理想的一種造模方法［4-5］。

IL-1β為促炎性細(xì)胞因子，可介導(dǎo)一系列免疫炎癥反應(yīng)。研究證明［6］，在 CPPS患者組的精漿中的促炎性細(xì)胞因子IL-1β的水平升高，明顯高于對(duì)照組。本實(shí)驗(yàn)顯示，模型組大鼠前列腺組織勻漿中 IL-1β較正常組顯著升高，表明在CPPS的前列腺組織中存在著較強(qiáng)的炎癥反應(yīng)，而這種炎癥反應(yīng)可由自身免疫反應(yīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生。前列通瘀片能顯著降低實(shí)驗(yàn)性CPPS大鼠前列腺組織中 IL-1β水平，因此具有較好的抗炎作用。

PGE2是一種炎性因子，本研究表明，前列通瘀片能夠降低前列腺組織中的PGE2含量，從而緩解 CPPS患者的疼痛癥狀。同時(shí)前列通瘀片還可以通過(guò)調(diào)節(jié)PGE2的含量以改善前列腺組織中的炎癥反應(yīng)。

β-EP是一種天然的內(nèi)阿片樣肽，主要由下丘腦弓狀核及垂體中葉合成分泌，有鎮(zhèn)痛及維持神經(jīng)內(nèi)分泌環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定等作用。本實(shí)驗(yàn)顯示:前列通瘀片能顯著升高前列腺組織中β-EP的含量，從而增強(qiáng)了局部的鎮(zhèn)痛作用，以減輕臨床癥狀。

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