葛根素對重癥急性胰腺炎肺損傷的保護作用

陳博

（廣東醫(yī)學院東莞校區(qū)生理科學實驗室，廣東東莞 523808）

重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一種既有胰腺本身病變，又極易并發(fā)遠隔臟器損害的急腹癥，其中肺損傷是SAP早期常見的并發(fā)癥和死亡原因，其死亡率高達50%，但其預防和治療缺少有效的藥物，因而一直是臨床重點難題之一[1]。葛根素對大鼠SAP有保護作用[2]，對大鼠急性肺損傷也有保護作用[3]，但對SAP所致的肺損傷有無作用報道較少。本研究旨在觀察葛根素對SAP肺損傷大鼠的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

健康Wistar大鼠，由廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供；牛磺膽酸鈉、卵磷脂為Sigma公司產品；葛根素注射液（Puerarin Injection，PI）為浙江康恩貝制藥股份有限公司生產，規(guī)格 2 ml/0.1 g，批號 051201；腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）的 ELISA 試劑盒為 TPI公司產品；Anthos 2010型酶標儀。

1.2 大鼠SAP模型的建立

大鼠術前12 h禁食、禁水，以20%氨基甲酸乙酯1 mg/kg腹腔注射麻醉，無菌條件下經腹壁正中切口入腹，除假手術組只翻動胰腺后關腹外，其余兩組均在主胰管內逆行插管，注入5%牛磺膽酸鈉10 ml/g后結扎主胰管，縫合腹壁。

1.3 實驗分組

Wistar大鼠30只，隨機分為假手術組（10只）、模型組（10只）、葛根素組（10只）。假手術組和模型組于造模前3 h分別經股靜脈注入生理鹽水10 ml/kg，葛根素組在造模前3 h經股靜脈注射葛根素10 ml/kg，于術后4 h頸動脈取血，處死大鼠，測血清磷脂酶 A2（PLA2）、TNF-α、IL-1、IL-6；取左肺，一部分勻漿，測 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6；一部分經 10%甲醛固定做病理組織學檢查。

1.4 檢測指標

PLA2的測定采用酸滴定法[4-5]。TNF-α、IL-1、IL-6 測定采用ELISA法，酶標儀檢測。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 各組血清指標的檢測結果

模型組大鼠血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平均顯著升高，與假手術組比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）；而應用葛根素后可顯著降低血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 各組血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結果（±s）Tab.1 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in serum of each group(±s)

表1 各組血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結果（±s）Tab.1 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in serum of each group(±s)

與假手術組比較，※P<0.01；與模型組比較，△P<0.05Compared with sham-operation group,※P<0.01;compared with model group,△P<0.05

假手術組模型組葛根素組組別 PLA2（U）55.4±14.7104.2±17.5※64.7±19.4△TNF-α（pg/ml）31.4±6.7134.7±15.1※67.3±18.7△IL-1（μg/L）0.28±0.070.92±0.13※0.54±0.18△IL-6（pg/ml）92.2±17.8285.4±46.8※147.6±34.8△

2.2 各組肺組織中血清指標的檢測結果

模型組大鼠肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平均顯著升高，與假手術組比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）；而應用葛根素后可顯著降低血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6水平，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 各組肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結果（±s）Tab.2 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in lung tissues of each group(±s)

表2 各組肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結果（±s）Tab.2 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in lung tissues of each group(±s)

與假手術組比較，※P<0.01；與模型組比較，△P<0.05Compared with sham-operation group,※P<0.01;compared with model group,△P<0.05

假手術組模型組葛根素組組別 PLA2（U/g）37.5±7.658.7±11.4※42.4±15.2△TNF-α（pg/mg）37.5±7.658.7±11.4※42.4±15.2△IL-1（μg/g）0.18±0.090.72±0.17※0.52±0.24△IL-6（pg/mg）67.8±16.8269.4±22.8※158.6±27.3△

2.3 光鏡觀察結果

胰腺:模型組胰腺可見明顯出血，大量中性粒細胞及單核細胞浸潤，大片壞死，壞死較為徹底，腺泡小葉結構消失。葛根素組胰小葉壞死輕微，小葉結構完整，病變以腺泡細胞變性、白細胞浸潤、間質水腫為主。假手術組胰腺結構清晰，腺泡細胞無水腫，無炎癥細胞浸潤，無壞死及出血灶。

肺組織:模型組肺組織病變以廣泛肺泡出血、肺間隔增寬、肺間質淤血、大量炎癥細胞浸潤、支氣管腔內有滲出物、水腫明顯為主。葛根素組肺組織肺泡出血輕微，肺間質無明顯淤血，炎癥細胞浸潤顯著減輕。假手術組肺組織結構完整，肺泡腔內未見水腫液，間質血管無擴張，無中性粒細胞浸潤。

3 討論

雖然SAP肺損傷的機制至今尚未完全清楚，但胰腺酶原的異位激活引發(fā)肺損傷的學說已得到公認。在眾多胰酶中，PLA2與SAP胰腺的自身消化、休克、多臟器功能不全綜合征（MODS）等密切相關[5]。SAP時，血中PLA2活性升高最為明顯，其活性升高越顯著，肺損傷發(fā)生率越高[6]。肺組織中存在PLA2的多種靶細胞，如Ⅱ型肺泡上皮細胞、血管內皮細胞、肺泡巨噬細胞、肺間質巨噬細胞等，這些細胞在PLA2的激活下，大量產生多種細胞因子，而細胞因子在SAP肺損傷的發(fā)病中起著關鍵性的作用，主要的細胞因子有TNF-α、IL-1、IL-6等，其中TNF-α產生較早[7]。TNF-α主要產生于被激活的巨噬細胞，是SAP發(fā)病后較早產生的炎癥細胞因子，起核心作用[8]。TNF-α可激活中性粒細胞，促進多種炎癥介質的釋放，在SAP的發(fā)病及其并發(fā)癥如肺損傷中起重要作用，其升高的程度與胰腺炎癥損傷程度直接相關[9]。TNF-α還能進一步誘導SAP肺損傷的重要指標IL-6的產生，從而產生強大的網絡級聯(lián)式反應，影響SAP肺損傷的進程[10]。IL-6的特點是調節(jié)急性期蛋白的產生，能直接反映各類損害的嚴重程度。SAP時血清IL-6水平明顯升高，其升高水平與胰腺炎的嚴重程度和并發(fā)癥的發(fā)生呈正相關[11]。

本實驗中，模型組血清和肺組織中的PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6均顯著升高，差異有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01），證明造模成功。

葛根素注射液是從豆科植物野葛的根中提取有效成分制成的注射液，主要成分為葛根異黃酮，具有改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、清除氧自由基等功能，主要用于心腦血管疾病的治療[12]。本實驗應用PI對SAP肺損傷大鼠進行治療，結果顯示，肺組織病理形態(tài)改善，血清和肺組織中PLA2活性下降，TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著下降，因而認為葛根素對SAP肺損傷有確切的保護作用。

綜合實驗結果及葛根素的藥理作用可以認為，葛根素通過抗氧化、抑制炎癥、保護內皮細胞、抑制細胞凋亡、清除自由基、拮抗Ca2+通道、改善胰腺微循環(huán)等作用，使SAP肺損傷大鼠血清及肺組織TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著降低，進而減少相關炎癥細胞因子的過度表達，減輕對肺組織的損傷。由此可見，葛根素是一種有效的保護SAP肺損傷的藥物，具有很好的臨床應用價值。

[1]Steer ML.Relationship between pancreatitis and lung diseases[J].Respir Physiol,2001,128(1):13-16.

[2]李衛(wèi)東,劉順英.葛根素清除急性胰腺炎大鼠氧自由基作用的實驗研究[J].江蘇中醫(yī)藥,2007,39(1):55-56.

[3]曹慧玲,韓麗琴,董順福,等.鉻在大鼠急性肺損傷中的變化及葛根素的干預作用[J].實用預防醫(yī)學,2006,13(5):1112-1113.

[4]陳思鋒,吳中立.體液和組織磷脂酶A2簡便快速測定法[J].第二軍醫(yī)大學學報,1989,10(3):254-256.

[5]Aufenanger J,Samman M,Quintel M,et al.Pancreatic phospholipaes A2activity in acute pancreatitis:a prognostic marker for early identification of patients at risk[J].Clin Chem Lab Med,2002,40(3):293-297.

[6]肖毅,黃生福.磷脂酶A2抑制劑氯喹對大鼠急性重癥胰腺炎肺損傷的保護作用[J].中國現代醫(yī)藥雜志,2009,11(9):70-71.

[7]余崇林,孫蔚亮,秦大蓮.TNF-α在重癥胰腺炎大鼠肺組織內的表達及與肺損傷關系的實驗研究[J].解剖與臨床,2006,11(1):24-27.

[8]Yang J,Murphy C,Denham W,et al.Evidence of a central role for p38 map kinase induction of tumor necrosis factor alpha in pancreatitisassociated pulmonary injury[J].Surgery,1999,126(2):216-222.

[9]趙光榮,雷明盛,高緒照.急性壞死性胰腺炎大鼠肺臟TNF-α變化及地塞米松干預作用[J].中國熱帶醫(yī)學,2007,7(10):1777-1779.

[10]裴中美,楊耀嫻,張旭璞.TNF-α、IL-1β、IL-6與急性胰腺炎的相關性研究[J].包頭醫(yī)學院學報,2009,25(4):44-46.

[11]柯超.重癥急性胰腺炎時大鼠血IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α水平及B淋巴細胞百分比的變化[J].醫(yī)學新知雜志,2009,19(2):87-90.

[12]白東義,佟春玲,韓慧,等.葛根素的藥理作用及其臨床應用研究進展[J].江蘇中醫(yī)藥,2009,41(3):76-78.