雛番鴨曲霉菌病的鑒別診斷與藥敏試驗

吳迂夫,諸明濤,許懷正,張 聞

(余姚市舜昌動物醫院,浙江余姚 315400)

余姚市某養殖戶飼養雛番鴨 500羽,10日齡開始出現發病,臨床上以氣喘、咳嗽等呼吸道癥狀為主要特征。先后發病 300多羽,發病率 60%,死亡 100多羽,死亡率 20%。經余姚市某動物醫院剖檢、實驗室診斷為煙曲霉菌引起的雛番鴨曲霉菌病。現總結報告如下。

1 臨床癥狀及剖檢病變

病鴨主要表現為氣喘、咳嗽等呼吸道癥狀,精神不振,食欲減退,絨毛松亂。剖檢病死鴨可見肺瘀血、水腫,有散在粟粒至綠豆大小的黃白色或灰白色結節,質地較硬。氣囊壁上可見大小不等的干酪樣結節或斑塊。氣囊壁明顯增厚,干酪樣斑塊增多。肝臟腫大、瘀血,表面可見黃白色或灰白色結節。腎臟腫大、瘀血。

2 實驗室檢查

2.1 觸片鏡檢 無菌操作采集心、肝、脾、肺和腎組織觸片,革蘭氏染色鏡檢,未見致病菌存在。

2.2 細菌培養 無菌操作采集病死鴨肺、肝、脾、腎組織,分別接種于普通瓊脂、麥康凱和血瓊脂進行細菌培養,置 37℃恒溫箱,培養 24～48h后觀察,未見致病菌生長。

2.3 壓滴標本法檢查 采集結節置載玻片上,由切面刮取干酪樣壞死組織,或由病變組織表面刮取霉菌斑,或用鉑金針鉤取純培養物置載玻片中央,加乳酸酚棉藍染色液或生理鹽水 1～2滴,用大頭針撕開組織塊或菌團,加蓋玻片(注意勿產生氣泡),制成壓滴標本。如果組織碎塊較硬,可改用 20%氫氧化鉀(KOH)溶液 1～2滴,經火焰微微加溫后壓片。可見染成藍色的霉菌菌體。

2.4 分離培養法檢查 取沙保勞(Sabouraud)氏培養基和馬鈴薯培養基 (PDA)培養皿若干個(通常每份樣品各 2個),做好標記。無菌操作接種培養基后,將培養皿放入 37℃恒溫箱內培養 36h,可見菌落出現。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基培養結果:經培養 24 h后,在培養基上形成隆起、放射狀、圓形、白色菌落;培養 48h后,在培養基上形成中間墨綠色,周圍白色的放射狀菌落,菌體背面中間成橘黃色;培養72h后,整個菌體呈墨綠色,菌體背面呈黃褐色;乳酸酚棉藍染色液鏡檢結果可見藍色菌體,放射狀菌體帶有菌絲,符合煙曲霉菌的形態特點。

2.5 染色鏡檢 用無菌手術刀割取小塊單個真菌菌落置載玻片上,用 50%酒精濕潤整個菌落,30s后,蒸餾水細心清洗 3次,稀釋酒精后,用濾紙吸干,直接滴加乳酸酚棉藍染色液數滴,覆蓋整個菌落。2～3min后,蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察,可見分生孢子頭短柱狀,淺藍綠色至暗綠色,菌體壁光滑,近頂端漸粗大,頂囊呈燒瓶狀,綠色,小梗單層,較長布滿頂囊表面 2/3,排列呈木柵狀,無子囊(如圖 1和 2)。

經分離培養和染色鏡檢,確診為煙曲霉菌。

3 藥敏試驗

獸醫臨床應用的抗真菌藥有灰黃霉素、制霉菌素及克霉唑等。制霉菌素抗真菌的體外最低抑菌濃度(MIC),詳見表 1。

表1 制霉菌素抗真菌的體外抑菌濃度(MIC)

4 小結與討論

禽曲霉病可分為急慢性兩類:急性曲霉病的特點通常以幼禽群多發,發病率和死亡率較高;慢性曲霉病則主要發生于成年種禽,尤其是火雞。

引起禽曲霉病的主要病原為煙曲霉和黃曲霉,可能涉及的曲霉還有土曲霉、灰綠曲霉和黑變曲霉等。曲霉分布廣泛,常見于腐爛植物、土壤及谷粒飼料中。

根據病史及流行病學調查,引起雛番鴨氣喘等呼吸道癥狀者大多數為曲霉菌感染所致。實驗室診斷主要應用沙保勞(Sabouraud)氏培養基 (SDA)和馬鈴薯培養基 (PDA)分離真菌,根據生長特點、形態特征及染色鏡檢可見單層,較長,布滿頂囊表面2/3,排列呈木柵狀,綠色,鑒定為煙曲霉菌。絕大多數曲霉菌為空氣污染菌系條件致病菌。臨床上引起家禽感染曲霉菌病,其霉菌結節大部分出現在肺部、氣囊、腸道和腦部,極少出現在內臟器官。

防制本病的關鍵在于加強飼養管理和衛生消毒,消除各種發病誘因。嚴禁使用發霉的墊料和飼料是預防曲霉菌病的主要措施;墊料要保持干燥,尤其是陰雨季節,防止霉菌生長繁殖,采用 1∶2000硫酸銅水溶液代替所有飲水有助于控制疾病的傳播,也可用制霉菌素防治本病,劑量為每 100羽雛鴨每次使用 50IU,每日 2次,連用 2～4d。