HPLC法測定天王補心丸（濃縮丸）中丹酚酸B的含量

孫 裕，王蓮萍，楊玉華

（蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046）

HPLC法測定天王補心丸（濃縮丸）中丹酚酸B的含量

孫 裕，王蓮萍，楊玉華

（蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046）

目的 建立測定天王補心丸（濃縮丸）中丹酚酸B的含量測定方法。方法 HPLC法。色譜柱：phenomenex Luna C18150×4.60 mm，5 μm。流動相：甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）；流速為：1.0 ml/min；檢測波長為270 nm。結(jié)果 丹酚酸 B 在 0.3 μg～3.0 μg呈良好的線性關(guān)系，r為0.9998，平均回收率為96.6%。結(jié)論 本法測定天王補心丸（濃縮丸）中丹酚酸B的含量，方法簡單、快速、結(jié)果準確，重復(fù)性好。

HPLC；天王補心丸（濃縮丸）；丹酚酸B；含量測定

天王補心丸（濃縮丸）原收載于部頒標準中藥成方制劑第8冊[1]，是由當歸、丹參、黨參、茯苓、桔梗等16味中藥組成的復(fù)方制劑，具有滋陰、養(yǎng)血、補心安神的作用。用于心陰不足，心悸健忘，失眠多夢，大便干燥。原標準無含量測定項，為了更好地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，本實驗采用高效液相色譜，測定該制劑中丹酚酸B的含量，方法準確、重復(fù)性好，為該制劑的質(zhì)量控制提供試驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器：SCL-10AVP高效液相色譜儀，日本島津制作所生產(chǎn)；SK250HP超聲清洗器，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司生產(chǎn)。

試劑：乙腈、甲醇為色譜用試劑；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

對照品：丹酚酸B，由中國藥品生物制品檢定所提供，含量測定用，批號：111562-200605。

供試品：天王補心丸，由蘭州佛慈制藥股份有限公司、蘭州太寶制藥有限公司提供。

2 色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱選用phenomenex Luna C18150×4.60 mm，5 μm；流動相：甲醇 - 乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）；檢測波長為270 nm；柱溫30℃；流速為1.0 ml/min；理論板數(shù)按丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于2000。

3 方法與結(jié)果

3.1 對照品溶液的制備[2]

參考（中國藥典2005年版一部）丹參藥材中丹酚酸B含量測定項下的方法，使用75%甲醇作為溶媒。精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75%甲醇制成每1 ml含0.14 mg的溶液，即得。

3.2 檢測波長的選擇

取丹酚酸B對照品溶液，使用二極管陣列檢測器，檢測得到的丹酚酸B紫外全波長掃描圖譜，光譜圖上可見，丹酚酸B在270 nm處有最大吸收，故確定丹酚酸B的檢測波長為270 nm。

丹酚酸B紫外全波長掃描圖譜見圖1。

3.3 供試品溶液的制備[2～3]

圖1 丹酚酸B紫外全波長掃描圖譜

取本品，研細（過3號篩），取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率53 kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

參考（中國藥典2005年版一部）丹參藥材中丹酚酸B含量測定項下的提取方法，結(jié)合本品情況，經(jīng)比較同批次樣品（200818），用75%甲醇溶液加熱回流30 min、加熱回流60 min、超聲20 min、超聲30 min和超聲60 min進行比較，除超聲20 min提取不完全外，其余提取效果相差不大（見表1）。因此選用超聲30 min作為提取方法，操作簡便，快捷。

表1 提取方法的考察

3.4 陰性對照溶液的制備

取不含丹參的處方藥材，按天王補心丸（濃縮丸）制備工藝制成陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

3.5 專屬性試驗

分別精密吸取供試品溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖 2～4）。由圖 2～4 可見，供試品色譜中，在與丹酚酸B對照品相應(yīng)的位置上，有相同保留時間的色譜峰，丹參陰性樣品與丹酚酸B峰相同保留時間處無雜質(zhì)峰干擾。

圖2 丹酚酸B對照品HPLC圖

圖3 天王補心丸（濃縮丸）樣品HPLC圖

圖4 天王補心丸（濃縮丸）陰性樣品HPLC圖

3.6 線性范圍考察

取丹酚酸 B對照品溶液（0.3 mg/ml），精密量取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分別置于5 ml量瓶中，各加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件分別進樣，進樣量為10μl，測定峰面積，結(jié)果見表2。

表2 丹酚醇B峰面積值

3.7 精密度試驗

按上述供試品溶液的制備方法及色譜條件，平行測定同一批天王補心丸（批號：200818）6次，RSD為1%，結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

3.8 穩(wěn)定性試驗

取天王補心丸（濃縮丸）樣品（批號：200818），制備供試品溶液，分別于 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 小時進樣測定，進樣量為10 μl，測定丹酚酸B峰面積，RSD為0.83%，結(jié)果見表4。

表4 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗

3.9 重復(fù)性試驗

取丹酚酸B對照品溶液（0.148 mg/ml），連續(xù)進樣5次，每次進樣量10μl，RSD為0.34%，結(jié)果見表5。試驗表明，本法的重復(fù)性較好，能滿足定量分析要求。

表5 重復(fù)性試驗結(jié)果

3.10 加樣回收試驗

取天王補心丸（批號:200818，丹酚酸B含量為1.7189 mg/g）約1.0 g，共取6份，精密稱定，分別精密加入丹酚酸B對照品溶液（濃度為0.0688 mg/ml）25 ml，搖勻，再分別精密加入75%的甲醇25 ml，按照供試品溶液的制備方法制取，過濾，取續(xù)濾液，按含量測定方法中色譜條件進行測定，按下式計算回收率，回收率（%）=[（測得丹酚酸B的量－樣品中丹酚酸B的量）/添加的丹酚酸B的量]×100%。結(jié)果見表6。

表6 回收率測定結(jié)果

3.11 10批樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果

取10批天王補心丸（濃縮丸）樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依上述色譜條件測定，結(jié)果見表7。

4 討論

4.1 其他變動因素耐用性研究

“中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則”（中國藥典2005年版一部附錄ⅩⅧA）中指出，液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和PH值、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫、流速等。因此，我們針對這些因素進行了方法耐用性研究，結(jié)果表明變動因素的較小差異對其結(jié)果的影響較小。

4.2 流動相的選擇[2～3]

表7 10批產(chǎn)品的檢測結(jié)果

結(jié)合本品實際，實驗采用了①甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；②[甲醇 - 乙腈 - 甲酸（30：10：1）]- 水（38：62）③ 甲醇-乙腈-0.5%甲酸（30：9：61）。研究表明，選擇用③為流動相，使所測成分丹酚酸B與雜質(zhì)達到基線分離，分離度＞1.5，達到分析要求，故選擇用甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）為流動相。用①②流動相不能使分離效果和保留時間同時達到較好的效果。

本法以丹參中有效成分丹酚酸B為含量測定指標，采用高效液相色譜法進行測定，方法簡便準確，重現(xiàn)性好，專屬性強，可有效控制天王補心丸的質(zhì)量。

[1]中華人民共和國藥典會編.《衛(wèi)生部藥品標準》（中藥成方制劑第8冊）[M].

[2]中華人民共和國藥典會編.《中國藥典》[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[3]陳獻，王艷紅，陳琨鳳.HPLC法測定睡安膠囊中丹酚酸B的含量[J].中成藥，2007，29（10）：1549～1551.

G424.31

B

1671-1246（2010）22-0091-03