規?；i場豬瘟免疫狀況調查及仔豬首免日齡的優化

羅 勇，吳 斌，黎作華，黃 剛，梅 力，李 騰，滿曉營，何啟蓋

(華中農業大學農業微生物學國家重點實驗室，湖北武漢430070)

豬瘟(CSF)是豬的一種重要的病毒性傳染病，對養豬業所造成的經濟損失巨大。在豬瘟免疫防制方面，我國成功培育了具有國際領先水平的疫苗，經過多年的努力，該病已基本得到控制。但是近20年來由于諸多因素的存在，使得該病的流行出現許多新特點，表現出非典型性豬瘟、溫和性豬瘟、種豬持續性感染與繁殖障礙及仔豬先天感染與免疫失敗等，給該病的控制帶來新的難題。本研究對湖北省7個規?；N豬場的豬瘟免疫方案進行了比較，并檢測分析了各場各個豬群的抗體水平。為規?；i場制定合理的免疫方案提供了重要參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗地 湖北省規模化種豬場7個，分布于武漢，鄂州，荊州等不同地區。

1.2 試驗材料及診斷試劑 豬瘟正向間接血凝診斷試劑，批號：080416，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所；豬瘟抗體阻斷 ELISA試劑盒，批號：43220-P651，購自美國IDEXX公司；豬瘟兔化弱毒細胞苗(150RID/頭份)，批號：0802014，購自中牧實業股份有限公司。

1.3 免疫情況調查 將豬群分為經產母豬、種公豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬和生長豬，分別從疫苗種類、免疫時間、免疫劑量、免疫途徑幾個方面進行免疫情況統計比較。然后將豬群分為經產母豬、種公豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬、生長豬，并按各豬群5%～8%的比例采血，采用正向間接血凝試驗檢測，分別統計各豬群的免疫合格率(抗體效價≥1∶32)及平均抗體滴度。

1.4 仔豬首免日齡優化 按照從未免疫豬瘟疫苗的每窩仔豬中隨機選取2～4頭的原則，分別挑選7、14、21、28、35日齡的仔豬各40余頭，前腔靜脈采血，分離血清，用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測其豬瘟抗體水平；根據母源抗體監測結果，結合規模化豬場實際情況，對不同批次豬只采取不同時間進行免疫，設置了14、21、28、35日齡免疫豬瘟疫苗組，其豬只數分別為65、79、62頭及70頭。于免疫后1周及2周從每窩仔豬中隨機選取2～4頭共20頭免疫豬進行采血，用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測其豬瘟抗體水平，結果以抗體阻斷率表示。

2 結果

2.1 免疫情況調查

2.1.1 各場免疫方案調查 場A和場B的經產母豬、種公豬及后備母豬均使用脾淋苗，免疫劑量為2～3頭份/次；C、D、E、F場和G 場的經產母豬、種公豬及后備母豬均使用細胞苗，免疫劑量為5頭份/次(即5×150RID)；A 、B、C、D、F 場和G 場的哺乳仔豬、保育仔豬及生長豬均使用細胞苗，超前免疫1～2頭份，首免均為4頭份，二免均為5頭份。7個規?；i場所購買的豬瘟疫苗均為中牧成都實業股份有限公司生產。各場各豬群的免疫時間及免疫次數有較大差異，具體見表1。

表1 各場免疫程序調查結果

2.1.2 各場樣本采集 對7個規?；i場各個豬群共采集了1 650份血樣，具體見表2。低速離心分離血清，分裝保存于-20℃。

表2 各場各豬群抽樣數(份)

2.1.3 各場各個豬群豬瘟免疫效果 本調查通過檢測統計分析了各場各豬群豬瘟免疫合格率及各豬群平均抗體滴度，總體上各場種公豬、后備母豬、經產母豬及哺乳仔豬免疫合格率較高，保育仔豬與生長豬免疫合格率相對較低。平均抗體滴度分析顯示，各場的種公豬、后備母豬、經產母豬均具有較高抗體水平，而在不同的免疫程序下，哺乳仔豬、保育仔豬、生長豬在不同場之間呈現差異，并且整體上免疫合格率與平均抗體滴度成正相關，免疫合格率高平均抗體滴度也較高。然而有的豬群免疫合格率高，而平均抗體滴度卻比較低，相反有的豬群免疫合格率低而平均抗體滴度反而較高。分別見表3、表4。

表3 各場各豬群豬瘟免疫合格率統計 (%)

表4 各場各豬群豬瘟平均抗體滴度結果

2.2 規模化豬場仔豬最佳首免日齡選擇

2.2.1 仔豬母源抗體監測結果 挑選了 7、14、21、28、35日齡未免疫仔豬各40余頭進行前腔靜脈采血，分別檢測其豬瘟抗體，其結果見表5，并根據各日齡抗體水平繪制成母源抗體消長曲線。母源抗體水平隨仔豬日齡的增長而逐漸降低，14日齡至28日齡抗體水平下降最快，35日齡時仍有一定抗體水平，但已有70%的豬只在保護界限(抗體阻斷率為40%)之下，考慮到臨床實際情況，便停止檢測35日齡之后的仔豬豬瘟抗體。

表5 仔豬豬瘟母源抗體檢測結果

2.2.2 不同日齡免疫豬瘟疫苗的效果比較結果各組分別于免疫后1周及2周采血檢測其抗體水平。結果表明，14日齡、21日齡免疫組于免疫1周后，與同期母源抗體相比，抗體水平出現了較大幅度的下降，35日齡免疫組抗體上升較慢；在本試驗中發現28日齡免疫組于免疫1周、2周后與同期母源抗體相比，抗體水平均呈較快上升趨勢，見表6。綜合分析顯示，該規?；i場豬瘟最佳首免日齡為28日齡。

表6 疫苗接種前后平均抗體水平的比較 (%)

3 討論及結語

3.1 規?；i場豬瘟免疫情況調查 調查結果顯示，各場種豬群(后備母豬、經產母豬及種公豬)的免疫方案比較接近，疫苗類型、疫苗生產廠家、免疫劑量、免疫時間等選擇上都比較統一，而抗體檢測結果也表明各場獲得了接近的免疫效果，說明在種豬的豬瘟免疫方案上，各場基本取得了共識。

各場仔豬的豬瘟免疫主要在首免日齡及是否超免上有所不同，總體上看，各場的哺乳仔豬均具有較好的免疫合格率及抗體水平，未免疫仔豬的抗體主要來源于食用初乳時所獲得的母源抗體，在母豬獲得較高的免疫抗體水平時，仔豬就能獲得更高的母源抗體。關于超免對母源抗體水平的影響一直是豬瘟免疫討論的熱點，近年來許多文章報道超免可以避免母源抗體的干擾，對各場中做超免和不做超免的情況，比較其哺乳仔豬的抗體水平，并沒有明顯差異，符合超免可以避免母源抗體的干擾這一觀點。各場仔豬均在60日齡左右進行了加強免疫，生長豬群均表現出較高的抗體水平及免疫合格率。各場保育豬的免疫方案出現較大差異，結合免疫時間分析，我們發現超免不會影響母源抗體，但是可能會致使哺乳仔豬在較長時間內保持較高的抗體水平，因此首免時間應該向后推遲一定時間，這一點與王火平的報道相一致[1]。

3.2 仔豬最佳首免日齡選擇 廣泛的臨床試驗表明，在保證了疫苗有效性的前提下，仔豬首次接種豬瘟疫苗，如何有效克服母源抗體對免疫效果的影響是至關重要的。根據豬瘟免疫情況調查結果，發現保育仔豬是最為薄弱的環節，為了研究并解決這一臨床實際問題，確定規模化豬場仔豬豬瘟免疫最佳首免日齡，本研究在其中一個場(全部仔豬均未做豬瘟超前免疫)跟蹤監測了仔豬母源抗體消退過程，結果表明，仔豬在7日齡時豬瘟母源抗體水平最高，14日齡至21日齡抗體下降最快，35日齡時70%的仔豬已不在保護界限之內，本研究基于臨床實際問題，因此沒有跟蹤35日齡之后仔豬母源抗體水平。李明義等2004年用間接血凝試驗進行了豬瘟抗體消長規律動態研究[2]及李儒曙等2007年用 ELISA(IDEXX)法探究了仔豬CSFV母源抗體消長規律[4]，他們所獲得的結果與本研究所得結果基本相符。然而與蔡葵蒸等2002年采用Dot-ELISA法進行豬瘟疫苗免疫母豬所產仔豬的母源抗體檢測時，得到10日齡仔豬與20日齡仔豬抗體水平無明顯差異[3]，這點與本試驗結果有一定出入，這可能與研究背景及檢測方法有一定關系，本研究所涉及的檢測方法是針對E2基因生產的單抗建立的競爭ELISA法[5]，抗體效價與豬瘟中和抗體呈一定的相關性[6-7]。

根據母源抗體消退規律設置了4個免疫組，分別于14、21、28、35日齡免疫豬瘟疫苗。結果表明，28日齡為最佳首免時間，可以獲得最佳免疫抗體水平。同時可以看出14日齡及21日齡免疫組的仔豬在免疫后1周出現了抗體下降過程，尤其以21日齡免疫組表現明顯，使得仔豬出現較長的免疫空白期，35日齡免疫組免疫1周后抗體水平上升緩慢，2周后才開始較快上升，但是計算整個免疫保護空白期也很長。從本試驗結果可以看出在豬瘟的免疫上，雖然只相差1周，但是帶來的免疫效果卻相差甚遠。因此，當母源抗體較高時接種疫苗會致使一部分疫苗毒被母源抗體中和，達不到抗原刺激閾值，因而常造成免疫效果不佳。免疫太遲會導致免疫空白期產生或加長。故筆者認為結合母源抗體變化規律摸索出適合本場的豬瘟最佳首免時間非常重要。

[1] 王火平.仔豬豬瘟超前免疫的研究[J].福建畜牧獸醫，2005，27(4)：8-9.

[2] 李明義，白志娟，趙雪麗，等.豬瘟抗體消長規律動態研究[J].中國動物檢疫，2004，21(8)：19-21.

[3] 蔡葵蒸，張明林，柴君秀，等.豬瘟疫苗免疫母豬所產仔豬的母源抗體檢測[J].中國獸醫科技，2002，32(2)：27-28.

[4] 李儒曙，李靜，陳活草，等.ELISA法探究仔豬CSFV母源抗體消漲規律[J].上海畜牧獸醫通訊，2007(4)：30-31.

[5] Kosmidou A，Ahl R，Thiel H J，et al.Weiland.Differentiation of classical swine fever virus(CSFV)strains using monoclonal antibodies against structural glycoproteins[J].Veterinary Microbiology ，1995 ，47 ：111-118.

[6] K? nig M ，Leng sfeld T，Pauly T，et al.Classical swine fever virus：independent induction of protective immunity by two structural glycoproteins[J].J Virol，1995，69(10)：6479-6486.

[7] 苗得園.Herdchek豬瘟抗體ELISA試劑盒在豬溫控制中的應用[J].中國獸醫雜志，2006，42(11)：50-51.