HPLC法測(cè)定活血安痛酒中隱丹參酮、丹參酮ⅡA的含量

黃開(kāi)顏，戴 冰，周新蓓

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410007）

活血安痛酒為我院醫(yī)院制劑，已臨床應(yīng)用40余年，療效確切，祛風(fēng)除濕、活血鎮(zhèn)痛，主要用于風(fēng)寒濕痹所致的肢體麻木、腰腿疼痛以及陳舊傷痛；由安痛藤、丹參、赤芍、牛膝、熟地黃等十幾味中藥粉碎成粗粉，白酒浸泡過(guò)濾后矯味而成。目前其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較粗放，尚無(wú)內(nèi)在成分含量測(cè)定，對(duì)其產(chǎn)品質(zhì)量很難進(jìn)行準(zhǔn)確有效地控制；為此，筆者試圖通過(guò)同時(shí)測(cè)定活血安痛酒中脂溶性成分隱丹參酮、丹參酮ⅡA的含量[1-8]，探討更加準(zhǔn)確有效地控制其產(chǎn)品質(zhì)量的方法，更好地保證其質(zhì)量穩(wěn)定性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；分析天平DT-100（北京光學(xué)儀器廠）；不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（北京市醫(yī)療設(shè)備廠）。

1.2 試藥

隱丹參酮對(duì)照品（批號(hào)：110852-200715，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；丹參酮ⅡA對(duì)照品 （批號(hào)：110766-200608，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇（批號(hào)：20100508，色譜純，天津市密歐化學(xué)試劑有限公司）；其余試劑均為分析純，水為注射用水。活血安痛酒為我院制劑室生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-水（80∶20）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，DAD 檢測(cè)器；柱溫：25℃；流速：1 ml/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定隱丹參酮、丹參酮ⅡA對(duì)照品各0.4、0.6 mg，分別置于25 ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取活血安痛酒20 ml，置蒸發(fā)皿中水浴加熱蒸干，分次加甲醇溶解、洗滌，置10 ml棕色量瓶中至刻度，備用。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取缺丹參的活血安痛酒20 ml，照“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液適量，按上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，考察系統(tǒng)適用性。HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取各對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10、20 μl，注入高效液相色譜儀，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：隱丹參酮Y=2 045.20X+1.358 6 （r=0.999 6）； 丹參酮ⅡA Y=2 492.60X-2.865 2 （r=0.999 4），結(jié)果表明隱丹參酮、丹參酮ⅡA的進(jìn)樣量分別在0.032～0.32、0.048～0.48 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液5 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次。其隱丹參酮、丹參酮ⅡA峰面積的RSD分別為1.38%、1.44%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取當(dāng)日配制的供試品溶液，于0、1、2、4、8、24 h分別進(jìn)樣5 ml，測(cè)定峰面積，隱丹參酮RSD=2.30%、丹參酮ⅡARSD=2.36%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣5 ml，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，隱丹參酮、丹參酮ⅡA峰面積的RSD值分別為1.72%、1.85%。

2.1 0加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的活血安痛酒6份，各20 ml作為供試品（內(nèi)含隱丹參酮 11.03 μg/ml、丹參酮ⅡA 16.31 μg/ml），分別置于蒸發(fā)皿中，再精密加入對(duì)照品適量，水浴加熱蒸干，分次加甲醇溶解、洗滌，置10 ml棕色量瓶中至刻度。按“2.3”項(xiàng)下方法操作，結(jié)果隱丹參酮的平均加樣回收率為101.22%，RSD為2.65%；丹參酮ⅡA的平均加樣回收率為98.74%，RSD為2.87%。結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 隱丹參酮回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery test of cryptotanshinone(n=6)

表2 丹參酮ⅡA回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.2 Results of recovery test of tanshinoneⅡA（n=6）

2.1 1樣品含量測(cè)定

取5個(gè)不同批次的供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

筆者曾考察用活血安痛酒作為供試品直接進(jìn)樣，不但基礎(chǔ)吸收大，且對(duì)隱丹參酮色譜峰的出峰有干擾，可能是色素、多糖或其他水溶性成分所致，為此，先精密量取活血安痛酒20 ml置蒸發(fā)皿中，然后水浴蒸干，再分次加甲醇溶解、洗滌，定容至10 ml棕色量瓶中，作為供試品，能很好地測(cè)定隱丹參酮、丹參酮ⅡA的含量。不同批次的活血安痛酒測(cè)得的含量相差比較大，是原料差異還是制劑工藝穩(wěn)定性不夠，有待進(jìn)一步研究，由此可知更應(yīng)深化活血安痛酒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好地保證其質(zhì)量穩(wěn)定性。

表3 不同供試品測(cè)定結(jié)果Tab.3 Results of different samples

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法，以隱丹參酮、丹參酮ⅡA為成分指標(biāo)，對(duì)活血安痛酒進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明該法簡(jiǎn)捷、穩(wěn)定、可靠，可作為有效控制活血安痛酒質(zhì)量的參考指標(biāo)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:70.

[2]孫棣,劉文英,梁彩.HPLC法同時(shí)測(cè)定丹參片中4種有效成分的含量[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,38(1):51-54.

[3]安睿,王新宏,周思麗,等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地丹參藥材中脂溶性成分[J].中成藥,2004,26(4):294-297.

[4]黃喜茹,曹冬,詹文紅.高效液相色譜法測(cè)定冠心丹參滴丸中3種脂溶性成分的含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2006,26(9):1054-1055.

[5]吳燕紅,黃鳴清,李卓明,等.HPLC測(cè)定冠心七味片中丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和對(duì)甲氧基桂皮酸乙酯的含量[J].中成藥,2006,28(4):492-495.

[6]鄭曉珂,董三麗,馮衛(wèi)生.HPLC法測(cè)定丹參中丹參素、丹參酮ⅡA、二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2003,9(6):12-15.

[7]楊允輝,張村.HPLC法測(cè)定活血通脈片中丹參酮ⅡA的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2003,9(6):15-17.

[8]楊廣德,張繼業(yè),張莉,等.丹參中丹參酮ⅡA和隱丹參酮的提取方法研究[J].藥物分析雜志,2006,26(12):1807-1810.