天冬氨酸作為非特異性吸附抑制劑在二氧化鈦選擇性富集磷酸肽中的應用

遲 明, 畢 煒, 盧 莊, 宋麗娜, 賈 偉, 張養軍, 錢小紅, 蔡 耘

(軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所,蛋白質組學國家重點實驗室,北京蛋白質組研究中心,北京102206)

天冬氨酸作為非特異性吸附抑制劑在二氧化鈦選擇性富集磷酸肽中的應用

遲 明, 畢 煒, 盧 莊, 宋麗娜, 賈 偉, 張養軍, 錢小紅, 蔡 耘＊

(軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所,蛋白質組學國家重點實驗室,北京蛋白質組研究中心,北京102206)

二氧化鈦富集法作為目前使用最為廣泛的金屬氧化物富集磷酸肽的方法,在富集過程中常常對富含天冬氨酸和谷氨酸的酸性非磷酸化肽段存在一定的非特異性吸附作用。這些肽段與磷酸化肽段一同被富集,降低了磷酸肽富集的選擇性。傳統方法中使用的非特異性吸附抑制劑常會對質譜的電噴霧離子源造成污染,因而限制了其在液相色譜-質譜聯用(LC-MS)系統中的應用。本研究將天冬氨酸作為一種新型的非特異性吸附抑制劑加入到二氧化鈦富集體系中,并分別對3種和9種標準蛋白質酶切肽段混合物進行富集實驗,同時與添加另一種非特異性吸附抑制劑——谷氨酸以及不添加任何非特異性吸附抑制劑的富集體系進行了富集效果的比較。結果表明,天冬氨酸可以有效地提高二氧化鈦對磷酸肽富集的選擇性。將添加天冬氨酸的二氧化鈦富集體系應用于鼠肝全蛋白質磷酸肽的富集中,同樣取得了很好的效果,表明天冬氨酸在復雜的生物樣本的磷酸肽富集中也同樣具有良好的應用前景。……