Heidenhain偶氮胭脂紅染色在Leydig細(xì)胞瘤診斷中的應(yīng)用

曹永成，劉曉紅，鐘 平，丁吉元，楊 帆，耿 明

卵巢、睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤（leydig cell tumor，LCT）又稱Leydig細(xì)胞瘤，是發(fā)生于性索/性間質(zhì)的少見(jiàn)腫瘤，是由正常發(fā)育和演化的成分間質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成的。Leydig細(xì)胞內(nèi)含Reinke結(jié)晶體，是診斷間質(zhì)細(xì)胞瘤的重要依據(jù)。Reinke結(jié)晶體在HE染色中不能被清楚地顯示出來(lái)。本文介紹一種顯示Reinke結(jié)晶體的染色方法。

1 資料與方法

1.1 病例資料 在筆者所在醫(yī)院就診疑為L(zhǎng)eydig細(xì)胞瘤患者1例。男性，26歲，因婚后不育2年，檢查發(fā)現(xiàn)右睪丸占位1 d入住泌尿外科。查體：無(wú)男性乳腺發(fā)育，無(wú)隱睪病史，雙側(cè)睪丸及附睪大小、形態(tài)、質(zhì)地?zé)o異常，無(wú)結(jié)節(jié)及觸痛，精索無(wú)明顯增粗。B超檢查示：右側(cè)睪丸實(shí)性占位，邊界清，大小約14.5 mm×13.0 mm×15.2 mm。CT檢查示：類圓形異常密度病變，邊緣清晰，最大截面約4.0 cm×3.5 cm，其內(nèi)密度不均，CT值約31～47 Hu，正常睪丸結(jié)構(gòu)顯示不清。實(shí)驗(yàn)室檢查：βhCG0.106 U/L，AFP＜7.0 ng/ml；精液常規(guī)檢查顯示精子數(shù)量極少。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，取材脫水，石蠟包埋，4 μm切片2張，常規(guī)脫蠟至水，分別行HE染色和偶氮胭脂紅染色，光鏡觀察。

1.3 Heidenhain偶氮胭脂紅染色

1.3.1 染液的配制 偶氮胭脂紅B溶液：偶氮胭脂紅B 0.5 g，冰醋酸1 ml，加蒸餾水至100 ml，用前過(guò)濾。苯胺藍(lán)-橙黃G-醋酸溶液：苯胺藍(lán)0.5 g，橙黃 G2g，冰醋酸8ml，加蒸餾水至100 ml，加溫溶解，冷卻，過(guò)濾，用前以蒸餾水做1∶3稀釋。1.3.2 染色方法 ①切片脫蠟至水；②如非Zenker液固定的組織，需經(jīng)2.5%重鉻酸鉀溶于5%醋酸溶液后媒染5 min；③流水沖洗5 min；④用偶氮胭脂紅B染液在70℃下染色40 min；⑤蒸餾水洗；⑥用0.1%苯胺溶于95%乙醇溶液分色50～60 min（也可用0.5%苯胺酒精溶液分色15 min）；⑦用1%醋酸酒精（95%乙醇）溶液使分色停止，需以顯微鏡核查保證僅使細(xì)胞核和紅細(xì)胞著染紅色；⑧用5%磷鎢酸室溫媒染4 h；⑨用稀釋的苯胺藍(lán)-橙黃G-醋酸溶液室溫染色4 h；⑩迅速水洗，脫水、透明，中性樹(shù)膠封片。

2 結(jié) 果

2.1 大體檢查 切除（右側(cè)）睪丸及精索組織，總大小11.0cm×4.0 cm×2.8 cm，切面灰黃灰紅色，于睪丸中央見(jiàn)一灰黃色、質(zhì)軟、界限清楚腫物，面積1.4 cm×1.2 cm；睪丸與鞘膜灶區(qū)粘連；精索長(zhǎng)6 cm，直徑2 cm。

2.2 鏡檢 HE染色：腫瘤細(xì)胞成團(tuán)或條索狀排列，體積中等到較大，多角形，胞質(zhì)豐富嗜酸性，邊界清楚?？梢?jiàn)透明變性及微囊。胞質(zhì)內(nèi)Reinke結(jié)晶不確定。瘤細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，有1~2個(gè)嗜堿性核仁，偶見(jiàn)雙核或多核瘤細(xì)胞，未見(jiàn)核分裂象。腫瘤間質(zhì)為血管豐富的纖維結(jié)締組織。腫瘤組織中未見(jiàn)支持細(xì)胞、顆粒細(xì)胞或其它成分。偶氮胭脂紅染色：Reinke結(jié)晶呈紅色，染色清楚、對(duì)比明顯；細(xì)胞核、紅細(xì)胞呈紅色；膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、嗜堿性顆粒呈深藍(lán)色；粘液呈藍(lán)色；嗜酸性顆粒呈橙紅至紅色（圖1）。

圖1 Heidenhain偶氮胭脂紅染色顯示睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤胞質(zhì)內(nèi)紅色的Reinke結(jié)晶（箭頭所指）（×200）

3 討 論

卵巢間質(zhì)Leydig細(xì)胞瘤組成成分有兩種，一種為梭形或卵圓形細(xì)胞，與纖維瘤或卵泡膜中的一致；另一種細(xì)胞為含Reinke結(jié)晶體的Leydig細(xì)胞。典型的表現(xiàn)為以纖維卵泡膜瘤的成分為主與Leydig細(xì)胞構(gòu)成小結(jié)節(jié)。確診需觀察到Reinke結(jié)晶，否則應(yīng)診斷為黃素化的卵泡膜細(xì)胞瘤。Reinke結(jié)晶體在HE染色中很難顯示，還有取材不準(zhǔn)，有人提出，實(shí)際上間質(zhì)Leydig細(xì)胞瘤可能比文獻(xiàn)報(bào)道的更常見(jiàn)。筆者認(rèn)為偶氮胭脂紅染色能清楚顯示Reinke結(jié)晶體，為明確診斷間質(zhì)Leydig細(xì)胞瘤提供有力證據(jù)。

睪丸Leydig細(xì)胞瘤發(fā)病率低，腫瘤體積較小，患者不伴內(nèi)分泌癥狀時(shí)術(shù)前很難聯(lián)想到此病，B超和CT掃描等影像學(xué)檢查也無(wú)特異性診斷價(jià)值，確診需靠病理組織學(xué)檢查。最常見(jiàn)的形態(tài)是中等到大的多角型細(xì)胞，胞質(zhì)豐富嗜酸，胞界清楚。偶爾瘤細(xì)胞呈梭形或缺少胞質(zhì)；核圓形或橢圓形，核仁明顯，可見(jiàn)雙核或多核細(xì)胞。約30%~40%的患者有Reinke結(jié)晶，多位于胞質(zhì)內(nèi)，也可在核和間質(zhì)組織中。

LCT是一種較少見(jiàn)的性索/性間質(zhì)腫瘤，確診需建立在對(duì)該病的臨床特點(diǎn)、影像學(xué)及病理學(xué)的正確認(rèn)識(shí)上。過(guò)去主要應(yīng)用免疫組化技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)該病的證實(shí)，費(fèi)用高，受影響因素多；Heidenhain偶氮胭脂紅染色結(jié)果穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)便，可明確顯示Reinke結(jié)晶，有利于leydig細(xì)胞瘤的診斷。