母犬發情和適時配種鑒定技術研究現狀

潘壽文 方建強

母犬發情和適時配種鑒定技術研究現狀

潘壽文 方建強

研究現狀

母犬發情周期平均為6個月，發情周期的特點與其它家畜有較大區別。尤其是排卵時間在發情期間的變化范圍較大，因而確定其準確的配種時間比較困難。對此國內外曾有大量研究，Evans等（1933）認為，陰道上皮細胞角質化的變化程度不能說明母犬的排卵時間。Bouchard等 (1991)在正常母犬發情周期中，在檢測陰道上皮細胞角化動態的同時連續進行了血漿孕酮、LH的RIA和ELISA法測定，結果發現，兩者的變化是一致的，接受交配前4 天，角化上皮細胞比例達到80%，LH達到峰值，陰道上皮細胞的動態變化與母犬發情周期中激素內分泌變化呈線性關系。依據這種相關關系進行適時交配，取得了滿意的結果。

Newberry（1952）研究結果得知，當角質上皮細胞達到高峰，缺乏嗜中性白細胞，有核上皮細胞難以看到，紅細胞也很少時，母犬進入發情期，開始排卵。此階段母犬的外部行為表現為接受公犬爬跨或配種，表明已真正進入發情旺期，此時配種受胎率就高。公安部南京警犬研究所董君艷等人2004年研究指出，犬的排卵發生于發情期初期，排卵后發情還持續很長一段時間，這是犬不同于其他家畜的特征。每次排卵數可根據產仔數來推測，排出的卵約89%可受精妊娠，犬的排卵是從允許交配第48小時開始，最遲于第72小時全部結束（12小時之內）。石河子警犬研究所的試驗結果表明，自然發情母犬的陰道上皮細胞角質化變化與Bouchard的報道相似，根據他的試驗結果認為，母犬發情出血時間和“立定反射”以及陰道涂片相結合的發情鑒定，可以用于預測和確定母犬最適交配時間。通過對10頭母犬的陰道細胞檢查發現，在發情前期向發情期過渡時，淺層細胞增多，且逐漸角質化。在接近排卵時，看到的幾乎都是角質化的表皮細胞（80%～90%）。最大角質化程度持續1天～6 天，平均為2.6天，這期間陰道粘膜為白色、干燥、浮冰樣堆積非常明顯，陰道分泌物非常少，主動接近公犬，接受交配。自然發情的中型母犬在發情出血后的第11天～13天角化上皮細胞比例均超過80%，可依據陰道涂片法輔助確定母犬發情的適配時間。Grunnert（1995）還研究指出，陰道上皮的組織學結構受雌激素的影響很大。在間情期，陰道粘膜由2層～3層非角質化的扁平細胞覆蓋。進入發情前期，在雌激素的影響下，細胞層開始增生，且表層細胞逐漸角質化，最大程度的細胞增生可以達到20層。角質化的過程主要發生在發情期。從發情后期開始，陰道上皮逐漸退化。陰道細胞學檢查的目的，即在此基礎上達到認識發情周期的時間、輔助鑒定排卵時間及卵巢病變等 。

目前，國內外常用的確定母犬配種時間的方法主要有以下幾種：根據母犬陰道出血時間、接受交配情況、陰道檢查、陰道細胞學檢查、陰唇的腫脹程度、血液的孕酮測定、通過B超對卵泡發育情況的檢查等。以上方法均很難把握母犬的準確排卵時間，我們通常根據母犬陰道出血的時間，并在發情期增加配種次數的方法解決犬的繁殖問題。國外確定母犬的排卵時間更多的是把陰道細胞學檢查、B超檢查和孕酮檢測方法結合起來，以便較準確地確定母犬的排卵時間。但后兩種方法所需儀器設備值較高，一般的單位部門目前還很難滿足。

研究與展望

一、陰道細胞學變化規律的運用及其意義

綜合國內外研究表明，在母犬繁殖生理正常的情況下，陰道垢物細胞種類及比率，隨不同生理階段而呈明顯的規律性變化，是一個重要的生理指標。可以作為鑒定發情旺期和確定配種適期的重要參考依據。

同時，根據陰道細胞學的變化，還可以診斷母犬發情是否正常。按細胞學的變化規律，可以減少只憑外陰部變化決定輸精的誤差。

當母犬陰道或子宮發生炎癥時，陰道垢物涂片則出現有大量的嗜中性白細胞，當非角質化的上皮細胞有結成團塊時，區別炎癥和發情前期或發情后期是困難的。但是，若嗜中性白細胞和角質化上皮細胞同時出現，則表明有炎癥。因為在正常情況下，這兩種細胞類型不會一起出現。國內外陰道垢物涂片研究結果比較見下表。

表 國內外陰道垢物涂片研究結果比較

二、陰道垢物的采樣及制片應當注意的幾個問題

（一）陰道垢物采樣前，應對母犬外陰部及其采樣器具進行消毒，以防將塵埃和致病菌帶入母犬陰道內。

（二）采樣時，應盡量減少刺激量，器具輕進、輕出，不損傷外陰及陰道壁。

（三）采樣器具插入陰道內10厘米左右處，不得或深或淺，以免引起垢物性狀和細胞成分的改變，影響分析結果；制片應均勻一致，減少細胞堆集，以免影響對細胞的分類計數。

三、適時配種鑒定技術方法比較

外陰檢查方法簡單易行，操作方便，幾乎不需要投入儀器設備，實踐中多用此法，但對操作人員的經驗水平要求較高，一般需要有多年的繁育工作經驗才能較準確把握，但即使如此，因犬的個體差異性和生理機能的不同，該方法的準確性、科學性有待進一步提高。陰道檢查法是在專用光源的幫助下，觀察陰道黏膜顏色及分泌物等。判定母犬發情期的不同時期主要根據陰道黏膜的顏色變化、黏膜的腫脹情況及分泌物的多少。發情期：陰道粘膜顏色趨白色，陰道粘膜腫脹皺褶增生，分泌物少、呈肉水樣，對于確定母犬的發情具有一定的說服力，而且不需投入更多的儀器設備。但此鑒定方法，多憑經驗積累，少量化、主觀性強。陰道細胞學檢查借助普通顯微鏡，觀察陰道分泌物的細胞構成比率。在母犬發情期的前期，有核上皮細胞和嗜中性白細胞幾乎完全消失，紅細胞約有30%左右；大量的主要是角質化細胞，約有80%左右；母犬發情期的后期，大量的仍然是角質化細胞。與前期比較略許見少，紅細胞減少大半，有核上皮細胞逐漸增多，亦見有少量的嗜中性白細胞。其結果具有快速簡便、準確易行等特點，國內目前也多有運用，應該注意，陰道細胞學檢查并不能判定出現促黃體素峰和排卵時間，但據此可推斷周期階段。通過實踐，腹腔鏡檢查法很難實現，因為犬的卵巢不同于其他家畜能看見，多數母犬的卵巢被厚厚的脂肪所包圍，很難看到卵泡的發育情況。在實踐中，此方法是否可行，還有待于在以后的工作中作進一步研究論證。孕酮測定是到目前為止確定母犬排卵時間的范圍最可靠的方法，可以比較準確地確定排卵時間，從而提高配種受胎率。但孕酮測定工作量大、成本較高，多運用于個體研究，實際工作中的運用相對較少。通過口腔液鏡檢來鑒定母犬最佳配種時間的方法，可以在一定程度上提高母犬的受孕率和產仔數，是目前在母犬發情配種鑒定上的一種較為簡便實用易掌握的方法，與平時的經驗判斷基本是相吻合的，可以作為經驗判斷法的補充和確定。B超檢查方法能夠較為準確的確定母犬的發情排卵，但因對B超儀器的質量要求及操作人員的技術要求均很高，因而也較多的運用于個體研究，實際工作中很難普及運用。

（作者單位：公安部南京警犬研究所，210012）

（編輯：李 冰）