人胰腺癌組織中Smad4、VEGF的表達及微血管密度檢測

夏青 于觀貞 張其勝 王慧

·短篇論著·

人胰腺癌組織中Smad4、VEGF的表達及微血管密度檢測

夏青 于觀貞 張其勝 王慧

胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展伴隨著包括抑癌基因DPC4基因(編碼的蛋白為Smad4)在內的許多基因改變，也伴隨著腫瘤血管的不斷生長。本實驗應用免疫組化方法分別檢測胰腺癌組織中的Smad4、VEGF的表達，并計數微血管密度(MVD)，以了解三者的關系。

一、材料與方法

1．組織標本：收集長征醫(yī)院2006年9月至2008年8月手術切除的胰腺癌組織標本82例，男61例，女21例；年齡27～80歲，平均59歲；患者術前均未行放、化療。病理證實腺癌78例，腺鱗癌4例；癌腫位于胰頭58例，體尾部24例；按Edmondson組織學分級，高分化4例，中分化61例，低分化17例。另取經手術以及病理證實的慢性胰腺炎(CP)組織標本8例作為對照。

2．Smad4、VEGF、CD34蛋白檢測：采用免疫組化方法，試劑盒購自北京中山公司。石蠟包埋標本連續(xù)切片4張，1張行HE染色，另3張行免疫組化染色。兔抗人Smad4多抗購自武漢博士德公司，鼠抗人CD34、VEGF單抗購自Santa Cruz公司。Smad4、CD34、VEGF一抗工作濃度分別為1∶100、1∶200、1∶200。PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，已知Smad4、CD34、VEGF陽性的切片作為陽性對照。

Smad4、VEGF染色陽性為胞質呈棕黃色或棕褐色顆粒。每例隨機觀察5個視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞占總細胞數的百分率，<5%為陰性，≥5%為陽性[1]。CD34陽性為內皮細胞呈棕黃色或棕褐色，一個內皮細胞或內皮細胞叢為一個微血管,只要結構不相連,其分支結構也作為一個微血管，而厚壁血管或管徑>50 μm 的血管則排除在外[2]。在血管密度最高處,高倍鏡下計數5個視野的微血管數,其均值表示為MVD。

3．統(tǒng)計學處理：應用SPSS11.5軟件，胰腺癌與CP組織的Smad4、VEGF以及MVD比較，采用兩樣本比較的秩和檢驗；癌組織的Smad4、VEGF以及MVD相關性采用Sparman等級相關分析法，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

二、結果

1．Smad4、VEGF的蛋白表達及MVD：胰腺癌組織Smad4、VEGF的蛋白陽性表達率分別為34.1%、56.1%，MVD為19.00±8.91；CP組織分別為100.0%、12.5%和9.88±4.72。兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.05，圖1)。

2．胰腺癌組織Smad4、VEGF表達和MVD與臨床參數的關系：胰腺癌Smad4、VEGF表達及MVD與年齡、性別、腫瘤部位、病理類型無關；但高、中分化癌的Smad4陽性表達例數顯著高于低分化癌(P值均<0.05)，而高、中分化癌之間無統(tǒng)計學差異， VEGF表達及MVD與腫瘤分化無關(表1)。

圖1胰腺癌組織中Smad4(a)、VEGF(b)和CD34(c)的表達(免疫組化 ×200)

表1胰腺癌Smad4、VEGF的表達以及MVD與臨床參數的關系

臨床指標例數Smad4陽數例數VEGF陽性例數MVD(x±s)性別男61193418.8±8.7女2191219.7±9.6年齡<60歲36132017.8±8.1≥60歲46152619.9±9.5分化高43a114.5±11.2中6124a3619.0±8.9低171919.9±8.6病變部位頭部 58223019.1±8.3體尾部2461618.8±10.4病理類型腺癌 78264519.2±9.0腺鱗癌42114.5±6.7

注：與低分化比較，aP<0.05

3．胰腺癌組織Smad4、VEGF表達及MVD間的相關性: Smad4與VEGF間的Spearman系數為-0.244，P=0.027；Smad4與MVD間的Spearman系數為-0.35，P=0.001； VEGF與MVD間的Spearman系數為0.240，P=0.030。Smad4表達陽性者的VEGF表達率為39.3%，MVD為14.71±5.00，均顯著低于Smad4表達陰性組的64.8%和21.22±9.69(P=0.028和P=0.002)。

討論DPC4基因通常在染色體18q區(qū)發(fā)生改變。在胰腺癌中，DPVC基因的改變率約50%，其中純合子缺失約30%，突變約20%[3-4]。DPC基因的改變導致DPC蛋白的缺失。本組胰腺癌組織Smad4表達率為34.1%，顯著低于CP的100%的表達。

本組結果顯示，胰腺癌組織Smad4的表達與患者年齡、性別、腫瘤部位、病理類型等無關，與鄭建明等[5]的報道基本相同；低分化癌的Smad4表達顯著低于中、高分化癌的結果與Zhan等[6]的報道相同。在胰腺癌組織中，Smad4與VEGF、MVD呈負相關， VEGF與MVD呈正相關，提示胰腺癌的生長離不開微血管的不斷生成以及促血管物質VEGF對血管生成的促進；而Smad4的存在可以抑制胰腺癌微血管生長以及VEGF的表達。與郝強等[7]及Khorana等[8]的結果相符。Khorana等[8]還對部分VEGF陽性以及Smad4陰性患者進行了抗血管生成以及細胞毒作用的輔助治療，患者的生存期較未進行輔助治療者明顯延長，也間接證實血管干預治療在延長胰腺癌患者生存期方面起著重要作用。

[1] Korchynskyi O，Landstrom M，Stoika R，et al.Expression of smad protein in human colorectal cancer.Int J Cancer,1999,82:197-202.

[2] Maeda K,Chung YS,Ogawa Y,et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma.Cancer,1996,77:858-863.

[3] 潘小季，孫維佳.胰腺癌組織中DPC4/Smad4的表達及臨床意義.湘南學院學報(自然科學版),2005,7:1-3.

[4] 李柯,陸星華.Smad4、Smad6、Smad7在胰腺癌中的改變及其相互關系.臨床消化病雜志,2005,4:151-154.

[5] 鄭建明，朱明華，倪燦榮,等.TGF-β/Smads信號通路相關蛋白在胰腺上皮內瘤變和胰腺癌組織中的表達.胰腺病學,2004,4:204-209.

[6] Zhan H,Zhang YC,Hu XM, et al.Loss of DPC4 expression and its correlation with clinicopathological parameters in pancreatic carcinoma.World J Gastroen-terol,2003,9:2764-2767.

[7] 郝強,田建明,左長京,等.胰腺癌組織的平均微血管密度和血管內皮細胞生長因子的表達.第二軍醫(yī)大學學報,2005,26:865-868.

[8] Khorana AA,Hu YC,Ryan CK,et al.Vascular endothelial growth factor and DPC4 predict adjuvant therapy outcomes in resected pancreatic cancer.J Gastrointest Surg,2005,9:903-911.

2009-10-27)

(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.05.023

200081 上海，上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院分院消化內科(夏青、張其勝、王慧)；第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院腫瘤科(于觀貞)

夏青，Email:natureshandong@sina.com