胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表達及臨床病理意義

葉素素 田字彬 魏良洲 趙清喜 孔心涓 李玉軍

·論著·

胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表達及臨床病理意義

葉素素 田字彬 魏良洲 趙清喜 孔心涓 李玉軍

目的觀察RECK和MMP-9在胰腺癌組織中的表達，探討其與胰腺癌臨床病理特征的關系。方法采用免疫組化PV6000法檢測28例胰腺癌及10例正常胰腺組織中RECK、MMP-9的表達，應用SPSS13.0軟件對RECK、MMP-9的表達與腫瘤臨床病理特征的關系進行統計學分析。結果RECK在胰腺癌組織中的陽性表達率為46.4%(13/28)，顯著低于它在正常胰腺組織中90.0%(9/10)的陽性表達率。胰腺癌臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期組的RECK陽性表達率(75.0%，9/12)明顯高于Ⅲ+Ⅳ期組(25.0%，4/16，P<0.05)，無遠處轉移組的RECK陽性表達率(60.0%，12/20)明顯高于有遠處轉移組(12.5%，1/8，P<0.05)。MMP-9在胰腺癌組織中的陽性表達率為75.0%(21/28)，顯著高于正常胰腺組織中的20.0%(2/10)陽性表達率(P<0.01)。胰腺癌臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期組的MMP-9陽性表達率(50.0%，6/12)明顯低于Ⅲ+Ⅳ期組(93.8%，15/16，P<0.05),腫瘤高分化組的MMP-9陽性表達率(33.3%，1/3)明顯低于低分化組(100%，12/12，P<0.01)。胰腺癌組織中RECK與MMP-9的表達呈負相關(r=-0.536，P<0.01)。結論胰腺癌組織中RECK呈低表達，MMP-9呈高表達，RECK、MMP-9聯合檢測可以作為胰腺癌臨床分期評估的指標。

胰腺腫瘤； 基質金屬蛋白酶9； RECK； 免疫組織化學

RECK(reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs, RECK)是1998年發現的一種腫瘤抑制基因，它在轉錄后水平抑制基質金屬蛋白酶的表達與活性，從而抑制腫瘤的侵襲與轉移[1]。基質金屬蛋白酶(matrix metalproteinases,MMPs)是一類能降解細胞外基質及血管基膜的重要蛋白酶類，具有促進腫瘤侵襲及血管形成的作用，其中MMP-9與腫瘤浸潤轉移的關系密切。本實驗采用免疫組化方法檢測RECK和MMP-9在胰腺癌中的表達，探討它們與胰腺癌臨床病理特征的關系。

材料和方法

一、一般材料

選擇青島大學醫學院附屬醫院病理科臨床病理資料齊全的胰腺導管腺癌組織蠟塊標本28例，正常胰腺組織標本10例。所有患者術前均未行放、化療。

二、方法

采用免疫組化染色PV6000方法。兔抗人RECK多克隆抗體(Santa Cruz公司)和兔抗人MMP-9多克隆抗體(北京中杉金橋生物技術有限公司)1∶100稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照。

RECK及MMP-9陽性表達為胞質內出現棕黃色顆粒。在高倍鏡下隨機觀察5個視野，按著色深淺評分：無著色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。按陽性細胞數評分：0～5%，0分；>5%～25%，1分；>25%～50%，2分；>50%，3分。兩項評分相乘，0～1分為-，2～3分為+，4～7分為++，8～12分為+++。

三、統計學處理

應用SPSS13.0進行統計學處理，各指標之間差異采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，RECK和MMP-9之間相關性采用spearman相關分析，以P<0.05為有統計學差異。

結 果

一、RECK的表達及其與臨床病理特征的關系

RECK的表達主要位于細胞質(圖1a)。胰腺癌RECK陽性表達率為46.4%，正常胰腺為90.0%，差異顯著(P<0.05)。RECK表達與胰腺癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、分化程度間無關(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的陽性率明顯高于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05)，無轉移患者的陽性率明顯高于有轉移患者(P<0.05，表1)。

表1RECK、MMP-9在胰腺癌的表達率及與臨床病理特征的關系

病理特征例數RECK陽性例數(%)P值MMP-9陽性例數(%)P值性別 男229(40.9)0.37218(81.8)0.144 女64(66.7)3(50.0)年齡 ≥60155(33.3)0.2559(60.0)0.084 <60138(61.5)12(92.3)腫瘤大小 ≥5cm85(62.5)0.4104(50.0)0.142 <5cm208(40.0)17(85.0)分化程度 高分化32(66.7)0.1331(33.3)0.006 中分化138(61.5)8(61.5) 低分化123(25.0)12(100)淋巴結轉移 有123(25.0)0.06711(91.7)0.184 無1610(62.5)10(62.5)遠處轉移 有81(12.5)0.0388(100)0.075 無2012(60.0)13(65.0)腫瘤分期 Ⅰ+Ⅱ129(75.0)0.0206(50.0)0.023 Ⅲ+Ⅳ164(25.0)15(93.8)腫瘤部位 胰頭189(50.0)0.37015(83.3)0.171 胰體51(20.0)4(80.0) 胰尾53(60.0)2(40.0)

二、MMP-9的表達及其與臨床病理特征的關系

MMP-9也主要表達于腫瘤細胞胞質(圖1b)。胰腺癌MMP-9的陽性表達率為75.0%，正常胰腺為20.0%，差異顯著(P<0.01)。MMP-9的表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、淋巴結轉移及遠處轉移之間無關(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的MMP-9陽性率明顯低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05),高分化腫瘤的陽性率明顯低于低分化者(P<0.01，表1)。胰腺癌組織中RECK和MMP-9的表達呈負相關(r=-0.536，P<0.01)。

圖1RECK(a)和MMP-9(b)在胰腺癌組織中的表達(免疫組化 ×400)

討 論

許多研究表明，RECK在大部分正常組織或正常細胞株中高表達，但在許多腫瘤組織或腫瘤細胞株中低表達甚至不表達，RECK的表達量與腫瘤侵襲力呈負相關。Song等[2]報道，52%的胃癌組織RECK表達缺失，且與腫瘤分期、淋巴結轉移呈負相關。宋國慶等[3]報道，胃癌RECK的表達率為51.9%，并隨腫瘤浸潤深度的加深、淋巴結轉移和遠處轉移的發生、臨床分期的提高以及腫瘤分化程度的降低而降低。Furumoto等[4]報道，肝癌組織RECK高表達者與較好的預后顯著相關。李晟磊等[5]報道，食管癌RECK的表達明顯低于正常食管組織，且與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移密切相關。Masui等[6]報道，胰腺癌組織RECK表達率為52%，明顯低于癌旁組織，且與腫瘤的侵襲能力、預后成反比。本結果顯示，胰腺癌組織RECK表達明顯低于正常胰腺組織。RECK表達與患者TNM分期、遠處轉移呈負相關。提示RECK基因表達的缺失可能與胰腺癌的侵襲轉移有關。

MMPs是降解基膜和細胞外基質的主要酶類，其中MMP-9還可以通過促進新生血管的生成而促進腫瘤的生長和轉移。Nagakawa等[7]報道，32例胰腺癌組織MMP-9的陽性率為50%，有遠處轉移者的陽性率明顯高于無遠處轉移者。Pryczynicz等[8]報道，胰腺癌MMP-9陽性率為36%，且與淋巴結轉移及遠處轉移相關。本結果表明，胰腺癌MMP-9表達顯著高于正常胰腺組織,且與腫瘤分化程度、臨床分期呈正相關。提示MMP-9的表達也與胰腺癌的侵襲過程有關。本組胰腺癌中MMP-9表達與遠處轉移無關，與文獻報道不一致，不排除是由于樣本量較少所致。

研究發現[1]，在惡性細胞株中恢復RECK的表達，除能抑制細胞浸潤外，還伴有MMP-9的分泌減少，提示RECK可能對MMP-9產生負調節作用。本研究結果顯示，RECK和MMP-9在胰腺癌腫瘤組織中的表達呈負相關，提示RECK蛋白可能通過抑制MMP-9表達來發揮抑制胰腺癌的侵襲作用。

[1] Takahashi C，Sheng Z，Horan TP,et al．Regulation of matrix metalloproteinase-9 and inhibition of tumor invasion bv the membrane anchored glycoprotein RECK．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95:13221-13226.

[2] Song SY，Son HJ，Nam E，et al．Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs (RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer．Eur J Cancer，2006，42:101-108.

[3] 宋國慶,王強. RECK，MMP-9及TGF-β1在胃癌組織中的表達及其相互關系.世界華人消化雜志，2007,15:1731-1737.

[4] Furumoto K，Arii S，Mori A，et al．RECK gene expression in hepatocellular carcinoma：correlation with invasion-related clinicopathological factors and its clinical significance．Reverse-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs.Hepatology，2001,33：189-195．

[5] 李晟磊,趙秋民,劉宗文，等.食管鱗癌中RECK和MMP-9蛋白表達相關性及臨床病理意義.世界華人消化雜志，2007，15:1082-1086.

[6] Masui T，Doi R，Koshiba T，et al．RECK expression in pancreatic cancer:its correlation with lower invasiveness and better prognosis．Clin Cancer Res，2003，9:1779-1784.

[7] Nagakawa Y, Aoki T，Kasuya K，et al．Histologic features of venous invasion，expression of Vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9，and the relation with liver metastasis in pancreatic cancer．Pancreas，2002，24:169-178．

[8] Pryczynicz A,Guzinska-Ustymowicz K,Dymicka-Piekarska V,et al.Expression of matrix metalloproteinase 9 in pancreatic ductal carcinoma is associated with tumor metastasis formation.Folia Histochem Cytobiol,2007,45:37-40.

2009-11-06)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionofRECKandMMP-9inpancreaticcanceranditsclinicopathologicalsignificance

YESu-su,TIANZi-bin,WEILiang-zhou,ZHAOQing-xi,KONGXin-juan,LIYu-jun.

DepartmentofGastroenterology,AffiliatedHospital,MedicalCollege,QingdaoUniversity,Qingdao266003,China

Correspondingauthor:TIANZi-bin,Email:tianzb@qyfy.cn

ObjectiveTo investigate the expression of RECK and MMP-9 in pancreatic cancer and to explore the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.MethodsPV6000 immunohistochemical method was used to detect the expression of RECK and MMP-9 in 28 cases of pancreatic cancer and 10 cases of normal pancreatic tissue. All the statistical analyses were performed by using SPSS 13.0 statistical software to determine the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.ResultsThe overall positive rate of RECK espression was 46.43% (13/28) in pancreatic cancer, which was significantly lower than that in normal pancreatic tissue (90%, 9/10). The positive rate of RECK espression in Ⅰ+Ⅱ clinical stage (75.0%,9/12) was significantly higher than that in Ⅲ+Ⅳ stage (25.0%,4/16P<0.05). The positive rate of RECK expression in cases without distant metastases (60.0%,12/60) was significantly higher than that in cases with distant metastasis (12.5%, 1/8,P<0.05). The overall positive rate of MMP-9 was 75% (21/28) in pancreatic cancer, and 20% (2/10) in normal pancreatic tissue. The comparison between these two groups indicated a significant difference (P<0.01). The positive rate of MMP-9 in Ⅰ+Ⅱclinical stage(50.0%,6/12) was significantly lower than that in Ⅲ+Ⅳ stage (93.8,15/16,P<0.05). The positive rate of MMP-9 in well differentiation group(33.3%,1/3) was significantly lower than that in poor differentiation group (100%,12/12,P<0.01). The expression of RECK was negatively correlated with the expression of MMP-9(r=-0.536,P<0.01).ConclusionsRECK is lowly expressed in pancreatic cancer, but MMP-9 is highly expressed. RECK and MMP-9 may serve as important markers in the evaluation of tumor stage.

Pancreatic neoplasms; Matrix metalloproteinase-9; RECK; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.015

266003 青島，青島大學醫學院附屬醫院消化內科

田字彬，Email:tianzb@qyfy.cn