雷公藤制劑抗蛋白尿療效及其對肝臟、腎臟的影響*

吳漢利 孫 偉

1 南京中醫(yī)藥大學(xué)（南京 210029）

2 江蘇省中醫(yī)院（南京 210029）

雷公藤制劑用于治療腎小球腎炎已有30多年歷史，在減少尿蛋白方面，其顯著的臨床療效為廣大學(xué)者所公認(rèn)[1～3]，但其有效活性成分雷公藤甲素同時也是毒性成分，可引起肝臟、生殖系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、胃腸道等毒性反應(yīng)[4]，在一定程度上限制了用藥，影響了治療效果,所以對于雷公藤制劑的減毒增效研究非常重要。本實驗通過阿霉素腎病模型對雷公藤制劑抗蛋白尿療效及安全性進行評價。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級純系SD大鼠，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心。雷至膠囊每粒含雷公藤2g，女貞子1g），購自江蘇省衛(wèi)生醫(yī)藥有限公司，由江蘇省中醫(yī)院制劑室鑒定并進行加工；雷公藤水提物由雷公藤去皮根木質(zhì)部水提而成的，1mL含雷公藤中藥0.8g，由江蘇省中醫(yī)院制劑室鑒定并進行加工；雷公藤多苷片（規(guī)格10mg/片，浙江得恩德制藥有限公司，批準(zhǔn)文號Z33020422）；阿霉素(深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn),規(guī)格10mg/支,批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H44024359）。

1.2 方法 42只大鼠分為正常組（6只）、模型組（6只）、雷公藤多苷組（6只）、雷公藤水提物組（6只）、雷至膠囊低劑量組（6只）、雷至膠囊中劑量組（6只）、雷至膠囊高劑量組（6只）。參照文獻[5]造模方法，采用分次尾靜脈注射阿霉素，除正常組外大鼠，第1日以4 mg/100g體質(zhì)量注射，第7日以2mg/100g體質(zhì)量注射。正常組用同法注射等劑量生理鹽水。第3周開始灌胃，雷至膠囊4粒/kg，按照1mL/100g體質(zhì)量計算藥物濃度。正常組及模型組按1mL/100g體質(zhì)量灌胃生理鹽水。

1.3 觀察指標(biāo) （1）血、尿標(biāo)本。血標(biāo)本采用玻璃毛細(xì)管(直徑1.00mm）經(jīng)眶后靜脈叢取血,6h內(nèi)離心，分離血清,置于－20℃冰箱保存待測。尿標(biāo)本采用金屬代謝籠收集,大鼠禁食、不禁水,收集大鼠注射阿霉素前及第1次注射阿霉素后14、21、28、35d的24h尿液,記錄尿量后取1mL，15000r/min離心10min,去除沉渣后分裝，置于－20℃冰箱保存待測。尿蛋白、NAG酶、血清尿素氮、血肌酐及血清白蛋白、膽固醇、甘油三酯、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶采用Olympus全自動生化分析儀（型號Au2700）檢測。（2）腎臟、肝臟病理標(biāo)本。大鼠放血處死后，主動脈灌注生理鹽水,取腹正中切口,暴露并切取雙側(cè)腎臟。腎臟冠狀面取組織，肝臟取左下緣，甲醛固定石蠟包埋組織切片,厚度為2μm,用于PAS染色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.5。計量資料以（）表示,采用 t檢驗。

!結(jié)果

2.1 各組大鼠不同時間點24h尿蛋白變化比較 見表1。第1次注射阿霉素后7d，模型組尿蛋白無明顯變化。14d時模型組大鼠24h尿蛋白顯著高于正常組。21d模型組尿蛋白繼續(xù)上升，直到35d；與模型組、雷公藤多苷組、雷公藤水提物組相比，雷至膠囊組28、35d尿蛋白均明顯降低(P ＜0.05）。

2.2 各組大鼠35d血生化改變 見表2。35d時，模型組血白蛋白明顯降低，甘油三酯、膽固醇明顯升高，與模型組比較各治療組白蛋白、甘油三酯、膽固醇均明顯改善（P＜0.01）；雷公藤多苷組轉(zhuǎn)氨酶水平明顯高于其他組（P＜0.01），雷至膠囊各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。血清尿素氮和肌酐各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 各組大鼠腎臟病理變化 見圖1。正常組大鼠腎小球系膜區(qū)無增生無沉積物,基底膜未見病變，毛細(xì)血管開放較好；模型組大鼠可見彌散性腎小球系膜區(qū)增寬,系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)增生,毛細(xì)血管腔狹窄；雷至膠囊組病變不同程度減輕。

2.4 各組大鼠肝臟光鏡PAS變化 見圖2。正常組、模型組、雷至膠囊低劑量組、雷至膠囊中劑量組、雷至膠囊組高劑量組肝臟結(jié)構(gòu)無明顯變化，雷公藤多苷組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，基質(zhì)明顯增多。

表1 各組大鼠不同時間點24h尿蛋白尿定量分析結(jié)果（mg/24h,）

表1 各組大鼠不同時間點24h尿蛋白尿定量分析結(jié)果（mg/24h,）

與正常組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與雷公藤多苷組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01；與雷公藤水提物組比較，?P＜0.05，??P ＜ 0.01。下同

組 別正常組模型組雷公藤多苷組雷公藤水提物組雷至膠囊低劑量組雷至膠囊中劑量組雷至膠囊高劑量組n6666666造模前3.62±2.43 3.62±0.76 3.60±2.42 3.88±1.38 2.86±0.67 2.94±2.28 2.96±2.29 7d 3.57±0.73 3.57±1.33 2.60±0.71 2.81±0.76 3.23±1.14 3.13±1.14 2.98±0.68 14d 6.63±4.52 22.98±15.44*22.47±12.25*22.02±10.76*21.82±6.66*21.50±9.43*26.22±16.78*21d 5.55±2.66 363.38±56.18**57.35±18.36**△△75.90±26.51**△△41.3±13.66**△△29.50±10.97△△31.80±17.32△△28d 5.50 ±3.20△△※※354.43±47.49**※※97.00±37.56**△△76.52±25.93**△△46.57±26.48*△※?38.22±18.99*△※?25.62±14.86*△※?35d 6.70±1.19△△※※414.03±44.18**※※133.65±44.7**△△100.52±22.26**△△61.67±32.08**△※?62.18±35.72**△※?55.57±17.19*△※?

表2 各組大鼠35d血生化改變

圖1 大鼠腎臟病理圖片PAS

圖2 大鼠肝臟病理圖片PAS

3 討論

雷公藤具有活血化瘀、清熱解毒、消腫散結(jié)、殺蟲止血等功效。自20世紀(jì)80年代雷公藤被用于腎小球疾病的治療后[6]，許多動物實驗和臨床研究都證明其具有較強的抗蛋白尿作用，尤其在微小病變、局灶節(jié)段性腎小球硬化和膜性腎病患者的治療中顯示了其獨特的功效[1～3]。但大量研究證實雷公藤制劑常可引起肝臟、生殖系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、胃腸道等毒性反應(yīng)[5]。韋登明等[7]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤急性中毒對肝細(xì)胞有輕度毒性作用,有時可見肝細(xì)胞輕度脂肪變性,偶見灶性壞死。楊小紅等[8]報道雷公藤可導(dǎo)致肝損害,出現(xiàn)黃疸、肝腫大、肝功能異常等情況。故而對雷公藤制劑的減毒增效研究非常重要。

本實驗我們采用分次尾靜脈注射建立阿霉素腎病模型，發(fā)現(xiàn)蛋白尿1周后開始升高，2周后急增，后逐漸升高，直到實驗結(jié)束。而雷公藤制劑組具有強大抗蛋白尿作用，與同時期模型組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；不同雷公藤制劑相比，雷至膠囊抗蛋白尿效果明顯優(yōu)于雷公藤多苷和雷公藤水提物。從血生化方面也證實雷至膠囊在提高血清白蛋白、降血脂效果方面優(yōu)于雷公藤多苷。腎臟病理也證實雷至膠囊組腎小球系膜基質(zhì)沉積最輕。研究還發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷可引起轉(zhuǎn)氨酶升高，肝臟病理證實雷公藤多苷組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂模糊，基質(zhì)明顯增多，提示雷至膠囊組在降尿蛋白、血脂，升高血清白蛋白、保護肝臟和腎臟方面優(yōu)于雷公藤多苷組，且降尿蛋白也優(yōu)于雷公藤水提物，但不同劑量雷至膠囊組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明小劑量雷至膠囊就可以達到治療目的。因此從療效或藥物安全性方面雷至膠囊均優(yōu)于其他雷公藤制劑，這體現(xiàn)了減毒增效的效果，同時用小劑量雷至膠囊即可達到治療效果，故有廣泛的應(yīng)用前景。

[1]黎磊石,劉志紅.雷公藤在腎臟病領(lǐng)域應(yīng)用的前景[J].腎臟病與透析腎移植雜志,1997,6(3）：203～204.

[2]黎磊石,劉志紅.應(yīng)用雷公藤治療腎炎二十五載的體會[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2003,12(3）：246～247.

[3]胡偉新,唐政,姚小丹,等.雙倍劑量雷公藤多甙治療原發(fā)性腎病綜合征的近期療效[J].腎臟病與透析腎移植雜志,1997,6(3）：210～214.

[4]Pavenstadt H，Kriz W.Kretzler M.Cell biology of the glomerular pidicyte[J].Physiol Re，2003，83：253 ～ 307.

[5]魯斌，李新民，馬融.對改造的阿霉素腎病模型的評價[J].實驗動物科學(xué)與管理,1999,16(3）：5～9.

[6]黎磊石,張訓(xùn),陳光永,等.雷公藤治療腎小球腎炎的臨床研究[J].中華內(nèi)科雜志,1981,20(4）：216～220.

[7]韋登明,黃光照.雷公藤及其單體的藥理和毒理病理學(xué)研究進展[J].中藥材,2003,26(12）：894～897.

[8]楊小紅,張偉程.雷公藤制劑的應(yīng)用及其副作用[J].中醫(yī)藥臨床雜志,2004,16(5）：511 ～512.