防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠氣道炎性損傷的預防作用

邢向暉, 陳魯, 宋惠霄

支氣管哮喘是由多種炎性細胞特別是肥大細胞、嗜酸性粒細胞(eosinophils,EOS)和T淋巴細胞參與,并有50多種炎癥介質和25種以上的細胞因子相互作用的一種氣道慢性炎癥。氣道炎癥是哮喘患兒氣道可逆性阻塞和氣道高反應性的重要決定因素。而血清白細胞介素4(interleukin,IL- 4)、血液中EOS和IgE在哮喘發病過程中起重要作用。為探討中醫藥治療哮喘緩解期的機制,筆者觀察了防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠血清IL- 4、EOS和IgE的影響,以期從實驗方面對兒童哮喘緩解期的防治方藥進行系統觀察與探討,尋求兒童哮喘緩解期的有效防治藥物。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇健康Wistar大鼠40只,體質量(200±10)g,雌雄各半,由山東大學實驗動物中心提供,符合一級實驗動物標準。

1.2 試劑與藥品 (1)大鼠IL 4、IgE ELISA試劑盒,購于晶美生物工程(北京)有限公司;(2)卵白蛋白粉劑,購于濟南科瑞生物科技有限公司(Sigma公司分裝,每瓶10 g);(3)酮替芬,購于江蘇天士力帝益藥業有限公司(每片1 mg,批號:20050521);(4)固本咳喘片,購于臺州南峰藥業有限公司(每片0.4 g,批號:060305);(5)防哮顆粒,由山東中醫藥大學藥學院藥劑教研室按正交試驗法篩選工藝,以最佳流程制備;組成 :黃芪、白術、防風、陳皮、清半夏、熟地黃、仙靈脾、黃芩、蛤蚧、五味子、丹參;生藥購于山東中醫藥大學附屬醫院藥房;大鼠灌胃藥以其制成濃縮液,每毫升含生藥約2 g;(7)其他:生理鹽水、0.4%戊巴比妥鈉。

1.3 實驗儀器 (1)402型超聲霧化器(上海四菱醫療器械廠);(2)HW1型電熱恒溫水箱(北京醫療設備廠);(3)B80型自動平衡離心機(白洋離心機廠);(4)JA2003型電子稱(上海恒平科學儀器有限公司);(5)Stat Fax- 2100型酶標儀(美國AWARENESS公司)。

1.4 藥物配制 (1)固本咳喘片研磨成末,用生理鹽水配成0.02 g/L;(2)酮替芬研磨成末,用生理鹽水配成0.02 g/L;(3)防哮顆粒濃縮液2 g/mL。

1.5 實驗方法 將40只大鼠按隨機數字表法分成5組,每組8只,雌雄各半,5組分別為空白對照組、模型對照組、中藥治療組、中藥對照組、西藥對照組,常規飼養1周后致敏。致敏用抗原液由卵白蛋白加生理鹽水配成10%卵白蛋白溶液。除空白對照組外,其余各組大鼠常規皮膚消毒后腹腔注射10%卵白蛋白生理鹽水1 mL致敏,常規飼養1周后放入密閉的動物造模霧室內,用卵白蛋白與生理鹽水配成1%的液體,加入超聲霧化器霧化進行大鼠哮喘誘發實驗,記錄大鼠喘息時的癥狀、體征(大鼠出現躁動不安、呼吸加速、腹部內凹等呼吸困難表現說明誘發哮喘成功);每日誘發哮喘30 min,連續誘發14 d。誘發實驗結束后常規飼養1周,開始灌胃。根據“常用動物與人體面積比值”計算大鼠灌胃藥量(D2=D1/R1×R2)[1]。中藥治療組大鼠防哮顆粒用量9 g/(kg·d),即0.9 mL;中藥對照組大鼠固本咳喘片用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;西藥對照組大鼠酮替芬用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;空白對照組、模型對照組大鼠以等量生理鹽水代替,即0.9 mL/(kg·d)。共灌胃30 d。灌胃結束后用0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(10 mL/kg)大鼠,腹主動脈取血,以3 000 r/min離心5 min,取血清待用。

1.6 觀測指標 (1)IL- 4水平測定;(2)EOS計數測定;(3)IgE水平測定。采用ELISA法檢測血清中、IgE(具體步驟按試劑說明進行操作)。EOS計數的檢測,麻醉、取血同上,取一滴血滴入肝素抗凝管,按常規方法進行。

1.7 統計學方法 采用SPSS 12.0軟件進行統計處理,計量資料行t檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數的影響 見表1。

表1 各組哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數的比較(±s,n=8)

表1 各組哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數的比較(±s,n=8)

注:與空白對照組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型對照組比較,cP<0.05,dP<0.01;與中藥對照組比較,eP<0.05,fP<0.01;與西藥對照組比較,gP<0.01。

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3 討論

《景岳全書·喘促》云:“未發時以扶正氣為主,既發時以攻邪氣為主。”《醫宗必讀·喘》:“治實者攻之即效,無所難也。治虛者補之,未必即效,須悠久成功,其間轉折進退,良非易也。”哮喘病在肺,源在脾,根在腎。緩解期肺、脾、腎三臟不足,兼有痰濁、瘀血。根據“急則治標,緩則治本”的治療原則,確立以補肺、腎為主,補脾為輔,佐以化痰、活血的治療大法。方中黃芪補肺氣、益衛氣;蛤蚧補肺氣、納腎氣,兩藥合用外御衛表,內補肺腎共為君藥。五味子上斂肺,下滋腎,助芪蛤補肺益腎澀精,為臣藥。熟地、仙靈脾補腎陽、滋腎陰,以培先天;白術、陳皮、清半夏補益脾肺,理氣化痰,以滋后天,共為佐助之品。黃芩清伏痰蘊郁之熱,且防芪、蛤、靈、夏辛燥、溫熱太過,為佐制之品。丹參活血行血,化瘀走里;防風辛散透達,助芪御表,共為使藥。諸藥合用,共有補腎固本,益氣固表,祛痰通絡,虛實并治,標本兼顧之效。筆者經臨床應用表明:防哮顆粒可改善哮喘患兒的體質狀態,提高機體免疫功能及肺功能,減少感冒次數及哮喘發作次數,降低氣道反應性,從而達到改善和防治本病的目的。

[1]高治平,胡弼.現代實用醫學機能實驗技術與方法[M].長沙:湖南科學技術出版社,2004:18.

[2]劉文艷,汪杏巧,張天壽.過敏性哮喘青春期緩解者外因IL- 4、活性和Ig E的變化[J].臨床內科雜志,2001,18(2):131.

[3]劉憲文,章世貴,李千賀.哮喘患者花粉皮試和血清總IgE、IL- 4表達及激素干預的影響[J].山東醫藥,2001,41(6):20.