高效液相色譜法同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量

王 偉,許 祺,杜秀芳,王春英,劉西哲,張小幸

(河北醫科大學藥學院,河北石家莊 050017)

高效液相色譜法同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量

王 偉,許 祺,杜秀芳,王春英,劉西哲,張小幸

(河北醫科大學藥學院,河北石家莊 050017)

建立了同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。采用高效液相色譜法(HPLC),迪馬DiamonsilTMC18色譜柱(4.5 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水為流動相,梯度洗脫,檢測波長為350 nm,流速為1.0 m L/min,柱溫為30℃。淫羊藿苷質量濃度為1.07～9.63μg/m L范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.999 5);平均加樣回收率為102.2%,RSD為2.7%。二苯乙烯苷質量濃度為10～90μg/m L時與峰面積線性關系良好(r=0.999 8);平均加樣回收率為99.72%,RSD為2.3%。該方法精密度高,重復性好,可用于安神補腦液的質量控制。

安神補腦液;淫羊藿苷;二苯乙烯苷;高效液相色譜法

安神補腦液是由鹿茸、何首烏、干姜、甘草、大棗、淫羊藿苷6味中藥和維生素B1組成的復方制劑,具有生精補髓、增強腦力的功效,用于神經衰弱、失眠、健忘、頭痛等癥的治療[1-2]。《中華人民共和國藥典》(2005年版)以淫羊藿苷含量作為安神補腦液的定量質控指標,以二苯乙烯苷作為定性鑒別指標[3]。相關文獻[4-6]也主要是以淫羊藿苷、大黃素、維生素B1等單一化學成分作為該藥的質控指標。為了能更有效地對安神補腦液進行質量控制,筆者把單一指標定量控制提高到同時控制多個有效成分的含量,建立了用HPLC同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。

1 儀器與材料

Agilent Technologies 1200 series高效液相色譜儀,DAD檢測器。

淫羊藿苷和二苯乙烯苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號分別為0737-9709和0844-200003,供含量測定用);乙腈(色譜純,美國迪馬公司提供);安神補腦液(吉林敖東延邊藥業股份有限公司提供,批號分別為0808113,0806125,0902326);水為二次重蒸水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

迪馬DiamonsilTMC18色譜柱(4.5 mm×250 mm,5μm);乙腈-水為流動相,梯度洗脫(0～10 m in,乙腈體積分數為30%～50%;10～11 min,乙腈體積分數為50%～80%;11～15 min,乙腈體積分數為80%～100%;15～20 min,乙腈體積分數為100%);流速為1.0 m L/min;檢測波長為350 nm;柱溫為30℃;進樣量為25μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷和二苯乙烯苷對照品適量,加甲醇制成質量濃度分別為10.74μg/m L和100μg/m L的溶液,即得。

2.2.2 樣品溶液的制備

精密量取本品1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至10 mL刻度線,搖勻,離心(12 000 r/min)20 min,取上清液,即得。

2.3 專屬性試驗

按處方量分別制備不含淫羊藿苷和何首烏藥材的陰性樣品,按2.2.2所述方法制成淫羊藿苷陰性對照溶液和何首烏陰性對照溶液進行測定。結果表明,在淫羊藿苷和二苯乙烯苷相應的保留時間范圍內無干擾色譜峰出現。HPLC色譜圖見圖1。

2.4 線性關系

精密量取淫羊藿苷和二苯乙烯苷對照品溶液適量,加甲醇制成含淫羊藿苷質量濃度分別為1.07,3. 21,5.37,7.49,9.63μg/m L及二苯乙烯苷質量濃度分別為10,30,50,70,90μg/m L的混合對照品溶液,搖勻。在上述色譜條件下,分別進行測定,記錄色譜圖,以對照品質量濃度與其對應的峰面積進行線性回歸。淫羊藿苷的回歸方程為y=23 934 x+ 1.975 2,r=0.999 5,表明淫羊藿苷在1.07～9.63 μg/m L范圍內與峰面積的線性關系良好;二苯乙烯苷的回歸方程為y=15 149x+131.7,r=0.999 8,表明二苯乙烯苷在10～90μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 回收率試驗

精密量取含淫羊藿苷、二苯乙烯苷質量濃度分別為62.2μg/m L和388μg/mL的樣品(批號為0808113)0.5 mL,置于10 mL量瓶中,分別加入10.74μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液3.0 mL及100μg/mL的二苯乙烯苷對照品溶液2.0 m L。加甲醇稀釋到刻度,搖勻,離心分離(12 000 r/m in)20 m in。取上清液進行測定,平行測定6次,計算加樣回收率。淫羊藿苷的平均加樣回收率為102.2%,RSD值為2.7%;二苯乙烯苷的平均加樣回收率為99.72%,RSD值為2.3%。

A—淫羊藿苷和二苯乙烯苷混合溶液;B—樣品溶液;C—樣品溶液加淫羊藿苷和二苯乙烯苷;D—淫羊藿苷陰性對照溶液;E—何首烏陰性對照溶液;1—二苯乙烯苷;2—淫羊藿苷

2.6 精密度試驗

取同一樣品溶液,連續進樣6次,測得淫羊藿苷和二苯乙烯苷峰面積的RSD值分別為0.3%和0.4%。

2.7 重復性試驗

取同一批(批號為0808113)樣品,按2.2.2所述方法平行制備6份溶液,測得峰面積,淫羊藿苷和二苯乙烯苷質量濃度的RSD值分別為0.6%和0.9%。

2.8 穩定性試驗

按2.2.2所述方法制備樣品溶液,分別放置0,1,2,4,6,8 h后進行測定。計算得淫羊藿苷和二苯乙烯苷質量濃度的RSD值分別為1.1%和1.4%。結果表明,淫羊藿苷和二苯乙烯苷在樣品溶液中放置8 h穩定。

3 樣品測定

取安神補腦液樣品3批(批號為0808113,0806125,0902326),分別計算樣品中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質量濃度。結果見表1。

表1 淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質量濃度(n=3)Tab.1 Contents of icariin and stilbene glycoside(n=3)

4 討 論

測定波長選擇時發現,淫羊藿苷和二苯乙烯苷的λmax分別在260 nm和320 nm處,但是在260 nm和320 nm下的色譜圖中二者對應的保留時間處均有干擾峰存在。試驗表明,在350 nm處2種組分均有良好吸收,且相應在保留時間處無雜質峰出現,故選擇在350 nm處同時測定淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質量濃度。

樣品前處理采用直接甲醇稀釋、離心后測定的方法,避免了有可能使待測成分造成損失的提取和濃縮操作,簡化了樣品處理過程,方便快速。結果表明,該方法靈敏度高,重現性好,能準確測定安神補腦液中二苯乙烯苷和淫羊藿苷的質量濃度,可用于評價該制劑的質量。

[1] 魏海峰,葉翠飛,李春陽,等.安神補腦液對睡眠剝奪模型大鼠學習記憶及腦源性神經營養因子表達的影響[J].中國臨床藥理學與治療學(Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics),2006,11(11):1 230-1 232.

[2] 溫富春,許家潔,王玉紅,等.安神補腦液對小鼠學習記憶能力及腦內蛋白質合成的影響[J].中國中醫藥信息雜志(Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine),2007,14(8):30-31.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫藥科技出版社,2005.

[4] 馮勝民,朱山寅.RP-HPLC測定安神補腦液中淫羊藿苷的含量[J].中國新藥雜志(Chinese New Drugs Journal),2006,15(7):544-575.

[5] 王傳祥,姜文凱,魏年美.安神補腦液中大黃素含量測定[J].山東醫藥工業(Shandong Medical Industry),2003,22(3):24-25.

[6] 梁麗梅,龐小雄.固相萃取-高效液相色譜法測定安神補腦液中維生素B1的含量[J].廣東藥學院學報(Academic Journal of Guangdong College of Pharmacy),2006,22(2):149-173.

[7] 吳雪萍,孫鳳霞,蘇為科,等.截短側耳素的HPLC測定[J].河北科技大學學報(Journal of Hebei University of Science and Technology), 2008,29(1):30-32.

[8] 武 彤,李朝陽,李巧玲,等.三唑類手性農藥高效液相色譜分離的研究[J].河北科技大學學報(Journal of Hebei University of Science and Technology),2008,29(4):279-291.

Determination of icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye by HPLC

WANGWei,XU Qi,DU Xiu-fang,WANG Chun-ying,L IU Xi-zhe,ZHANG Xiao-xing
(School of Pharmacy,Hebei Medical University,Shijiazhuang Hebei 050017,China)

The method fo r simultaneously determining icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye was established.The method is based on the HPLC separation w ith DAD detection.The chromatography analysis was performed on D IKMA DiamonsilTMC18column(4.5 mm×250 mm,5μm)by gradient elution w ith acetonitrile and water at a flow-rate of 1.0 mL· min-1.Detection was done by spectrophotometry at 350 nm and the column temperature was 30℃.The linear range of icariin was 1.07～9.63μg·m L-1(r=0.999 5),and themean recovery was102.2%w ith RSD of 2.7%.The linear rangeof stilbene glycoside was 10～90μg·mL-1(r=0.999 8),and themean recovery was 99.72%w ith RSD of 2.3%.Themethod was accurate,reliable w ith good repeatability and can be used fo r the quality control of anshenbunaoye.

anshenbunaoye;icariin;stilbene glycoside;HPLC

R917

A

1008-1542(2010)05-0403-03

2010-04-26;

2010-05-27;責任編輯:張士瑩

河北省教育廳自然科學基金資助項目(2009147)

王 偉(1972-),女,河北新河人,高級實驗師,主要從事藥物分析方面的研究。

王春英副教授,E-mail:wangcy730301@163.com