微波在病理技術(shù)中的應(yīng)用

[摘要] 目的 探討微波在病理特殊染色中的應(yīng)用。方法 對(duì)我院200例各類標(biāo)本利用微波染色法進(jìn)行病理染色，分析其結(jié)果。結(jié)果 經(jīng)過微波進(jìn)行脫水后組織切片具有組織結(jié)構(gòu)清晰，切片厚薄、染色均勻、背景無氣泡、顏色鮮艷、細(xì)胞變形小、切片完整等特點(diǎn)，對(duì)比度好，無脫片現(xiàn)象，并可明顯縮短整個(gè)制片過程。甲級(jí)片率在50%以上，沒有丙級(jí)切片。結(jié)論 本方法節(jié)省時(shí)間、染色效果穩(wěn)定可靠、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，適合在病理科，尤其是基層單位開展。

[關(guān)鍵詞] 微波; 病理; 特殊染色

[中圖分類號(hào)] R454 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2010)09-57-02

Application of Microwave in Pathology

XIE Shoucheng

Meizhou City People's Hospital，Meizhou 514031，China

[Abstract] ObjectiveTo discuss microwave in the application of special staining in pathology. MethodsWe used the microwave technology to stain 200 cases of pathological various types of specimens and analyzed the results. ResultsAfter microwave dehydration，the tissue sections could show their characteristics of clear organizational structures，slice thickness，dyeing uniformity，background-free bubbles，color，bright，small cell deformation，slice integrity，no off-chip phenomenon，etc. and the microwave technique significantly shortened the entire production process. Grade A slice rate was 50% or more，with no Grade C slices. ConclusionThis method has the advantages of saving time，stable and reliable dyeing effect，easy operation and suitable application for department of pathology，particularly suitable for grass-roots units.

[Key words]Microwave; Pathology; Special staining

隨著臨床對(duì)病理報(bào)告及時(shí)性的要求越來越高，目前有許多病理實(shí)驗(yàn)室在嘗試將病理報(bào)告周期由原來3d縮短到1d。傳統(tǒng)的化學(xué)染色費(fèi)時(shí)、脫片率高，尤其一部分抗原暴露不佳者，染色效果不穩(wěn)定。以上這些都大大影響臨床病理診斷的準(zhǔn)確率。微波輻射技術(shù)在組織病理學(xué)上的應(yīng)用已越來越廣泛，它與常規(guī)方法比較，操作簡(jiǎn)便、省時(shí)快速，為越來越多的病理學(xué)工作者所青睞。我院于2005年6月～2008年6月利用微波在病理特殊染色中應(yīng)用，取得了良好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

提取我院各類標(biāo)本200例，涉及的組織部位有皮膚、肌肉、淋巴結(jié)、肺、胃、腸、肝、腎、乳腺、宮頸、子宮內(nèi)膜、子宮肌瘤、輸卵管、卵巢等各類組織，組織塊大小可為2.5cm×1.5cm×0.2cm、 2.0cm×1.5cm×0.2cm或1.0cm×1.0cm×0.2cm，鈣化組織取材時(shí)應(yīng)避開。

1.2 儀器及方法

選用微波爐為YWY781B型，輸出功率為80～700W，分5檔，實(shí)驗(yàn)采用中高檔。標(biāo)本經(jīng):(1)固定:固定-脫水混合液(40%甲醛10mL，95%酒精85mL和冰醋酸5mL)中檔微波處理5min后;(2)脫水:放入盛有純丙酮10mL的微波專用容器里中檔微波照射5min×4，每次更換新液;(3)透明:用二甲苯浸泡5min;(4)浸蠟包埋:65℃石蠟浸泡5min后取出包埋，切片，厚4μm。試劑為常規(guī)HE、各類特殊染色所用試劑。切片平放在濕盒中的架子上，滴蘇木素染液覆蓋組織，中高檔微波照射40s，水洗，常規(guī)方法染伊紅，脫水封片。

2 結(jié)果

經(jīng)過微波進(jìn)行脫水后組織切片具有組織結(jié)構(gòu)清晰，切片厚薄、染色均勻、背景無氣泡、顏色鮮艷、細(xì)胞變形小、切片完整等特點(diǎn)，對(duì)比度好，無脫片現(xiàn)象，并可明顯縮短整個(gè)制片過程。甲級(jí)片率在50%以上，沒有丙級(jí)切片。見封三圖7、8。

3 討論

組織標(biāo)本需經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟等程序后才能進(jìn)行石蠟包埋切片，普通情況下需時(shí)15～20h。染色過程時(shí)間過長(zhǎng)，直接導(dǎo)致脫片率變高。有些患者在手術(shù)過程中需進(jìn)行快速病理診斷，以決定手術(shù)的方式和范圍。冷凍切片是目前最常用的快速切片方法，但冷凍切片機(jī)價(jià)格較高，同時(shí)還需要冷凍包埋劑，切片費(fèi)用也相應(yīng)較高。

微波是一種高頻電磁波，頻率為30～30000MHz，波長(zhǎng)在1～10000mm之間，可以顯著提高分子的運(yùn)動(dòng)速度，帶動(dòng)極性分子彼此之間作180度的超高速震動(dòng)，分子間的相互碰撞產(chǎn)生均勻一致的摩擦熱，而使組織細(xì)胞的化學(xué)反應(yīng)加速，增加細(xì)胞的滲透性和溶劑分子的穿透力，促進(jìn)了試劑在組織內(nèi)的化學(xué)擴(kuò)散。低強(qiáng)度微波范圍內(nèi)可以很快地影響疏水性相互作用，氫鍵和范德華力促使抗原抗體分子牢固結(jié)合。20世紀(jì)70年代初，國(guó)外就有學(xué)者嘗試在組織固定過程中利用微波進(jìn)行組織處理。隨著微波技術(shù)在病理領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛，目前已在組織處理、組織化學(xué)染色、免疫組化抗原修復(fù)、電鏡制樣等方面得到應(yīng)用[1]。微波技術(shù)主要是根據(jù)微波能發(fā)射高頻能量，組織經(jīng)微波輻射后會(huì)加速內(nèi)部分子間的相互碰撞，加快組織固定、脫水等過程，使溶劑分子更快進(jìn)入組織內(nèi)部，提高染色質(zhì)量，達(dá)到快速處理組織的目的，使病理技術(shù)工作的效率大大提高。應(yīng)用微波的熱效應(yīng)和高頻電磁波作用，使某些被封閉的抗原決定簇得以重新暴露，并打開蛋白質(zhì)間交聯(lián)鍵，使標(biāo)記敏感性明顯提高。微波可很好地保護(hù)組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，克服了常規(guī)染色法中溫度高、時(shí)間長(zhǎng)和組織易收縮、脫片等現(xiàn)象。

我們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中，認(rèn)為微波輻射比較適用于病理組織特殊染色中，在組織特殊染色過程中應(yīng)用微波照射，將大大縮短反應(yīng)時(shí)間，從而加快了組織特殊染色過程。無論是石蠟切片還是樹脂包埋切片的特殊染色，都能在微波作用下加速。微波除了能大大減少染色時(shí)間外，還可減少切片的非特異性沉淀，從而使得染色背景變得干凈。而且效果好，易掌握，對(duì)急性、疑難病例也有較大的定性價(jià)值。另外對(duì)病原體染色時(shí)，用640W的微波照射30～60s，還能起到殺死病原體的作用，從而減少對(duì)人的污染[2]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微波特殊染色，從各個(gè)方面都優(yōu)于未經(jīng)微波處理的切片。但在應(yīng)用微波的過程中也要嚴(yán)格控制微波的溫度，因?yàn)闇囟冗^高會(huì)破壞抗體，影響標(biāo)記效果。同時(shí)由于各器官組織材料自身特點(diǎn)不一，電子密度也不完全相同，使用的時(shí)間也不完全相同，筆者認(rèn)為時(shí)間以15～20min為宜，不可超過25min。加蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕，盡量避免產(chǎn)生氣泡，切忌加壓，使組織與蓋玻片間能保持一定量的抗體液。

綜上所述，本方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、節(jié)省時(shí)間、染色效果穩(wěn)定可靠、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，所需設(shè)備微波爐在病理技術(shù)中應(yīng)用范圍廣，價(jià)格也遠(yuǎn)較冰凍切片機(jī)和超聲波組織處理儀低廉，對(duì)于各種組織不同抗體的免疫組織化學(xué)的臨場(chǎng)應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)室研究有實(shí)用價(jià)值，適合在病理科尤其是基層單位開展。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 顧霞，魏明潔. 快速微波免疫組化染色技術(shù)在臨床病理中的應(yīng)用[J]. 吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，29(1):12-13.

[2] 楊楓. 微波輻射技術(shù)在病理組織特殊染色的應(yīng)用[J]. 中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008，2(12):2.

(收稿日期:2010-01-14)