Skp2和P27在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義

[摘要] 目的 研究細胞S期激酶相關蛋白Skp2和P27蛋白在非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的表達，及其與非小細胞肺癌各項臨床病理指標的關系。方法 應用免疫組化S-P法檢測82例非小細胞肺癌和20例正常肺組織中Skp2和P27蛋白的表達情況，同時結合其臨床資料進行統計學分析。結果 在非小細胞肺癌組織中Skp2蛋白表達的陽性率為48.78%，顯著高于正常肺組織;非小細胞肺癌組織中P27蛋白表達的陽性率為42.68%，顯著低于正常肺組織。Skp2和P27的表達與腫瘤的分化程度高低、淋巴結轉移與否及TNM分期有關(P<0.05)，但與性別、年齡、組織學類型無關(P>0.05)，非小細胞肺癌組織中Skp2表達與P27表達呈顯著負相關(P<0.05)。結論 非小細胞肺癌組織中Skp2蛋白表達與P27降解有關，提示這兩種蛋白的檢測可能成為非小細胞肺癌的早期診斷、評價其惡性程度及判斷預后的重要指標之一。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌(NSCLC); Skp2; P27; 免疫組化

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)13-08-03

Expression and Clinical Significance of Skp2 and P27 in Non-small Cell Lung Cancer

LIU Dong XIAO Pei WANG Mingyao LI Yi

Department of Pathology，Liaoning Province Tumor Hospital，Shenyang 110042，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the expression of S-phase kinase-associated protein 2 and P27 in non-small cell lung cancer(NSCLC) and their relationship with clinicpathological characters. MethodsThe expression of Skp2 and P27 was evaluated by immunohisto- chemical staining(S-P) in 82 cases of primary NSCLC and 20 cases of normal lung tissue in control group，and the clinical data were analyzed. ResultsThe expression rate of Skp2(48.78%) in NSCLC was significantly higher than that in normal lung tissue(10.00%). The expression rate of P27(42.68%) in NSCLC was significantly lower than that in the normal lung tissue(90.00%). In the NSCLC group，the expression of Skp2 and P27 was correlated with the histological differentiation，lymph node metastasis and clinical stage(P<0.05). There was no correlation of the Skp2 and P27 expression with sex，age or histological subtype(P>0.05). The Skp2 expression was negatively correlated with the P27 expression(P<0.01). ConclusionThe Skp2 expression may be correlated with the degeneration of P27 in NSCLC，suggesting that the detection of the two proteins of Skp2 and P27 may be an important marker for the early diagnosis of NSCLC and the evaluation of its m alignancy degree and prognosis.

[Key words]Non-small cell lung cancer; Skp2; P27; Immunohistochemistry

腫瘤是一種細胞周期調控平衡紊亂性疾病，S期激酶相關蛋白2(S-phase kinase associated protein2，Skp2)是在細胞周期研究中發現的一種F-Box蛋白，通過作用靶蛋白如cyclins、CDKIs和beta-catenin泛素化來調節細胞周期、免疫反應、信號轉導及進化進程[1]。磷酸化的細胞周期抑制蛋白P27是通過泛素化蛋白酶體途徑進行降解，從而導致細胞周期調節出現失控。肺癌是當前世界最常見的惡性腫瘤之一，本文通過免疫組織化學S-P法對82例非小細胞肺癌組織中Skp2、P27蛋白進行檢測及分析，從而揭示其臨床病理意義及兩者的相關性。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

非小細胞肺癌組織標本均取自遼寧省腫瘤醫院2003～2004年間經外科手術切除的組織存檔蠟塊(術前均未行放、化療和免疫治療)，本組病例共82例，年齡42～74歲，平均年齡57.8歲，其中男性58例，女性24例。按WHO(2004)呼吸系統組織學分類和TNM進行分型和分期，其中鱗癌44例，腺癌38例;有淋巴結轉移43例，無淋巴結轉移39例;Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期47例;高-中分化者50例，低分化者32例。20例正常肺組織同時收集作為對照研究。

1.2 實驗方法

收集的組織標本作4μm厚連續切片，分別進行免疫組化染色。采用免疫組化S-P法，DAB顯色，用PBS代替一抗作為陰性對照，用已知的陽性非小細胞肺癌切片作為陽性對照，操作步驟按照S-P試劑盒說明書進行。主要試劑鼠抗人Skp2、P27單克隆抗體及SP試劑盒均為即用型，購自北京中杉金橋生物有限公司。

1.3 結果判定

Skp2、P27蛋白表達均以細胞核內出現棕黃色顆粒作為陽性，參照有關文獻。

1.4 統計學處理

采用χ2 檢驗及計數資料的相關性分析，全部數據均采用統計軟件SPSS10.0分析處理。P<0.05定為統計學差異有顯著性。

2 結果

2.1 Skp2和P27在正常肺組織和非小細胞肺癌中的表達情況

正常肺組織中Skp2表達2例(10.00%)，而在NSCLC組織中表達40例(48.78%)，兩者之間差異有統計學意義(χ2=9.98，P<0.05)。正常肺組織中P27表達18例(90.00%)，而在NSCLC組織中表達35例(42.68%)，兩者之間差異有統計學意義(χ2=14.42，P<0.05)，見表1及封三圖5～8示。

2.2 肺癌組織中Skp2和P27陽性表達與臨床病理的關系

Skp2的陽性表達與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移與否及TNM分期有明顯相關性，與性別、年齡、組織學類型無相關性(P>0.05)。低分化組陽性率(71.88%)明顯高于高中分化組(34.00%)(P<0.05);淋巴結轉移組陽性率(65.12%)顯著高于淋巴結陰性組(30.77%)(P<0.05);臨床Ⅲ～Ⅳ期陽性率(65.96%)明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(25.71%)(P<0.05)。而P27陽性表達也與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移與否及TNM分期有明顯相關性，與性別、年齡、組織學類型無相關性，陽性率低分化組(21.88%)明顯低于高中分化組(56.00%)，淋巴結無轉移組陽性率(64.10%)顯著高于有淋巴結轉移組(23.26%)(P<0.05)，TNM Ⅲ～Ⅳ期陽性率(25.53%)明顯低于Ⅰ～Ⅱ期(65.71%)(P<0.05)。見表2。

2.3 Skp2和P27在非小細胞肺癌中表達的相關性

在非小細胞肺癌組織中，Skp2與P27表達均陽性者9例，均陰性者16例;Skp2陽性，P27陰性者31例;Skp2陰性，P27陽性者26例，經統計學分析兩者之間有相關性(χ2=13.00，P<0.05)。見表3。

3 討論

隨著分子生物學、免疫學研究的不斷深入，現在認為腫瘤的發生無論何種原因，其最終均表現為細胞周期調控機制紊亂，細胞的正性因子表達增強或負性因子表達減弱，導致細胞的失控性生長。

Skp2通過熒光原位雜交證實定位于5p13染色體，相對分子質量約為45×103，Skp2晶體結構由F-box序列、“Linker”序列、蛋白與蛋白相互作用模塊如亮氨酸重復序列結構域(LRR)依次連接構成[1]。Skp2可與細胞周期素A-細胞周期素依賴性激酶2復合體相互作用，調控G1-S轉化[2]。研究發現，Skp2表達與多數惡性腫瘤發生、進展、轉移及預后有密切關系，與陰性惡性腫瘤比較，陽性表達者進展快，易發生轉移和復發，同時預后差[3，4]。本研究顯示，Skp2在NSCLC組中的陽性率為48.78%，而在肺正常組織中的陽性率為10.00%，低分化組、有淋巴結轉移組、臨床Ⅲ～Ⅳ期的Skp2陽性率明顯高于高中分化組、無淋巴結轉移組及臨床Ⅰ～Ⅱ期，結果與文獻報道較一致，提示Skp2的陽性表達與非小細胞肺癌的發生、進展、轉移及預后有密切關系，其可能是評估非小細胞肺癌預后的重要生物學指標。

P27是細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑家族中重要的一員，作為細胞周期的負性調控因子，被認為是一種抑癌基因，可直接抑制cyclin-CDK復合物的生物學活性，從而阻止細胞通過G1期到S期轉換的“關卡”。近年研究發現P27表達水平與惡性腫瘤發生及預后有密切關系[5-7]。本組資料表明，P27在非小細胞肺癌組織中陽性表達率為42.68%，而在肺正常組織中的陽性率為90.00%，低分化組、有淋巴結轉移組、臨床Ⅲ～Ⅳ期的P27陽性率明顯低于高中分化組、無淋巴結轉移組及臨床Ⅰ～Ⅱ期，這表明P27在非小細胞肺癌中的表達降低與肺癌的惡性生物學行為、腫瘤細胞的發生發展以及侵襲密切相關。

另外，在本實驗中，Skp2與P27蛋白表達強度呈明顯負相關，提示在非小細胞肺癌的進展過程中，Skp2蛋白表達的上調可能通過泛素-蛋白酶體途徑導致P27蛋白表達減少，使其不能有效發揮細胞周期負調控因子的抑癌作用，使得癌細胞具有更高的侵襲轉移能力，這與Dong等的結論相符[8]。然而本實驗82例非小細胞肺癌中Skp2和P27蛋白同時表達為陽性的有9例，同時表達為陰性的有16例，說明除了Skp2介導P27的泛素化降解外，可能還有其他機制同時參與了P27表達的調控。

[參考文獻]

[1] Schulman BA，Csrrano AC，Jeffrey PD，et al. Insights into SCF ubiquitin ligases from the structure of the Skp1-Skp2 complex[J]. Nature，2000，408(6810):381-386.

[2] Harada K，Supriatno，Kawashima Y，et al. Down-regulation of S-phase kinase associated protein 2(Skp2)induces apoptosis in oral cancer cells[J]. Oral Oncol，2005，41(6):623-630.

[3] Shigemasa K，Gu L，Obrien TJ，et al. Skp2 overexpression is a prognostic fator in patients with ovarian adenocarcinoma[J]. Clin Cancer Res，2003，9(5):1756-1763.

[4] Li JQ，Wu F，Masaki T，et al. Correlation of Skp2 with carcinogenesis，invasion，metastasis，and prognosis in colorectal tumors[J]. Int J Oncol，2004， 25(1):87-95.

[5] Tigli H，Buyru N，Dalay N. Molecular analysis of the p27/kip1 gene in breast cancer[J]. Mol Diagn，2005，9(1):17-21.

[6] Motti ML，Califano D，Troncone G，et al. Complex regulation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27kip1 in thyroid cancer cells by the P13K/AKT pathway:regulation of p27kip1 expression and localization[J].Am J Pathol，2005，166(3):737-749.

[7] Kudo Y，Kitajima S，Ogawa I，et al. Down regulation of Cdk inhibitor p27 in oral squamous cell carcinoma[J]. Oral Oncol，2005，41(2):105-116.

[8] Dong Y，Sui L，Watanabe Y，et al. S-phase kinase-associated protein 2 expression in laryngeal squamous cell carcinomas and its prognostic implications[J]. Oncol Rep，2003，10(2):321-325.

(收稿日期:2010-03-21)